Hier stellen wir ein Protokoll vor, um die Verwendung von Neurotrophin 4 (NTF4) systemisch und direkt zu modulieren Rattenalterung Larynx Muskeln zu beschreiben.
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Methodenartikel
Subkutane Neurotrophin-4-Infusion unter Verwendung von Osmotik-Pumpen oder direkter Muskel-Injektion verbessert die Ratten-Larynx-Muskeln
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Kehlkopfdysfunktion bei älteren Menschen ist eine Hauptursache für Behinderung, von Stimmungsstörungen bis hin zu Dysphagie und Verlust von Atemwegsschutzreflexen. Nur wenige, wenn überhaupt, gibt es Therapien, die eine altersbedingte Larynxmuskel-Dysfunktion erreichen. Neurotrophine sind an der Muskelinnervation und Differenzierung von neuromuskulären Übergängen (NMJs) beteiligt. Es wird angenommen, dass Neurotrophine die neuromuskuläre Transmission durch Erhöhung der Neurotransmitterfreisetzung verstärken. Die neuromuskulären Kreuzungen (NMJs) werden kleiner und weniger reich an alternden Ratten-Larynxmuskeln, mit Anzeichen einer funktionalen Denervation. Wir untersuchten die Auswirkungen von NTF4 auf zukünftige klinische Anwendung als Therapeutikum zur Verbesserung der Funktion bei der Alterung menschlicher Larynxmuskulatur. Hier stellen wir das detaillierte Protokoll für die systemische Anwendung und die direkte Injektion von NTF4 zur Verfügung, um die Fähigkeit des alternden Ratten-Larynxmuskels zu untersuchen, um in Reaktion auf NTF4-Applikation umzuwandeln. Bei dieser Methode erhielten Ratten entweder NTF4 entweder systemisch über oSmotische Pumpe oder durch direkte Injektion durch die Stimmlippen. Larynxmuskeln wurden dann seziert und für die histologische Untersuchung der Morphologie und der altersbedingten Denervation verwendet.
Einleitung
Larynx Muskeln kontrahieren schnell und konsequent und sind anfällig für die nachteiligen Auswirkungen des Alterns. Diese ständige Aktivität wird dazu gedacht, zu Stimmproblemen oder Dysphagie bei Personen über 65 Jahre im Alter von 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 zu helfen. Mehrere molekulare und pathophysiologische Mechanismen tragen zu dieser altersbedingten Dysfunktion bei. Diese Mechanismen können die Umgestaltung von Kehlkopfschleimhaut,....
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Protokoll
Verwenden Sie männliche Fischer 344-Brown Norwegen Ratten in 6 und 30 Monate alt für dieses Protokoll. Ratten wurden von der National Institute of Aging Nagetier Kolonie erhalten. Wir haben Ratten für diese Studie verwendet, weil die Struktur des Rattenkehlkopfes ähnlich der des Menschen ist, funktionell für den Atemwegsschutz und Spezies-spezifische Vokalisationen dient Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit der PHS-Politik auf humane Pflege und Verwendung von Labor-Tiere durchgeführt, Der NIH-Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren und das Tierschutzgesetz (7 USC ff.); Wurde das Tiernutzungsprotokoll vom Institutional Animal Care and Use Committe....
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Ergebnisse
Die Ratten wurden nach 2 Wochen osmotischer Pumpeninfusion oder 1 Woche nach Direkteinspritzung von NTF4 euthanasiert. Larynge wurden geerntet, in Kryoschutzmittel (30% Saccharose und 70% phosphatgepufferte Kochsalzlösung) gegeben und dann seriell in 10 & mgr; m Breite mit einem Kryostat geschnitten. Alterung der Larynxmuskulatur wird durch die Verabreichung von NTF4 25 beeinflusst. Neben der jungen und alten Ratte verglichen wir die injizierte und nicht injiz.......
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Diskussion
Larynxmuskulatur ist anfällig für die ungünstigen Auswirkungen des Alterns. Frühere Studien haben Veränderungen in der Alterung der Kehlkopfmuskulatur gezeigt, die Veränderungen in der Fasergröße, die Gesamtzahl der Fasern, die Regenerationsfähigkeit, die NMJ-Größe und die Mengenänderungen zusätzlich zu den Variationen der kontraktilen Funktion und der Myosin-Isoformverschiebungen 4 , 11 , 27 , 30
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde unterstützt durch Stipendien des Nationalen Instituts für Taubheit und andere Kommunikationsstörungen (R21DC010806 bis CAM und JCS und R01DC011285 bis CAM).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Neurotrophin 4 | Pepro Tech | 450-04 | 200 ng in 50 μ; L |
| Alzet Osmotische Pumpe | DURECT Corporation | 2001D | |
| 30 > Endoskop | Stoltz | 61029D | |
| 50 mm 30 Gauge 100-μ L Spritze | Hamilton | 84850 und 201812 | |
| Kochsalzlösung (Natriumchloridlösung) | Sigma-Aldrich | S8776 | |
| Ketaminhydrochlorid | Henry Schein | 56344 | |
| Xylazinhydrochlorid | Henry Schein | 33198 | |
| 25 G 5/8 Nadel | Becton-Dickinson | 305901 | |
| 1 mL Spritze | Becton-Dickinson | ||
| Augensalbe | Henry Schein | 8897 | |
| Haarschneidemaschine | Oster | 44-018 | |
| Ethanol | Decon | 2716 | |
| Jod (Betadin) | Purdue Pharma L.P. | ||
| Heizkissen | Sunbeam | 731-5 | |
| 5-0 Nylon Nahtfaden | AD Surgical | PMN-518R6 | |
| Crile Hämostat | Fine Science Tools | 13005-14 | |
| zarte Nahtbindezange | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 49756 | |
| Carprofen | Merritt Veterinary Supplies | 148700 | |
| antibiotische Salbe | Henry Schein | 57110 | |
| Acepromizin Aceproject | Henry Schein | 3845 | |
| Isofluran Isothesie | Henry Schein | 50033 | |
| Induktionsbox (Anästhesiebox) | Harvard Apparatus | 50-0116 | |
| Sauerstoff-Drucktank | Scott Gross | UN1072 | |
| Plattform aus Plexiglas | Small Parts Inc (Amazon) | ||
| Pinzette mit Gummispitze | Fine Science Tools Gummi | 11075-00 | |
| Flüssiggummi für Pinzetten über | Lowe's | 42518 | |
| Kunststoffspekula (BD-Spritze auf Länge geschnitten) | Becton-Dickinson | 309659 | |
| Halogenlichtquelle Nashorn-Kehlkopf Stroboskop | Kay-Pentax | RLS 9100 B | |
| Videorekorder | Kay-Pentax | ||
| Saccharose | Sigma-Aldrich | S0389-500G | |
| phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| Kryostat Mictotom HM525 | Thermo Scientific | HM 525 | |
| Kieme 1 Hämatoxylin | VWR | 10143-142 | |
| Shandon Eosin-Y alkoholischer | Thermo Fisher Scientific | 6766007 | |
| Anti-Natrium-Kanal Nav1.5 Antikörper, hergestellt in Kaninchen | Sigma-Aldrich | S0819 | |
| Texas red-X Phalloidin | Sigma-Aldrich | T7471 | |
| Alpha-Bungarotoxin Alexa Fluor 488 Konjugat | Thermo Fisher Scientific | B-13422 | |
| Anästhesie für Kleintiere | Maschine Smiths Medical | CDS 9000 |
Referenzen
- Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
- Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
- Gay, E. ....
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Nachdrucke und Genehmigungen
