Wir haben ein Protokoll für die Durchführung von teilweise Hepatektomie (PHx) und Zelltransplantation über Milz in NOD beschrieben. SCID (NICKEN. CB17-Prkdcscidj) Mäuse. In diesem Protokoll wird ein Einschnitt gemacht, zu entlarven und den linken Leberlappen folgte ein weiterer Einschnitt für die intrasplenic Transplantation von Zellen zu resezieren.
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Methodenartikel
Intrasplenic Transplantation von Leberzellen nach teilweiser Hepatektomie in NOD. SCID-Mäuse
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Teilweise Hepatektomie ist eine vielseitige und reproduzierbare Methode zur Leberregeneration und die Wirkung von zellbasierten Therapie in verschiedenen pathologischen Bedingungen zu studieren. Partielle Hepatektomie erleichtert auch die erhöhte Engraftment und Proliferation von transplantierten Zellen durch beschleunigte Neovaskularisation und Zellwanderung auf der Leber. Hier beschreiben wir ein einfaches Protokoll für immungeschwächte NOD 30 % Hepatektomie und Transplantation von Zellen in der Milz ein nicht adipösen Diabetiker/schwere Ausführung kombiniert werden. SCID (NICKEN. CB17-Prkdcscidj) Maus.
Bei diesem Verfahren werden zwei kleine Hautschnitte vorgenommen. Der erste Schnitt ist zu entlarven und den linken Leberlappen resezieren, und ein weiterer kleiner Schnitt erfolgt, die Milz für die intrasplenic Transplantation von Zellen verfügbar zu machen. Dieses Verfahren erfordert keine speziellen chirurgische Fähigkeiten nicht, und es kann in ca. 5-7 Minuten mit weniger Stress und Schmerzen, schnellere Genesung und bessere Überlebensrate abgeschlossen werden. Wir haben die Transplantation von Leberzellen isoliert von einem grün fluoreszierendes Protein (GFP) mit dem Ausdruck ihrer Maus (transgene C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) sowie Hepatozyten wie Zellen menschlichen Ursprungs (NeoHep) in teilweise Hepatectomized NOD bewiesen. SCID-Mäuse.
Einleitung
Als Alternative zur gesamten Organ-Transplantation zur Behandlung von Patienten mit schweren Lebererkrankungen wird derzeit Hepatozyten Transplantation vorgeschlagen. Es wird vermutet, dass es Patienten auf ganze Organ Transplantation1überbrücken kann. Neben der allogenen Hepatozyten2werden xenogenen Hepatozyten3 und Hepatozyten abgeleitet von Stammzellen4 auch in Tiermodellen untersucht. In diesem Zusammenhang, das Homing und Engraftment ist Potenzial der transplantierten Zellen des Empfängers ein wichtiges Kriterium für zellbasierte Therapie im akuten Leberversagen (AHF).....
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Protokoll
Verfahren vorgestellt, die in diesem Protokoll wurden von der institutionellen Tier-Ethik-Kommission des nationalen Institut für Immunologie, Neu-Delhi genehmigt. Die serielle Nummer der Genehmigung ist OIEA #319/13.
Hinweis: Es gibt exzellente Ressourcen auf allgemeine Chirurgie Verfahren20 und spezifische Protokolle für Nager Chirurgie21. Für diejenigen, die tierischen Operation zum ersten Mal empfiehlt es sich ausgiebig üben chirurgische Eingriffe auf Attrappen vor Inbetriebnahme auf Tiere.
1. Vorbereitung
- Halten Sie vor dem Experiment sterile ....
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Ergebnisse
Hepatozyten Verbreitung nach 30 % teilweise Hepatektomie: Die Verbreitung von Hepatozyten in den verbleibenden nach 30 % Hepatektomie Leber wurde durch immunhistochemische (IHC) Färbung für eine Verbreitung Zellmarkierung, Ki-67 geprüft. Tages-Post Hepatektomie, die Mäuse wurden eingeschläfert, die verbleibenden Leber Lappen wurden herausgeschnitten und Paraffin Abschnitte wurden erhalten. Die Abschnitte wurden mit Ki-67-Antikörper, gefolgt von Etikettierung mit Meerrettich-Peroxidase (HRP) konjugierten .......
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Diskussion
Partielle Hepatektomie ist eine etablierte Methode zur Untersuchung Leberregeneration und übermäßige Hepatektomie wird berichtet, dass der AHF-Modell zu imitieren. Tiermodelle der AHF gehören Nagetiere, insbesondere Mäuse, das am besten untersuchte Modell. Um eine Schädigung der Leber-Modell bei Mäusen bis zu einer 70 % Hepatektomie zu erhalten wurde mit einer guten überleben Rate25,26gemeldet. Aber nackt und andere immungeschwächte Maus, eine 70 % Hepatektomie w.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch den Kern Grant erhielt von der Abteilung Biotechnologie, Regierung von Indien, dem nationalen Institut für Immunologie, Neu-Delhi unterstützt. Dr. Bhattacharjee aktuelle Adresse ist die Abteilung für Gastroenterologie, Hepatologie und Ernährung, Kinder Hospital Los Angeles.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Gasanästhesiesystem | Ugo Basile; Italien | 211000 | |
| Waage | Goldtech ; Indien | Lokale Beschaffung | |
| Biologische Sicherheitswerkbank (Klasse I) | Kartos international; Indien | Lokale Beschaffung | |
| Haarschneider | Panasonic ; Japan | ER-GY10 | |
| Gerade bedienbare Schere mit scharfen/scharfen Klingen | Major Ssurgeonicals; Indien | Lokale | |
| Beschaffungszange mit Verzahnung | Große Chirurgie; Indien | Lokale Beschaffung | |
| Mikro-Nadelhalter gerade & gebogen | Mercian ; England | BS-13-8 | |
| 1 ml Insulinspritze mit 30G *5/16 Nadeln | Dispo Van; Indien | ||
| 1 ml Spritze mit 26 G * 1/2 Nadel | BD ; USA | REF 303060 | |
| Nylonfäden | mächtig; Indien | (1-0) Lokale Beschaffung | |
| MERSUTURES 4-0 Sterilisiertes chirurgisches Nadelnahtmaterial | Ethicon, Johnson & Ltd. Johnson, Indien | NW 5047 | |
| TRUGUT 76 cm 4-0 resorbierbares chirurgisches Nahtmaterial | Nähte Indien Pvt. Ltd; Indien | SN 5048 | Sterilisierte chirurgische Nadelnaht Catgut Chrom-Wattestäbchen |
| Reine Tupfer Pvt Ltd ; Indien | Lokale Beschaffung | ||
| Chirurgisches Klebeband | 3M Indien ; Indien | 1530-1 | Mikroporen-Operationsband-Mikrotom |
| Histo-Line Laboratories, Italien | MRS3500 | ||
| Shandon Cryotome E Kryostat | Thermo Electron Corporation ; Konfokales | ||
| Carl Zeiss ; Deutschland | LSM 510 META | ||
| Hellfeldmikroskop | Olympus, Japan | LX51 | |
| Automatisiertes Analysegerät | Tulip, Alto Santracruz, Indien | Screen Maaster 3000 | Biochemisches Analysegerät für Leberfunktionstest |
| Durchflusszytometer | BD ; USA | BD FACSverse | Beurteilung des Vorhandenseins von Zellen nach der Transplantation |
| Veet Haarentfernungscreme | Reckitt Benckiser , Indien | ||
| FORANE | Abbott ; US-Isofluran | USP 99,9% | |
| Taxim | AlKem ; Indien | Cefotaxim-Natrium-Injektion | |
| Povidon-Jod-Lösung | Win-Medicare; Indien | Betadin | |
| , Paraformaldehyd, | Himedia; Indien | GRM 3660 | |
| Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) | Life Technologien, Thermo Fisher wissenschaftlich ; US | 12200-036 | |
| Saccharose | Sigma ; US | S0389 | |
| Tissue-Tek | Sakura; US | 25608-930 | O.C.T. Compound |
| DAPI | Himedia; Indien | MB 097 | |
| Anti-Albumin Ziege Polyklonal | Thermo Scientific, Pierce, USA | PA126081 | |
| Anti-Connexin 32/GJB1 Polyklonal | abcam, UK | ab64609-500 | |
| AntiGFP Kaninchen polyklonal | Biotechnologie in Santa Cruz; US | SC 8334 | |
| Alexa Fluor 594 Esel Anti-Ziege | Molekulare Sonden , Thermo Fisher Scientific ; US | A11058 | |
| Alexa Fluor 488 Esel Anti-Schaf | Molekulare Sonden , Thermo Fisher Scientific ; US | A11015 | |
| Alexa Fluor 594 Huhn Anti Kaninchen | Molekulare Sonden , Thermo Fisher Scientific ; US | A21442 | |
| Ziege Anti-Kaninchen IgG HRP | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; USA | 65-6120 | |
| Anti-Ki67-Antikörper | abcam, UK | ab15580 | |
| Antigen-Demaskierungslösung, | Zitronensäure-Base-Vektorlaboratorien, US | H-3300 | |
| ProLong Diamond Antifading-Eindeckmittel | Lebenstechnologien, Thermo Fisher wissenschaftlich; US | P36966 | |
| SGOT (ASAT) KIT | Klinisches Korallensystem, Indien | ||
| SGPT (ALAT) KIT | Koralle Klinisches System, Indien | ||
| Alkalisches Phosphatase Kit (DEA) | Klinisches Korallensystem, Indien | ||
| Hämatoxylinlösung, Mayer's | Sigma ; US | MHS16 | |
| Eosin Y-Lösung, alkoholisches | Sigma ; US | HT110132 | |
| DPX Montierung | Sigma; US | 6522 | |
| Melonex (Schmerzmittel) | Intas Pharmaceuticals Ltd; Indien | Meloxicam Injektion | |
| DAB-verstärktes flüssiges Substratsystem Tetrahydrochlorid | Sigma ; US | D3939 |
Referenzen
- Nussler, A., et al. Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases. J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).
- Ponder, K. P., et al. Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and f....
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Nachdrucke und Genehmigungen
