Ein einheitlicher methodischer Rahmen für die vestibuläre Schwannomforschung

Lukas D. Landegger; Jessica E. Sagers; Sonam Dilwali; Takeshi Fujita; Mehmet I. Sahin; Konstantina M. Stankovic

doi:10.3791/55827

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Methodenartikel

Ein einheitlicher methodischer Rahmen für die vestibuläre Schwannomforschung

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DOI:

10.3791/55827

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20. Juni 2017

Lukas D. Landegger^*¹^,²^,³ , Jessica E. Sagers^*¹^,⁴ , Sonam Dilwali¹^,⁴ , Takeshi Fujita¹^,² , Mehmet I. Sahin¹^,² , Konstantina M. Stankovic¹^,²^,⁴

¹Eaton Peabody Laboratories, Department of Otolaryngology, Massachusetts Eye and Ear, ²Department of Otolaryngology, Harvard Medical School, ³Department of Otolaryngology, Vienna General Hospital, Medical University of Vienna, ⁴Program in Speech and Hearing Bioscience and Technology, Harvard Medical School

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ziel dieses Protokolls ist es, die Erfassung und Verarbeitung von humanen chirurgischen Proben für mehrere nachgeschaltete Anwendungen im vestibulären Schwannom und Schwann Zellforschung zu skizzieren.

Zusammenfassung

Vestibuläre Schwannome sind die häufigsten Neubildungen des Cerebellopontinwinkels, was 6-8% Prozent aller intrakraniellen Wucherungen ausmacht. Obwohl diese Tumore einen sensorineuralen Hörverlust bei bis zu 95% der betroffenen Personen verursachen, bleiben die molekularen Mechanismen, die diesem Hörverlust zugrunde liegen, unklar. Dieser Artikel beschreibt die Schritte in unserem Labor, um die Sammlung und Verarbeitung von verschiedenen primären menschlichen Gewebe Proben für nachgeschaltete Forschungs-Anwendungen integral in die Studie der vestibulären Schwannome zu erleichtern. Speziell beschreibt diese Arbeit einen einheitlichen methodischen Rahmen für die Sammlung, Verarbeitung und Kultur von Schwann und Schwannomzellen aus chirurgischen Proben. Hierbei handelt es sich um parallele Verarbeitungsschritte, die für die aktuelle Forschung als wesentlich erachtet werden: die Sammlung von Tumor- und Nervensekreten, die Erhaltung der RNA und die Extraktion von Protein aus gesammelten Geweben, die Fixierung von Gewebe zur Vorbereitung von Abschnitten,D die Exposition von primären menschlichen Zellen zu Adeno-assoziierten Viren für die Anwendung auf Gentherapie. Darüber hinaus hebt diese Arbeit den translabyrinthischen chirurgischen Ansatz hervor, um diesen Tumor als eine einmalige Gelegenheit zu erhalten, menschliches sensorisches Epithel aus dem Innenohr und der Perilymph zu erhalten. Tipps zur Verbesserung der experimentellen Qualität werden zur Verfügung gestellt und häufige Fallstricke hervorgehoben.

Einleitung

Vestibuläre Schwannome (VSs) sind die häufigsten Neubildungen des Cerebellopontin-Winkels, diagnostiziert in 1 bei jedem 100.000 Individuen. Obwohl nicht-metastatisch, diese Tumoren stark beeinflussen die Lebensqualität eines Patienten ¹ ^, ² ^, ³ ^, ⁴ ^, ⁵ ^, ⁶ . Betroffene Personen leben gewöhnlich mit Hörverlust, Tinnitus und einem Gefühl der akustischen Fülle. Die Symptome werden zunehmend schwächenden, wenn der Tumor wächst, was Balanceprobleme, Gesichtslähmung und Beeint....