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Methodenartikel

Ein Protokoll für die Messung von Cue Reaktivität in einem Rattenmodell der Kokain-Gebrauch-Störung

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DOI:

10.3791/55864

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18. Juni 2018

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1Center for Addiction Research, University of Texas Medical Branch, 2Institute for Translational Sciences, University of Texas Medical Branch, 3Mitchell Center for Neurodegenerative Diseases, University of Texas Medical Branch, 4Department of Neurology, University of Texas Medical Branch, 5Department of Pathology, University of Texas Medical Branch, 6Department of Pharmacology and Toxicology, University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Cue-Reaktivität ist konzipiert als Sensibilität für Hinweise im Zusammenhang mit Drogen Erfahrungen, die dazu beitragen, Begierde und Rückfall in abstinent Menschen. Cue Reaktivität ist bei Ratten durch Messung Aufmerksamkeits Ausrichtung auf Drogen-assoziierten Cues modelliert, die Ergebnisse in faszinierendem Ansatz Verhalten in einem Cue Reaktivität Test nach Selbstverwaltung und Abstinenz gezwungen.

Zusammenfassung

Kokain-Gebrauch-Störung (CUD) folgt eine Flugbahn des sich wiederholenden Selbstverwaltung, in denen zuvor neutrale Reize Incentive-Wert zu gewinnen. Cue Reaktivität, die Sensibilität für Hinweise, die zuvor im Zusammenhang mit Drogenkonsum Erfahrung, spielt eine herausragende Rolle im menschlichen verlangen während der Abstinenz. Cue Reaktivität kann als die Aufmerksamkeits Ausrichtung auf Drogen-assoziierten Cues beurteilt werden, die als faszinierendem Ansatz Verhalten in präklinischen und menschliche Studien messbar ist. Hierin beschreibt eine Bewertung der Cue Reaktivität bei Ratten ausgebildet, um Kokain selbst verabreichen. Kokain Selbstverwaltung paart sich mit der Präsentation der diskrete Signale, die als konditionierten Verstärker (d.h., Haus Licht, Anregung Licht, Infusion Pumpe klingt) fungieren. Nach einer Zeit der Abstinenz werden Hebel Pressen im Zusammenhang mit Kokain Selbstverwaltung durch die diskrete Signale zuvor gepaart mit Kokain Infusion begleitet als Cue Reaktivität gemessen. Dieses Modell eignet sich zu neurobiologischen Mechanismen Cue Reaktivität Prozesse sowie hinsichtlich um Pharmakotherapien Cue Reaktivität zu unterdrücken und ändern daher Rückfall Schwachstelle zu bewerten. Vorteile des Modells sind die translationale Relevanz und ihr Gesicht und vorausschauende Gültigkeiten. Die größte Einschränkung des Modells ist, dass der Cue Reaktivität Aufgabe nur selten durchgeführt werden kann und nur in kurzen Dauer verwendet werden dürfen (zB., 1 Std.), ansonsten startet Ratten, die Paarung der diskreten Cues mit dem Kokain Reiz zu löschen. Das Modell ist erweiterbar auf alle positiv verstärkenden Reiz gepaart mit diskreten Signale; Obwohl vor allem für Drogen, kann dieses Modell zukünftige Anwendungen in Bereichen wie Übergewicht, zu halten wo schmackhaft Essen Belohnungen als positiv verstärken Reize dienen kann.

Einleitung

Kokain-Gebrauch-Störung (CUD) folgt eine Flugbahn des sich wiederholenden Selbstverwaltung, bei denen zuvor neutrale Reize Incentive-Wert1zu gewinnen. Cue-Reaktivität ist die Empfindlichkeit auf Hinweise, die zuvor im Zusammenhang mit Drogen-Erfahrung, und es spielt eine wichtige Rolle im menschlichen Verlangens2,3,4,5. Das Risiko der Progression, CUD, sowie Rückfall während der Abstinenz, wird angenommen, dass höher bei Personen, die hohen Empfindlichkeit auf Droge verbundenen Hinweise6,7Ausdrücken. Ökologischen Zusammenhängen (z.B., Menschen, Gebäude, Musik-Genres) und diskrete Medikament verbundenen Reize (z.B. Utensilien) werden mit den Kokain-Belohnung in Verbindung gebracht; Exposition gegenüber diese Hinweise kann Veränderungen im Gehirn funktionelle Verknüpfung2,8,9 periphere Physiologie (z.B., Herzfrequenz, Hauttemperatur und Hautwiderstand) und Plastizität des Gehirns auslösen. ,10. In anderen Worten, aktiviert Re-Exposition gegenüber Kokain-assoziierten Signale limbische Corticostriatal Schaltungen konditionierte physiologischen und subjektiven Reaktionen hervorrufen, die begehrliche Ansatz (Drug-seeking) Verhalten11,12 fahren ,13,14,15.

Cue-Reaktivität gemessen mit funktionellen bildgebenden Untersuchungen ist prädiktiv Rückfall Sicherheitslücke in Fächern mit CUD16. Cue Reaktivität Messungen in Nager-Modelle dienen als ein Surrogat Maß für Rückfall Risiko und können für translationale Studien genutzt werden. So eine Pharmakotherapie, dass Cue Reaktivität bei Nagetieren möglicherweise sinkt nach vorne als Rückfall-Prävention Behandlung in klinischen Studien am Menschen durchgeführt. Präklinische Modellen mit den erforderlichen translatorischen Verdienst und prädiktive Gültigkeit sind besonders wichtig, da gibt es derzeit keine FDA-zugelassene Pharmakotherapien für CUD17.

Das Nagetier Selbstverwaltung-Verfahren ist der Goldstandard, translationale Modell mit prädiktive Gültigkeit für menschliche Drogenkonsum18 und von entscheidender Bedeutung für das Verständnis der molekularen und physiologischen Prozessen zugrunde liegenden CUD. Antwort -selbständige Lieferung von Kokain ergeben sich unterschiedliche Verhaltens-, Molekulare und neurochemischen Wirkungen im Vergleich zu Antwort -abhängige Kokain Exposition; zB., Antwort -selbständige Kokain Lieferung erinnert deutlich höhere Sterblichkeit19. Darüber hinaus die neurochemischen folgen Abstinenz von Antwort -abhängige Kokain Selbstverwaltung sind unterscheiden sich von denen ausgelöst durch Abstinenz von Antwort -unabhängige Kokain Lieferung20, 21. so CUD Modelle basierend auf Antwort -abhängige Bereitstellung von Kokain sind überlegene translationale Modelle bei der Beurteilung Cue Reaktivität und damit verbundenen Wirkmechanismen.

Im folgenden Protokoll wird Kokain intravenös über eine innewohnende Intra Vena Katheter geliefert. Allerdings entstanden sind alternative Methoden, um die Droge über Mund- und Inhalation Routen selbst verabreichen. Wichtig ist, Steuern Nager Lieferung des Medikaments, Analog Menschen durch operante Reaktionen. Daher ist hohe Konkordanz zwischen Drogen Self-administered von Nagern und Menschen22. Präklinischen Medikament Selbstverwaltung folgt beschäftigt Hebel drücken, verstärkt durch Drug-Delivery, Response-Raten höher als Fahrzeugkontrolle zu motivieren. Droge-suchenden Verhaltens wird durch Paarung ursprünglich "neutral" Signale (z. B.ein Impuls-Licht oder Ton und der kontextuellen Umfeld, in denen, das Kokain Selbstverwaltung auftritt) mit Kokain Infusion ausgebildet; Diese Hinweise werden konditionierten Verstärker (zur Überprüfung: Cunningham & Anastasio, 201423). Anschließende Re-Exposition gegenüber Kokain-assoziierten Cues löst Droge-suchenden Verhaltens in Nagetiere (d.h.versucht, Kokain durch Drücken auf den zuvor aktiven Hebel zu übermitteln) sowie verlangen und Rückfall in CUD Themen24, 25 , 26 , 27.

In der Regel nutzen Nagetier vorklinik des Droge-suchenden Verhaltens nach Kokain Selbstverwaltung Aussterben Schulung und/oder Medikament Wiedereinstellung innerhalb der Droge verbunden Umwelt28,29, 30 , 31 , 32. Pressen auf den zuvor aktiven Hebel in der Abwesenheit von Drogen und/oder Cue Lieferung in der Regel bilden das Maß der Wiedereinstellung nach Aussterben33,34,35. Im Gegenteil, ist Cue Reaktivität Droge-suchenden Verhaltens bewerteten folgende erzwungenen Abstinenz ohne vorherige Aussterben Training28,36,37,38,39 .

Zielparameter und experimentellen Variablen wurden sorgfältig ausgewählt und überprüft, um verschiedene Aspekte der Neurobiologie des Droge-suchenden und Rückfall-wie Verhalten zu sezieren, und es ist gut etabliert, dass Neuroadaptations Modelle mit unterschiedlich und ohne Aussterben Training 40,41,42,43. Darüber hinaus aus Sicht der translationalen Nagetier Aussterben Ausbildung spiegelt sich nicht in klinischen Umgebungen für CUD da Droge-in Verbindung stehenden Hinweise Stimmung Staaten, Orte und Menschen44enthalten; die einzigartige Kombination aus diese Hinweise sind wahrscheinlich nicht in einem klinischen Umfeld45,46,47erhältlich. So fungiert das Nagetiere Modell beschriebenen als eine bessere parallele der conditio humana als viele der derzeit verfügbaren Modelle.

Im folgenden beschreibt eine validierte Kokain Selbstverwaltung Ausbildung, erzwungene Enthaltsamkeit und Cue Reaktivität Prüfprotokoll für Ratten. Kurz, Ratten werden mit Intra Vena Katheter, ausgebildet, um Kokain oder Kochsalzlösung über "aktive" Hebel drücken, selbst verabreichen implantiert und Erhalt des Kokain oder Kochsalzlösung Stimulus paart sich mit diskreten Licht- und Hinweise dienen als konditionierten Verstärker. Nach 14 Tagen der Kokain-Selbstverwaltung unterliegen Ratten 30 Tage erzwungenen Abstinenz und eine anschließende 60-min-Cue Reaktivität Test in welche, den Hebel drücken gemessen wird. Der Cue-Reaktivität-Test ist ein Surrogat Maß für Kokain-Rückfall-Sicherheitsanfälligkeit beim Menschen.

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Protokoll

Alle tierische Manipulationen werden gemäß dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren (2011) und mit Zustimmung der institutionellen Animal Care und Use Committee durchgeführt.

(1) Tiere

  1. Akklimatisieren Sie männliche Sprague-Dawley Ratten ca. 8-9 Wochen alt (250-260 g) für mindestens sieben Tage in einer Kolonie Zimmer auf 21-23 ° C und 45-50 % Luftfeuchtigkeit auf einem 12 h Hell-Dunkel-Zyklus (Lichter auf 06:00-18:00 h) gehalten.
  2. Haus zwei Ratten / Käfig und täglich während der gesamten Studie zu behandeln. Nahrung und Wasser Ad Libitum im Hause Käfig in allen Phasen der Studie.
    Hinweis: Essen Einschränkung erhöht die Salienz des Kokain Belohnung48, Kokain-induzierte lokomotorischen Tätigkeit49, potenziert und fungiert als ein Stressor für Wiedereinstellung50 und damit möglicherweise auch Auswirkungen Cue Reaktivität.
  3. Nach dem Zufallsprinzip weisen Sie Ratten Kochsalzlösung oder Kokain Behandlungsgruppen zu.

2. Operation

  1. Legen Sie die Ratte unter Narkose mit einem cocktail mit 8,6 mg/kg Xylazin, 1,5 mg/kg Acepromazine und 43 mg/kg Ketamin in bakteriostatische Kochsalzlösung suspendiert. Bestätigen Sie, dass die Ratte ausreichend betäubt ist, durch seinen Zeh Kneifen und Überwachung motorischen Reflexe und Atmung. Wenden Sie ophthalmologische Salbe direkt auf die Augen, Augentrockenheit zu verhindern an.
    Hinweis: Wenn die Ratte nicht ausreichend betäubt wird es eine motorische Reaktion auf die Zehe Prise aufweisen, und die Ratte Atemfrequenz kann schnell zu erhöhen.
    1. Aseptischen Technik verwenden, während die Ratte unter Narkose ist, Implantat eine intravenöse Katheter in die Halsschlagader mit einer hinteren Halterung mit einer Kanüle verbunden. Können Sie nach der chirurgischen Implantation Ratten, für 5-7 Tage 28,36,37,51erholen.
      Hinweis: Die intravenöse Verabreichungsweg Kokain selbst beim Menschen führt zu raschen Anstieg der Gehirn Kokain Level52,53. So sind in einer präklinischen häufigste Variante, Ratten trainiert, um Kokain über eine Intra Vena Katheter selbst verabreichen.
  2. Pflegen Sie Katheter Durchgängigkeit mit täglichen Spülungen mit einer Lösung von 0,1 mL bakteriostatische Kochsalzlösung mit Heparin Natrium (10 U/mL), Streptokinase (0,67 mg/mL) und Ticarcillin binatrium (66,67 mg/mL). Katheter spülen am Tag nach der Operation beginnen und jeden Tag nach Selbstverwaltung Sitzungen weiter.
    1. Füllen Sie eine Spritze mit der Lösung, und schließen Sie die Hintere Halterung an der Spritze über Polyethylen-Rohr zu spülen.
    2. Überprüfen Sie richtigen Katheter Funktionsfähigkeit regelmäßig während des Experiments durch intravenöse Gabe von 10 mg/kg Natrium Methohexital.
      Hinweis: Dies ist eine Dosis, die ausreicht, um kurzzeitig betäuben des Tieres nur bei intravenös verabreicht.

(3) Selbstverwaltung

  1. Verwenden Sie Software-Programmierung, um 4 separate Programme zu generieren, wie nachfolgend beschrieben.
    1. Code 2 Programme für Selbstverwaltung auf einem festen Verhältnis (FR) 1 Spielplan, dh., wo ein wirkhebel Druck ergibt sich eine Infusion. Den linke Hebel code für Programm #1 als der wirkhebel; den rechten Hebel code für Programm #2 als der wirkhebel. Beide Programme 180-min Länge und liefern die Kokain-Impulse und diskrete Cue Komplex in folgender Weise zu konstruieren:
      1. Haben Sie einen wirkhebel Ursache gleichzeitiger Beleuchtung der das Haus Licht und das Impuls-Licht über der wirkhebel drücken.
      2. Haben Sie nach einer 1-s Verzögerung die Infusionspumpe über 6 s 0,1 mL der Lösung zu liefern.
      3. Haben Sie den Reiz leichten Abschaltung nach 7-s (zur gleichen Zeit wie die Infusionspumpe Inaktivierung).
      4. Haben Sie das Haus Licht Abschaltung nach 27-s, mit der letzten 20-s zeigt ein Zeitlimit in dem wirkhebel Pressen sind keine geplanten folgen, diese sind jedoch noch aufgezeichnet.
      5. Zur Datenausgabe sammeln Sie Infusionen, wirkhebel Pressen, inaktive Hebel Pressen und Latenz erste wirkhebel Presse.
    2. Zwei weitere Programme für Selbstverwaltung auf eine FR5 planen-Code, dh., wo fünf Pressen Ergebnis in eine Infusion Hebel. Wieder machen Sie ein Programm mit der wirkhebel als Links und ein Programm mit der wirkhebel als Recht. Beide Programme 180-min in Länge und liefern Sie die Verstärker und diskrete Cue Komplex in folgender Weise:
      1. Haben Sie fünf wirkhebel Pressen Ursache simultane Ausleuchtung das Haus Licht und Licht oberhalb der wirkhebel Reiz.
      2. Wiederholen Sie Schritte 3.1.1.2 durch 3.1.1.5.
  2. Selbstverwaltung-Training
    1. Bereiten Sie die Kokain-Lösung täglich in steriler 0,9 % NaCl, eine Dosis von 0,75 mg/kg/0.1 mL.
      Hinweis: Über die Dauer jeder 180 min Selbstverwaltung Sitzung Ratten verwalten ca. 4-5 mL Kokain-Lösung, also zur Vorbereitung im Überschuss erwarten täglich ca. 8 mL/Ratte.
    2. Füllen Sie die Katheter Spritze (10 mL) mit mindestens 8 mL Kokain oder Kochsalzlösung. Setzen Sie nachdem Sie sichergestellt haben, dass das Kokain/Kochsalzlösung fließt die Spritzen in die Infusionspumpe und verbinden mit der Polyethylen-Schlauch umhüllt von einer Metallfeder Leine zu Beginn jeder Sitzung Selbstverwaltung. Stellen Sie vorsichtig die Spritze in jeder Infusionspumpe so, dass die Lösung gleichmäßig und abgeschlossen in der Polyethylen-Schlauch vor dem anbringen an jeder Katheter verteilt.
    3. Statt Ratten in jeweiligen standard operanten Konditionierung Kammern mit Fans in belüfteten, Klang-mildernde Kabinen untergebracht. Konsequent jede Ratte in der gleichen operant Kammer, und der wirkhebel auf der gleichen Seite in allen Experimenten. Zuordnung von Ratten zwischen Links und rechts aktiv Hebel auszugleichen.
      Hinweis: Jede Kammer ist mit einer Pellet-Aufnahme, flankiert von zwei einziehbare Antwort Hebel, ein Impuls Licht über jede Antwort-Hebel und ein Haus Licht gegenüber den Hebeln ausgestattet. Kokain/Kochsalzlösung Spritzen mit 23g verbunden sind (eingereicht, um zu vermeiden, stochern Schläuche) Nadel befestigt Polyethylen-Schläuche eingehüllt in eine Metallfeder-Leine, die jede Ratte Katheter verbindet und ist auf einem flüssigen drehbaren betrieben. Spritzen werden in Infusionspumpen befindet sich direkt neben der Kabine platziert.
    4. Zug Ratten, Hebel drücken, um Kokain Infusionen (0,75 mg/kg/0.1 mL Infusion) oder Kochsalzlösung Infusionen (0,1 mL) während täglich 180-min-Sitzungen mit etablierte Methoden28,36,37,51.
      Hinweis: Diese Schulung erfolgt einfach indem die Ratte in die operante Kammer und erlaubt es, Hebel drücken; durch Drücken der wirkhebel führt Erhalt des komplexen diskrete Cues und Kokain Infusion während den inaktiven Hebel drücken keine geplanten Folgen trägt.
      1. Zeitplan Fertigstellungen auf dem wirkhebel Ergebnis im Lieferumfang ein Kokain oder Kochsalzlösung Infusion über einen Zeitraum von 6 s gleichzeitig gepaart mit Beleuchtung von Haus Licht und Licht oberhalb der wirkhebel Reiz und Aktivierung der Infusionspumpe (Dies ist die diskrete Cue-Komplex gepaart mit Kokain-Lieferung); inaktive Hebel Pressen produzieren keine geplanten folgen. Im Anschluss an Verstärker (Kokain) Lieferung das Impuls-Licht sowie die Infusionspumpe inaktiviert; Das Haus Licht bleibt für eine zusätzliche 20-s, ein Timeout angegeben, während der Hebel drückt keine geplanten Konsequenzen haben.
        Hinweis: Eine Beschreibung des wie Sie dies einrichten ist in Schritte 3.1.1.1-3.1.1.4 gefunden.
    5. Entfernen Sie nach Abschluss der Sitzung 180 min jede Ratte aus der operanten Konditionierung Kammer und spülen Sie den Katheter (Schritt 2.2). Reinigen Sie sorgfältig die Kammern zwischen den Sitzungen, jede Oberfläche mit 70 % Ethanol-Lösung abwischen.
      Hinweis: Ratten, die Kokain während der Sitzung Selbstverwaltung erhalten können schwierig sein, aus der Kammer zu entfernen und sind eher aggressiv zu sein. Verwenden Sie langsame und vorsichtige Bewegungen seine Leine jede Ratte trennen.
    6. Trainieren Sie Ratten auf einem FR1 Zeitplan der Verstärkung und des Fortschritts zu einem FR5 Zeitplan nach dem Kriterium der sieben Infusionen/h mit weniger als 10 % erreichen Variabilität in der Gesamtzahl von Infusionen pro Sitzung für drei aufeinander folgenden Tagen. Weiter Selbstverwaltung Sitzungen bis Ratten insgesamt 14 Tage der Selbstverwaltung Training erreicht haben.
      Hinweis: Dies ist eine Variante des operanten Lernens; einige Protokolle bevorzugen Ratten während der Ganzheit des Experiments auf FR1 bleiben. Änderungen im Zeitplan der festen Verhältnis von FR1 bis FR5 haben keine Auswirkungen auf die Anzahl der Infusionen ein Tier self-administers54,55. Jedoch festes Verhältnis vergrößern sorgt für Stabilität bei der Ratte zu reagieren, und der Salienz der Belohnung56erhöhen kann. Darüber hinaus auf Wunsch eine Behandlung während der erzwungenen Abstinenz ist Ratten sollten Pseudo-zufällig zugewiesen werden Behandlungsgruppen auf Stabilität (weniger als 10 % Variabilität in der Gesamtzahl von Infusionen pro Sitzung für ein Minimum von 3 aufeinander folgenden Tagen) bei FR5 Zeitplan. Darüber hinaus werden Kochsalzlösung Ratten nicht aus FR1 FR5, Fortschritte zu wie der Salienz der Kochsalzlösung nicht ausreichen, um die Stabilität erforderlich, um die Fortschritte von FR1, FR5 zu erreichen ist.

4. erzwungene Abstinenz

  1. Legen Sie Ratten in erzwungenen Abstinenz für 30 Tage; Das heißt, liefern Sie keine Ratten mit der Möglichkeit, Kokain oder Kochsalzlösung für eine Dauer von 30 Tagen selbst verabreichen. Wichtig ist, in diesem Zeitraum nicht zurück Ratten zu den operanten Kammern (den vorherigen Kontext der Selbstverwaltung). Jedoch entfernen Sie Ratten vom Hause Käfige für die tägliche Handhabung und wiegen, als Maß für die allgemeine Gesundheit.
    Hinweis: Die Dauer der erzwungenen Abstinenz kann geändert werden, aber es ist wichtig, eine Dauer zu wählen, die ausreicht, um Decke und Boden-Effekte zu vermeiden. Bewusst sein, wenn die Dauer der erzwungenen Abstinenz die Wahl unter anderem Nagetier Belastung, Alter, Selbstverwaltung Sitzungsdauer und Dauer, Medikament, Medikament Dosis und Infusion Dauer und das Geschlecht des Tieres.

(5) Kokain Cue Reaktivität

  1. Kodieren Sie zwei Software-Programme für die Cue Reaktivität Aufgabe bei einem FR1 Zeitplan; ein Programm mit dem linken Hebel als der wirkhebel, mit dem rechten Hebel als der wirkhebel. Konstruieren Sie jedes Programm Hebel drücken Daten für 60 Minuten sammeln zu und liefern Sie den diskreten Cue komplexe wie unten beschrieben.
    1. Wiederholen Sie die Schritte 3.1.1.1-3.1.1.4
    2. Für die Datenausgabe sammeln Sie Cue-Präsentationen (vorher bekannt als Infusionen), zuvor aktiven Hebel drückt, inaktive Hebel Pressen und Latenz zum ersten Hebel drücken.
  2. Kokain-Cue-Reaktivität-Test-Session
    1. Bewerten Sie Cue Reaktivität am Tag 30 des erzwungenen Abstinenz im 60-min operant Testfahrten. Staffeln Sie Startzeiten von Ratten, schnelle Enthauptung und Gehirn Ernte zu erleichtern. Stellen Sie wichtig ist, für den Cue Reaktivität Test nicht die Spritze in die Infusionspumpe so dass der Klang der Infusionspumpe als eine auditive Cue dient aber keine Kokain Bewehrung wird ausgeliefert.
      Hinweis: Cue Reaktivität an anderen Tag 30 der erzwungenen Abstinenz Tagen beurteilt werden kann, aber die Tatsache, die dass Reaktionsfähigkeit auf Kokain gepaart Hinweise über Zeit34 variiert sein sollte im Auge behalten, wenn Sie das Datum für den Cue Reaktivität Test wählen.
    2. Legen Sie jede Ratte in der Selbstverwaltung-Kammer, in der er ausgebildet wurde, und an der Kanüle wie während der täglichen Selbstverwaltung-Sitzungen zu begrenzen. Pressen auf den Hebel, der zuvor Kokain oder Kochsalzlösung geliefert werden jetzt nur durch Lieferung von der diskreten Cue-Komplex verstärkt (i.e. Anregung Licht und Haus sind beleuchtet und die Infusionspumpe aktiviert) planmäßig FR1 (d. h., eine diskrete Cue Komplex wird pro wirkhebel Presse vorgestellt); zählen Sie die Cue-Präsentationen zuvor aktiven Hebel drückt während einer 60-Minuten-Sitzung und auch erfassen die Anzahl der inaktiven Hebel drückt. Jedoch produzieren als mit Selbstverwaltung, inaktive Hebel drückt keine geplanten folgen.
      Hinweis: Eine zusätzliche Steuerungsmöglichkeit ist zuvor aktiven und inaktiven Hebel Pressen bei fehlender geplanten Folgen aufzeichnen (i.e., keine diskreten Cue komplexe Verstärker).
    3. Testen Sie nach Abschluss der Cue Reaktivität Sitzung zu, sofort einschläfern Sie Ratten um die biochemischen Auswirkungen von Re-Exposition gegenüber der operanten Konditionierung Kammer und diskrete Cue Komplex zu erfassen.

6. Datenerhebung, Organisation und Analyse

  1. Daten in drei herkömmlichen Kategorien unterteilen: allgemeine Gesundheit, Selbstverwaltung und Cue Reaktivität.
    1. Allgemeine Gesundheit zu überwachen (z. B.., Tier Gewicht, Pelz Zustand) in das Experiment und Tiere mit Tierarzt kümmert, wenn notwendig, oder entfernen Sie aus der Studie erscheint Hebel Drücken von Gesundheit betroffen.
    2. Datenerhebung der Selbstverwaltung in den 14 Tagen der Selbstverwaltung. Verwenden Sie einen unpaaren, zwei-tailed t-Test um zu statistischen Unterschiede zwischen Kokain und Kochsalzlösung Selbstverwaltung Gruppen für Gesamtzahl der Infusionen, wirkhebel Pressen, inaktive Hebel Pressen und Latenz erste wirkhebel Presse zu bestimmen.
      Hinweis: Selbstverwaltung, die Daten vor dem zu analysierenden müssen Abstinenz gezwungen wenn man wünscht, die Wirkung einer Behandlung während der erzwungenen Abstinenz auf Cue Reaktivität untersuchen (so dass Gruppen eine gleiche durchschnittliche Anzahl der Infusionen, sowie aktive und inaktive Hebel drückt). Wenn eine zwei-Mal-zwei-Design (Kokain ± Behandlung, saline ±) gewählt wird, sollte eine zwei-Wege-ANOVA mit entsprechenden post-hoc-Analyse verwendet werden, um diese Daten zu analysieren.
    3. Für Cue-Reaktivität-Daten zu sammeln und zu analysieren, die Gesamtzahl der Cue-Präsentationen, zuvor aktiven Hebel drückt, inaktive Hebel Pressen und Latenz zum ersten Hebel drücken. Auch analysieren Sie diese Daten mit einem ungepaarten, zweiseitigen t-Test um Unterschiede zwischen den Tieren selbst-Verwaltung Kokain und die selbst-Verwaltung Kochsalzlösung zu bestimmen.
      Hinweis: Wenn eine zweit-Design (Kokain ± Behandlung, saline ±) gewählt wird, sollte eine zwei-Wege-ANOVA mit entsprechenden post-hoc-Analyse wiederverwendet werden, diese Daten zu analysieren.

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Ergebnisse

Ergebnisse eines Kokain-Selbstverwaltung und Abstinenz-Experiments gefolgt von einem Cue Reaktivität Test aus einer zuvor veröffentlichten Studie57 sind in Abbildung 1dargestellt. Die Studie Timeline ist in Figur 1Adargestellt.

Ratten Übergang individuell von FR1, FR5, wie diese Kriterien erfüllen. Im weiteren Verlauf operanten Konditionierung in...

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Diskussion

Exposition gegenüber Drogen gepaart Cues und physiologische Veränderungen als Reaktion auf diese Signale16 Rückfall,11,16 zugeordnet sind und der Kokain Cue Reaktivität Test beschäftigt über Kontingent präsentiert Kokain gepaart Hinweise in der Abwesenheit von Drogen; Droge-suchenden Verhaltens in Form von zuvor aktiven Hebel Pressen dient als Maß für Rückfall Verletzlichkeit. Das Stichwort Reaktivität Protokoll beschriebenen ist ein präkl...

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenlegen.

Danksagungen

Alle wurden Verhaltens im University of Texas Medical Branch (UTMB) Nagetier In Vivo Assessment (RIVA) Kern, unter der Regie von Dr. Kelly Dineley und befindet sich im Zentrum für Suchtforschung, unter der Regie von Dr. Kathryn Cunningham Tests. Die Unterstützung für diese Arbeit von Peter F. McManus Charitable Trust, National Institute of Environmental Health Sciences Center für Umwelttoxikologie am UTMB kam (T32ES007254), Institut für translationale Sciences am UTMB (UL1TR001439), Mitchell-Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen und Zentrum für Suchtforschung am UTMB (DA007287, DA070087 und pilot-Studie-Fonds).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Equipment
Katheterschlauch: 0,50 mm ID x 0,94 mm AD x 0,2 mm BreiteFisher Scientific, Hampton, NH, USA11-189-15A 1/Experiment
Cue LightMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-229M2/operante Kammer
Führungskanülen (22 Gauge, Sockelgröße-8 mm, Schnittlänge 11 mm, 5 mm über dem Sockel)Plastics One, Roanoke, VA, USA8IC313G5UPXC1
Ratte House LightMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-227M1/operante Kammer
InfusionspumpeMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAPHM-1001/operante Kammer
HebelMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-110M2/operante Kammer
Flüssigkeit WirbelInstech, Plymouth Meeting, PA, USA375/221/operante Kammer
MED-PC Paket mit InfusionspumpensoftwareMed Associates Inc., St. Albans, VT, USASOF-735 (Infusionssoftware SOF-700RA-10 Version 1.04)1
MetallfederleinePlastics One, Roanoke, VA, USAC313CS/SPC1/operante Kammer
Nadel (23g, 1 Zoll)Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA3051931/ operante Kammer
Nitex Mesh (6/6 gewebte Mesh-Folie, 12"x12", 500 Mikrometer dick, 38% offene Fläche)Amazon, Seattle, WA, USACMN-0500-C, B000FMUNE6~1 Blatt/100 Ratten
PCI-SchnittstellenpaketMed Associates Inc., St. Albans, VT, USADIG-700P2-R2, MED-SYST-161/16 operante Kammern
Netzteil für SchnittstellenmoduleMed Associates Inc., St. Albans, VT, USASG-6510D1/16 operante Kammern
Schalldämpfende KabineMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-018V 1operante Kammer
Spritzen, 10 mL Luer-Lok&trade SpitzeFisher Scientific, Hampton, NH, USA14-827-521 Gehäuse/Experiment (1/operante Kammer)
Tygon Schlauch für Spülungen: 0,51 mm ID x 1,52 mm AD 0,51 mm Breite x 152,4 m LängeFisher Scientific, Hampton, NH, USA14-170-15B1/ experiment
Chemicals
Acepromazin (10mg/mL)Henry Schein (Tiergesundheit), Melville, NY, USA003845~0,5mg/Ratte*
Acraweld Repair ResinHenry Schein (Dental), Melville, NY, USA1013959 1/Experiment
Altalube (Augensalbe)Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA60500591/Experiment
KokainNIDA North Bethesda, MD, USAN/A~350mg/RAT für das gesamte Experiment*; erfordert DEA-Lizenz
Heparin (10.000 USP-Einheiten/10 mL)Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USANDC 25021-400-101/Experiment (~21 Einheiten/Rat*)
Jet LiquidHenry Schein (Dental), Melville, NY, USA1256401 1/Experiment
Ketamin (100mg/ml, 10mL)Henry Schein (Dental), Melville, NY, USA1049007~15mg/Ratte*; benötigt DEA-Lizenz
Methohexitales Natrium (Brevital®, 500 mg/50 mL)Patterson Dental, Saint Paul, MN, USA043-54611/Experiment; erfordert DEA-Lizenz
Kochsalzlösung (0,9%, USP)Baxter, Deerfield, IL, USA2B13071 Fall/Versuch
Streptokinase aus β-hämolytischen Streptokokken (Lancefield Gruppe C) ≥ 3.000 Einheiten/mgSigma Aldrich, St. Louis, MO, USAS3134-250KU1 Fläschchen/Experiment (~1,5mg/Ratte/Experiment*)
Ticarcillin DinatriumsalzFisher Scientific, Hampton, NH, USA50-213-695~4 Fläschchen/Übung oder kaufen Sie das 25g Fläschchen Kat.# 50-489-093 (~150mg/Ratte/Experiment*)
Xylazin (100mg/ml)Henry Schein (Tiergesundheit), Melville, NY, USA033198~3mg/Ratte*
*Unter der Annahme, dass das Alter der Ratte dem im Protokoll beschriebenen entspricht, verabreichen sich Ratten 14 Tage lang selbst und Hitzewallungen treten 21 Tage lang auf.
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Referenzen

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  2. Carter, B. L., Tiffany, S. T. Meta-analysis of cue-reactivity in addiction research. Addiction. 94 (3), 327-340 (1999).
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