Summary
Her, beskriver vi en simpel hale vene blod-prøveudtagningsmetode i ikke-bedøvede rotter ved hjælp af et vakuum rør-udsugning. Denne metode reducerer risikoen for direkte eksponering for blod og forenkler at tage flere prøver fra en enkelt venepunktur.
Abstract
Blod kan indsamles fra rotter i et antal stikprøver placeringer. For eksempel, er hale vene en overlegen placering for udtagning af blodprøve. Men hale vene er tynd, så at det er nogle gange svært at punktere. Derudover hale vene har lav blodgennemstrømningen og kræver en lang Prøvetagningstiden at få tilstrækkeligt blod. Denne rapport beskriver en simpel blod prøveudtagningsmetode, vakuum blod indsamlingsmetode, som normalt bruges til at få blodprøver fra patienter, her bruges til ikke-bedøvede rotter. 22 G sommerfugl nål tip blev indsat i en af laterale hale årerne ca 2-3 cm fra spidsen af halen i en vinkel på ca. 20°, og blodet blev indsamlet i vakuum collection tube ved at indsætte gummi slutningen af sommerfugl nålen i va cuum blod collection tube. De nuværende eksperimentelle resultater viser, at succesraten var 95% i den eksperimentelle gruppe og 90% i gruppen begynder. Succesraten og punktering gange var ens mellem to grupper. Prøveudtagning varighed var betydeligt kortere i den eksperimentelle gruppe i forhold til nybegynder gruppe. Afslutningsvis, er dette vakuum blod indsamlingsmetoden for sekventielle blod prøveudtagning fra hale vene af ikke - bedøvede rotter gennemførlige og nemme-hen til-lære, der kan tjene som et pålideligt alternativ til anden anvendes konventionelt blod stikprøver for rotter.
Introduction
Udtagning af blodprøve fra rotter er nødvendig for en lang række eksperimentelle undersøgelser. Teknikker til indsamling af blod fra rotten omfatter punktering af hjertet, retro-orbital plexus, halsfedt, saphenous vene, hale blodkar, halspulsåren, abdominal aorta og vena cava. De fleste teknikker (undtagen saphenous vene og hale blodkar punktering) kræver anæstesi1,2. Venerne af rotte-hale er rutinemæssigt punkteret for udtagning af blodprøve og vaskulære injektion. Efter behandling af halen med varmt vand, er blodkarrene dilaterede og egnet til manipulation, selv når rotter er bedøvede3.
Trods udvikling af nye og forbedrede teknikker til at få blodprøver i lille laboratorium dyr2, er det ikke altid let at få nok blod når prøvetagning fra små dyr. Den hale vene af rotter er en overlegen placering for blod prøveudtagning4. Men hale vene er tynde, således det er nogle gange svært at punktere og ville tage lang tid at få nok blod på grund af sin lave blodgennemstrømning. Indsamling via en vakuum ekstraktion tube system er en typisk metode i daglig klinisk praksis. Dette lukkede system for blod indsamler reducerer risikoen for direkte eksponering for blod og har gjort det nemmere at tage flere prøver fra en enkelt venepunktur5. Denne rapport beskriver en simpel hale vene blod-prøveudtagningsmetode i ikke-bedøvede rotter ved hjælp af vakuum ekstraktion tube system. Denne metode er nem at mestre og kan bruges til at få en stor mængde blod gentagne gange i rotter.
Protocol
Alle procedurer blev godkendt af Tongji Medical College Rådet på Animal Care Udvalget af Huazhong University of Science og Technology (Wuhan, Kina). Håndskriftet blev tilberedt efter ANKOMME (Animal forskning: rapportering af In Vivo forsøg) retningslinjer6.
1. dyrehold
- Bruge Sprague-Dawley (SD) rotter (n = 20, 10 hanner, 8 uger gamle, vejer 261 til 291 g, mener = 272.85 ±9.07 g) fra eksperimentelle dyr Center af Huazhong University of Science and Technology og vedligeholde rotter i overensstemmelse med retningslinjer for pleje og brug af Forsøgsdyr udgivet af os National Institute of Health (NIH publikation No.85-23, revideret 1996)
- Hus under standardbetingelser med fri adgang til fødevarer og drikkevand. Holde rotter i 530 cm2 bure med træ-barbering sengetøj. Hus to rotter i hvert bur. Holde alle bure åben værelse miljøet (ingen mikro-isoleret eller ventileret bure)
- Sikre personale involveret i den forsøgsplan jævnligt håndtere rotter.
- Vedligeholde stuetemperatur mellem 21 ° C og 23 ° C. Give satser den normale salt kost (0,3% NaCl) i hele undersøgelsen.
2. blod samling Procedure
Bemærk: Vakuum blod samling system består af en dobbelt spidser nålen [22 G (0,7 mm x 25 mm)], en plastik holder, og en serie af vakuumrør (2 mL) med gummipropper (figur 1).
- Placere rotten i en plastik fastholdende indehaveren og vaske hale med varmt (20-30 ° C) vand for at fjerne synlige snavs eller afføring. Mens en assistent holder halen i en udvidet holdning, tør hale med 70% ethanol, og rengør med gaze at gøre venen klart.
- Indsæt 22 G sommerfugl nål tip i en af laterale hale vener (omkring 5 mm) på en position ca. 2-3 cm fra spidsen af halen i vinkel på ca. 20 ° (figur 2). Indsamle blod ind i vakuum indsamling rør ved at indsætte gummi slutningen af sommerfugl nålen i vakuum blod collection tube (figur 3).
Bemærk: Maksimal samling blodvolumen er 1,2 mL7. - Efter indsamling, fjerne nål og forsigtigt lægge pres på webstedet punktering med gaze til 15-30 s til at stoppe strømmen af blod. Derefter, frigive rotte fra plast fastholdende indehaveren og vende tilbage rotten til sit bur.
- Bruge rør, der indeholder EDTA som en antikoagulans at indsamle blodplasma. Forsigtigt Vend røret flere gange at blande antikoagulans i blodet og placerer prøverne på is lodret.
- Der centrifugeres blod prøve indsamling rør i en nedkølet centrifuge på 2.000 x g i 10 min. til at adskille plasma eller serum.
- Uddrag af plasma/serum, pas på ikke for at forstyrre de røde og hvide blodlegemer lag. For at indsamle blod serum, bruge rør uden antikoagulans. Begge typer af prøven kan anvendes straks eller opbevares ved-80 ° C i op til et år.
Bemærk: Vellykket blod samling blev defineret som at opnå 1,2 mL blod hver gang. Maksimal punktering tid blev fastsat til tre forsøg, hvis den samlede blodvolumen var lavere end 1,2 mL efter den tredje punktering, var det defineret som en mislykket blod samling. Prøveudtagning varighed starter fra hale vene punktering til fjernelse af sommerfugl nålen efter blod samling. -
Indsamle blod to gange inden for to uger7.
- For at teste og kontrollere gennemførligheden af denne metode, skal du træne to medicinske studenter (begyndere) for 2 h før du udfører denne blod samling protokol. Bruge tyve rotter og udgyde blod fra 10 rotter af 2 erfarne karle (eksperimentelle gruppe) og fra 10 rotter ved de 2 medicinstuderende (nybegynder gruppe).
3. den statistiske analyse
- Express data som en gennemsnit ± standardafvigelse og analysere med SPSS statistiske 17. En α-værdi på 0,05 blev derfor valgt p < 0,05 blev anset for statistisk signifikant.
Representative Results
Prøveudtagning varighed, kropsmasse og blodvolumen samling af de to grupper
Blodet blev indsamlet fra 10 rotter (5 hanner) to gange inden for to uger i hver gruppe. Den gennemsnitlige kropsmasse i begge grupper var ens (272.00 ±9.66 g og 273.70 ±8.87 g). Prøveudtagning varighed var betydeligt kortere i den eksperimentelle gruppe i forhold til nybegynder gruppe (2,77 ±0.53 min vs 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabel 1).
Succes Vurder og punktere gange af to grupper
Succesraten var 95% (19/20) i den eksperimentelle gruppe og 90% (18/20) i gruppen begynder (p > 0,05). Punktering gange var ikke signifikant forskellig mellem de to grupper (1,50 ±0.61 min vs 1.85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabel 2). Disse resultater viser denne metode er nem at lære, og teknikken kunne nedkæmpes efter træning for 2 h.
Figur 1 : 2 mL vakuum blod collection tube (venstre); 22 G sommerfugl nål (center); plast fastholdende indehaveren (til højre). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Nål tip blev indsat i den laterale hale vene (omkring 5 mm) på position ca 2-3 cm fra spidsen af halen i vinkel på tilnærmelsesvis 20 °. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Vellykket venepunktur. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Eksperimenterende gruppe | Begynder gruppe | |||||||||
| Køn | Vægt (g) | Indsamlede blodvolumen (mL) | prøveudtagning varighed (min) | Køn | Vægt (g) | Indsamlede blodvolumen (mL) | prøveudtagning varighed (min) | |||
| E1-1 | mand | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | mand | 282 | 1.2 | 3.18 | |
| E1-2 | mand | 291 | 1.2 | 2,73 | B1-2 | mand | 282 | 1.2 | 2.18 | |
| E2-1 | mand | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | mand | 264 | 1.2 | 3,73 | |
| E2-2 | mand | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | mand | 264 | 1.2 | 2,47 | |
| E3-1 | mand | 267 | 1.2 | 2,73 | B3-1 | mand | 265 | 1.2 | 3,52 | |
| E3-2 | mand | 267 | 1,0 | 3,88 | B3-2 | mand | 265 | 1.2 | 2,53 | |
| E4-1 | mand | 263 | 1.2 | 2,41 | B4-1 | mand | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | mand | 263 | 1.2 | 2.52 | B4-2 | mand | 289 | 1.2 | 3.62 | |
| E5-1 | mand | 265 | 1.2 | 3,61 | B5-1 | mand | 277 | 1.2 | 3.48 | |
| E5-2 | mand | 265 | 1.2 | 2,42 | B5-2 | mand | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | kvinde | 285 | 1.2 | 3.33 | B6-1 | kvinde | 274 | 0,9 | 4.87 | |
| E6-2 | kvinde | 285 | 1.2 | 3,03 | B6-2 | kvinde | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | kvinde | 271 | 1.2 | 2,82 | B7-1 | kvinde | 268 | 1,0 | 3,93 | |
| E7-2 | kvinde | 271 | 1.2 | 2,42 | B7-2 | kvinde | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | kvinde | 268 | 1.2 | 1,93 | B8-1 | kvinde | 262 | 1.2 | 2,07 | |
| E8-2 | kvinde | 268 | 1.2 | 3,05 | B8-2 | kvinde | 262 | 1.2 | 3.67 | |
| E9-1 | kvinde | 273 | 1.2 | 2.52 | B9-1 | kvinde | 281 | 1.2 | 4.38 | |
| E9-2 | kvinde | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | kvinde | 281 | 1.2 | 4,57 | |
| E10-1 | kvinde | 261 | 1.2 | mod 1,82 | B10-1 | kvinde | 275 | 1.2 | 2,53 | |
| E10-2 | kvinde | 261 | 1.2 | 3.25 | B10-2 | kvinde | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| Gennemsnit | 2,77 | 3.28 | ||||||||
| Da-1: løbenummer af rotter i den eksperimentelle gruppe for samlingen første blod. | ||||||||||
| Da-2: løbenummer af rotter i den eksperimentelle gruppe for den anden indsamling. | ||||||||||
| Bn-1: løbenummer af rotter i gruppen begynder for samlingen første blod. | ||||||||||
| Bn-2: løbenummer af rotter i gruppen begynder for den anden indsamling. | ||||||||||
Tabel 1: Resultater af blod indsamlet i den eksperimentelle gruppe og gruppen nybegynder.
| Blod samling gange | Gennemsnitlige punktering gange | Én gang punktering | To gange punktere | Tre gange punktere | Mislykkedes | Succesrate | |
| Eksperimenterende gruppe | 20 | 1,50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95% |
| Begynder gruppe | 20 | 1.85 ±0.75 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90% |
| Én gang punktering: antallet af rotter med vellykket blod samling efter den første punktering | |||||||
| To gange punktering: antallet af rotter med vellykket blod samling efter den anden punktering | |||||||
| Tre gange punktering: antallet af rotter med vellykket blod samling efter den tredje punktering | |||||||
| Mislykkedes: antal rotter med mislykkedes blod samling efter den tredje punktering | |||||||
Tabel 2: Sammenligning af punktering gange og succesrate af eksperimentelle og nybegynder-gruppen.
Discussion
Denne rapport beskriver en nem-at-lære blod indsamlingsmetoden i rotter. Vores resultater viste, at denne metode er muligt for gentagne gange at indsamle en stor mængde af blod fra rotter. Desuden, denne metode kunne styres nemt med en kortsigtede indlæringskurve. Denne procedure kan udføres i ikke-bedøvede rotter og kun forårsager minimalt stress for dyrene.
Blod kan indsamles fra rotter i forskellige steder. Hale vene er en overlegen placering for blod prøveudtagning4. Men det er ikke altid let at få nok blodvolumen fra tynd og lav blood flow hale vene af rotter. Indsamlingssystem vakuum blod er normalt bruges til indsamling af blodprøver fra patienter i daglig klinisk praksis. Dette vakuum blod samling system er blevet brugt i patienter og forskning dyr for en lang tid8,9,10. Dette system består af et vakuum blod collection tube med silikone belagt slange væg og butterfly nål. Det var baseret på princippet om vakuum undertryk og giver mulighed for kontinuerlig tegningen af blod uden risiko for indsamling af blod, hvilket også reducerer risikoen for forurening og hæmolyse11. Mængden af blodprøve i kateteret er ca. 0,3 mL. Efter hæve nålen fra hale blodåre, vil blodet blokeret i kateteret strømme ind den indsamling vakuum rør på grund af vakuum. Denne metode er også gældende for at indsamle blod fra rotter vejer mindre end 100 g med brug af en mindre punktering nål.
Dette blod indsamlingsmetoden har flere fordele. Denne procedure kun forårsager minimal skade til rotter og blod samling kan udføres uden brug af anæstetika, således stressrespons og anæstesiologi indflydelse på blodprøven kan undgås. Vores observationer viste, at rotter blev stille i plastik fastholdende holderen under proceduren og der var ingen dødsfald under disse eksperimenter. For det andet, gentages blod samling, hver en eller to dage er muligt, som muliggør hyppige prøveudtagning af blod med en passende mængde til forskellige forskningsformål. Endelig, denne metode er nem at lære og var let masteret af begyndere efter en kort (2 h) læring periode, som angivet af den samme succesrate og punktering gange mellem grupperne eksperimentelle og nybegynder i denne betænkning. I en tidligere betænkning viste Lee et al. en lignende metode til prøveudtagning blod fra den laterale hale vene af rotte4. Vores metode er enklere end som rapporteret af Lee et al. 4 idet vi direkte indsætte punktering nålen i halen vene og anden enden af røret er direkte forbundet til vakuum rør til opsamling af blodet, uden brug af en ekstra sprøjte og manuel aspiration af blod og uden brug af ' mælk ING' vene til lette blodgennemstrømning. Indsamle blod med dette lukkede system reducerer chancen for blod forurening. Brug af plast fastholdende indehaveren også reducerer stress at rotten og letter fiksering af halen.
De følgende to trin er afgørende for vellykket anvendelse af denne metode. 1) udvide halen og undgå bevægelser af halen; 2) forsigtigt punktere vene i en vinkel på 20 ° at undgå punktering gennem venen og holde punktering kanyle i venen.
Afslutningsvis er den vedtagne vakuum blod indsamlingsmetode i rotter sikker, muligt og let at praksis. Denne metode gør det muligt for hyppige prøveudtagning af blod med en passende blodvolumen fremstillet af ikke-bedøvede rotter.
Disclosures
Forfatterne har intet at videregive
Acknowledgments
Forfatterne har ingen anerkendelser at gøre.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
- Brown, C. Blood collection from the tail of a rat. Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods. Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. J. Vis. Exp. (99), (2015).
- WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).
- Reynolds, B. S., et al. Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment. J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).
- Wiwanitkit, V. Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes. J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).
