Nicht-invasive Probenahme von Schleimhaut-Flüssigkeit für die Quantifizierung von In Vivo oberen Atemwegen immun-Mediator-Level

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine nicht-invasive Technik für die Entnahme von ungestörten Schleimhaut Flüssigkeit aus den oberen Atemwegen. Es kann verwendet werden, die Quantifizierung der in Vivo -Level von Protein Mediatoren wie Zytokine und Chemokine, bei Patienten aller Altersgruppen durchführen.

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt nicht-invasive Probenahme ungestört oberen Atemwegen Schleimhaut Flüssigkeit. Es beschreibt auch die Extraktionsverfahren vor der Analyse von immun Mediatoren in Fluid Eluate für die Untersuchung der Atemwege topische immun Signatur, ohne die Notwendigkeit einer Stimulation-Verfahren (oft durch andere Techniken verwendet). Die Schleimhaut-Flüssigkeit wird auf einem Streifen Filterpapier aufgenommen am vorderen Teil der unteren Nasenmuschel und Links für 2 min der Absorption. Analyten aus der Filterpapiere eluiert werden, und die extrahierten Protein-basierten Eluate werden durch eine Electrochemiluminescence-basierte Immunoassay, zulassend die hochempfindlichen Quantifizierung von Low und high - level Analyten in der gleichen Probe analysiert. Wir maßen die in Vivo -Level 20 vorausgewählten immun Mediatoren, die im Zusammenhang mit spezifischen immunen Signalwege in der Schleimhaut der oberen Atemwege, aber die Technik ist nicht beschränkt auf, dass bestimmte Panel oder Sampling-Website. Die Technik wurde zuerst in 7-Year-Old Kinder aus dem Kopenhagen Prospektivstudien über Asthma im Kindesalter₂₀₀₀ (COPSAC₂₀₀₀) Kohorte mit allergischer Rhinitis umgesetzt. Er diente danach in der Längsrichtung COPSAC₂₀₁₀ Geburt Kohorte, abgetastet, 1 Monat, 2 Jahre und 6 Jahre alt und in Fällen von akuten respiratorischen Symptomen. Erhielten wir erfolgreich und analysierten Proben von 620 (89 %) von 700 1-Monat-alten Kindern, ein paar Proben waren unterhalb der Assay-Nachweisgrenze (als der Median (Inter Quartil Range (IQR)) berichtet. Die Anzahl der Proben unter der Nachweisgrenze (d.h. von 0 auf den Sollwert für die untere Grenze der Erkennung) für jeden Vermittler war 29 (7,25-119,5). Diese Technik ermöglicht die Quantifizierung der in Vivo Atemwege Schleimhaut immun Profil von Geburt, längs aufgebracht werden und auf Studien über die Wirkung von Genetik und frühes Leben Umwelteinflüsse, Pathophysiologie, Endotyping und Überwachung von Erkrankungen der Atemwege, Entwicklung und Evaluierung neuer Therapeutika angewendet werden kann.

Einleitung

Die Flüssigkeit der Schleimhaut der Nase macht sich der flüssige Teil des Systems der oberen Atemwege. Es besteht aus einer komplexen Matrix von Mediatoren aus dem Wechselspiel zwischen dem Epithel und der immunen Zellen, aus denen sich die erste Linie der Verteidigung gegen eindringende Mikroorganismen abgeleitet. Die Nasenschleimhaut ist leicht zugänglich, und es gibt eine starke funktionale und immunologische Beziehung zwischen der Nase und Bronchien¹. Dieses Fach ist von besonderem Interesse in Bezug auf Krankheiten der Atemwege, die häufig in der Kindheit, wie Asthma und allergische Rhinitis, sondern auch zu einer Reihe von anderen Erkrank....

Protokoll

Die Studien wurden im Einklang mit den Leitprinzipien der Deklaration von Helsinki. Genehmigungen von der Ethik-Kommission für Kopenhagen (KF 01-289/96 für COPSAC₂₀₀₀ ) und H-B-2008-093 COPSAC₂₀₁₀und der dänischen Datenschutzbehörde stammen, und schriftliche Einwilligung wurde von beiden Elternteilen jedes Fach vor der Einschreibung.

1. Versuchsaufbau

1. Verwenden Sie Filter Papierbögen (faserige hydroxylierten Polyester Bettwäsche, siehe die Tabelle der Materialien)^6,7.
   1. Schneiden Sie Streifen 3 x 15 mm in der Größe für ein 1 Monat altes Kind und....

Ergebnisse

Grundlegende Merkmale der Atemwegs-Immunprofile:
Vollständige Daten zu den Spiegeln von entzündungsfördernden Mediatoren in der Schleimhaut der oberen Atemwege im Alter von 1 Monat wurden bei 620 (89 %) der 700 Kinder erhoben, die in die COPSAC₂₀₁₀-Kohorte eingeschlossen wurden. Zehn Neugeborene wurden eingeschlossen, bevor die Technik etabliert war, und 19 nahmen nicht am Besuch im Alter von 1 Monat teil. Zusätzlich wurden 47 Proben ausgeschlossen, da sie .......

Diskussion

Mit der hier vorgestellten Technik konnten wir das in Vivo obere Atemwege Schleimhaut immun Profil bei Kindern bereits ab 1 Monat alt, zu bestimmen, die nicht zuvor getan wurde. Wir haben beobachtet, dass das Vorhandensein von spezifischen Atemwege Bakterien und Picornaviren^7,11, sowie andere Pre und perinatale Expositionen im Atemweg immun Profil von den Neugeborenen gespiegelt wurden. Darüber hinaus haben wir diese Atemwege immun Profildaten studieren .......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Faserige Platten aus hydroxyliertem Polyester	Accuwik Ultra	SPR0730	Filterpapier
Milliplex Assay Buffer	Millipore	L-AB	Puffer
Speicherplatten mit geringer Proteinbindung	Thermo Scientific	CLS8161	Platten
Protease-Inhibitor	Roche	11873580001	kompletten EDTA-freien Protease-Inhibitor-Cocktail-Reader
für Multi-Spot-Platten	Mesoscale	NA	Sector Imager 6000
Assays	Mesoskaliger		humaner 10-Plex-TH1/TH2-Zytokin-Assay und 9-Plex-Chemokin-Assay sowie Singleplex IL-17A, TGF-β 1 und TSLP. Eine Beschreibung finden Sie online auf www.mesoscale.com