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Methodenartikel

Fettreiche Ernährung Fütterung und Hochdurchsatz Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

11.3K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/56029

⸱

13. September 2017

 ,  , 
1Development, Aging and Regeneration Program, Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dies ist eine fettreiche Ernährung Fütterung Protokoll zur Fettleibigkeit in Drosophila, ein Modell für Verständnis grundlegende molekulare Mechanismen in Lipotoxicity verwickelt zu induzieren. Es bietet auch einen hohen Durchsatz Triacylglyceride Assay zur Messung der Fettansammlung in Drosophila und möglicherweise andere (Insekt) Modelle unter verschiedenen diätetischen, Umwelt, genetische oder physiologischen Bedingungen.

Zusammenfassung

Herzkrankheit ist die häufigste Ursache des menschlichen Todes weltweit. Zahlreiche Studien haben starke Verbindungen zwischen Adipositas und kardiale Störungen beim Menschen gezeigt, aber mehr Instrumente und Forschungsanstrengungen sind erforderlich, die Mechanismen besser aufzuklären. Seit mehr als einem Jahrhundert, das genetisch sehr gefügig Modell von Drosophila maßgeblich an der Entdeckung der Schlüsselgene und molekulare Signalwege, die erwies sich als hoch über Artgrenzen konserviert werden. Viele biologische Prozesse und Krankheitsmechanismen sind funktionell in der Fliege, wie Entwicklung (z.B., Körper Plan, Herz), Krebs und Neurodegenerative Erkrankung erhalten. Vor kurzem spielte das Studium der Fettleibigkeit und sekundären Krankheiten wie Herz-Kreislauferkrankungen in Modellorganismen, eine sehr wichtige Rolle bei der Identifizierung der wichtigsten Regulatoren metabolisches Syndrom beim Menschen beteiligt.

Hier schlagen wir vor, diesem Modellorganismus als ein effizientes Werkzeug zu induzieren, Adipositas, d. h., übermäßige Fettansammlung, und entwickeln ein effizientes Protokoll zur Überwachung der Fettgehalt in Form von TAGs Anhäufung verwenden. Neben den hoch konservierte, aber weniger komplexes Genom hat die Fliege auch eine kurze Lebensdauer für schnelle Experimente, kombiniert mit Wirtschaftlichkeit. Dieser Artikel bietet ein detailliertes Protokoll für hohen Fett-Diät (HFD) Fütterung in Drosophila , Übergewicht und ein hoher Durchsatz Triacylglyceride (TAG) Assay für die Messung der damit verbundenen Zunahme der Fettgehalt, mit dem Ziel, sehr reproduzierbar zu induzieren und effizient für große genetische oder chemische Screening. Diese Protokolle bieten neue Möglichkeiten, um effizient Regulationsmechanismen beteiligt Fettleibigkeit zu untersuchen, sowie bieten eine standardisierte Plattform für Droge-Entdeckung-Forschung für die schnelle Prüfung der Wirkung von Medikamenten-Kandidaten auf die Entwicklung oder Vorbeugung von Fettleibigkeit, Diabetes und metabolische Erkrankungen.

Einleitung

Wir befinden uns in einer Zeit, wo Übergewicht und die damit verbundenen wirtschaftlichen Belastungen ist ein weltweites Problem1. Zwei von drei Amerikanern sind übergewichtig oder fettleibig mit den damit verbundenen Herz Krankheiten, die primäre Ursache des Todes in der erwachsenen Bevölkerung2. Neue effiziente Methoden sind notwendig, um die genetischen und molekularen Komponenten beteiligt an der Regulation des metabolischen Syndroms mit Modellorganismen angemessen zu untersuchen. Aus diesem Grund wählen wir die Fruchtfliege Drosophila -Modell, weil es die grundlegende biologische Prozesse mit Säugetieren, einschließlich Menschen und Mäusen3,4,5,6teilt. Drosophila-Genom ist im Laufe der Evolution hoch konservierte aber insgesamt viel kleiner mit weniger Genduplikation und metabolische Komplexität, wodurch es ideal für das Verständnis der grundlegenden Mechanismen in vielen menschlichen Krankheiten4 verwickelt , 7 , 8. auch charakteristische Prozesse durchgeführt durch Fettgewebe, Darm und Bauchspeicheldrüse sind vertreten in der Fliege und vermitteln Regulierungsaufgaben in Glukose und Lipid-Stoffwechsel, zum Beispiel, die ähnlich wie Menschen9, 10,11. Darüber hinaus sind die grundlegende molekulare Wege der Kontrolle von Übergewicht, Insulinresistenz und Diabetes beim Menschen beteiligt in Drosophila Melanogaster12,13,14 funktionell konserviert. , 15 , 16. wie höhere Organismen, Drosophila hat ein schlagendes Herz, die während der Entwicklung durch ähnliche Prozesse der Säugetier-Herz3,17entsteht. So bieten die Entwicklung einer zuverlässigen HFD Fütterung Protokoll und hohem Durchsatz TAG Assay, angepasst für effiziente Sortierung Zwecke mit Hilfe den genetischen Werkzeugkasten von Drosophila, ein wichtiges Mittel zu untersuchen und verstehen die grundlegenden genetische Grundlagen zugrunde liegenden komplexen Stoffwechselerkrankungen.

Das HFD Essen selbst besteht aus einem Standardlabor fliegen Lebensmittel ergänzt mit Kokosnuss-Öl, besteht hauptsächlich aus gesättigten Fettsäuren bekannt, metabolisches Syndrom18zugeordnet werden soll. Während Fettleibigkeit bei Säugetieren Modelle, wie Nagetiere, Induktion Monate19,20nehmen kann, erhöht unsere optimierte HFD Protokoll in Drosophila füttern, effektiv und reproduzierbar organismal Fettgehalt in wenigen Tage12,14. Dieses Protokoll ermöglicht in Verbindung mit einem hohen Durchsatz TAG-Assay, effiziente mass Screening für die Auswirkungen der genetischen Faktoren, Umwelteinflüssen und Medikamentenkandidaten neue Modulatoren des Fettstoffwechsels zu entdecken. In der Folge dürften diese Protokolle zu verstehen und/oder Übergewicht und Fettleibigkeit verbundenen menschlichen Krankheiten zu bekämpfen.

Die Fütterung Protokoll ist vielseitig und kann angewendet werden, um die Stoffwechsel- und funktionelle Auswirkungen der einzelnen gesättigte oder ungesättigte Fettsäure zu studieren. Der Einsatz von Hochdurchsatz-TAG Assays beschränkt sich nicht auf D. Melanogaster, sondern kann auf eine Vielzahl von kleinen Modellorganismen mit Kutikula oder harte extrazellulären Matrizen(z. B.andere Drosophila -Arten, C. Elegans angepasst werden und anderen Wirbellosen Modellorganismen) Fettgehalt unter verschiedenen ökologischen, genetischen und physiologischen Bedingungen, in jedem Stadium der Entwicklung, Erwachsenenalter oder Phase Stoffwechselerkrankung zu messen. Die TAG-Assay basiert auf eine farbmetrische Messung aus einer Reihe von enzymatischen Reaktionen, die verschlechtern die TAGs in freie Fettsäuren, Glycerin, Glycerol-3-Phosphat und schließlich H2O2 , das mit 4-Aminoantipyrine (4-AAP) und 3,5 - reagiert Dichlor-2-Hydroxybenzene Sulfonate (3,5 DHBS) eine rote farbige Produkt zu produzieren, die mit einer 96-Well-Spektralphotometer gemessen wird.

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Protokoll

1. HFD Fütterung Protokoll

figure-protocol-1
Tabelle 1. Fliege Nahrungsmittelrezept.
Diese Tabelle fasst die verschiedenen Zutaten zur Zubereitung unserer Kontrolle. Sobald gebildet, 10 mL des Essens ist in Fläschchen gegossen, gekühlt und bei 4 ° C für langfristige Lagerung gelagert.

  1. HFD Vorbereitung
    1. um 1 kg des hohen Fett essen machen, wiegt 700 g vorgefertigte normale fliegen Nahrung (siehe Tabelle 1) und 300 g Kokosöl in zwei getrennten Behältern mit einer Analysenwaage.
    2. Erhitzen jeder Behälter einzeln in der Mikrowelle, bis der Inhalt vollständig schmelzen. Gießen Sie das Kokosöl in die Fliege Lunchbox. Rühren mit einem Schneebesen, bis das Öl gut in die Fliege Nahrung vermischt ist.
      Hinweis: Keine Klumpen von Lebensmitteln oder Öl sollte sichtbar sein. Wenn das fliegende Essen in der Mikrowelle schmelzen, zu stoppen, in Abständen von 1 min auf das Essen zu mischen und zu verhindern, überkochen.
    3. Re wiegen die hohen Fette essen. Wenn das Gesamtgewicht beträgt weniger als 1 kg (700 g Lebensmittel + 300 g Kokosöl), fügen Sie Wasser (ca. 10 mL) zum Ausgleich von Verdunstung während des Erhitzens und bringen wieder das Gewicht auf 1 kg.
    4. Pour gut durchmischten ca. 10 mL hohe fettreiche Nahrung pro Vial (rund 25 % des Volumens der Durchstechflasche). Als nächstes decken mit Gaze, fliegen zu verhindern ' Kontamination. Für 1 h bei Raumtemperatur abkühlen lassen dann die Fläschchen auf 4 ° C für die Lagerung bis zu 4 Wochen übertragen.
      Hinweis: Die normale Nahrung (NF) wird als Kontrolle Lebensmittel verwendet. Auch Gießen Sie 10 mL (ca. 25 % des Volumens der Vial) NF pro Fläschchen. Ersetzen Sie für die HFD Lebensmittel 30 % der NF-Lebensmittel mit Kokosnuss-Öl. Zur Steuerung und experimentellen Bedingungen, die fliegen erhielten die gleiche Menge an NF und HFD (10 mL Futter pro Fläschchen).

figure-protocol-2
Abbildung 1 . HFD Fütterung in Drosophila.
Das Schema zeigt die verschiedenen Fütterung Schritte für fliegen auf einem Steuerelement Essen (normale Ernährung ohne Zusatz von Kokosöl-NF) oder HFD (mit dem Zusatz von Kokosöl). Der gesamte Prozess dauert 10 Tage nach der ersten Sammlung von Erwachsenen fliegen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

  1. HFD Fütterung von D. Melanogaster
    Hinweis: dieses Protokoll beinhaltet Kontrolle Essen und HFD Fütterung Verfahren, die mit einer Fliege Linie kompatibel sind. Kontrolle und experimentelle fliegen werden in Ampullen mit der gleichen Menge Essen (NF oder HFD) gelegt.
    1. Einsatz CO 2 um die fliegen zu betäuben.
      : Für Neulinge, bitte lesen Hinweis 21 für einen Überblick über Erziehung und Umgang mit D. Melanogaster.
    2. Sammeln 0-5 Tag alt fliegen von Vials und Transfer (mit Spiegeln) die fliegen in neue Ampullen mit NF (vorher bei Raumtemperatur erwärmt). Lassen Sie das Fliegen Alter für 5 zusätzliche Tage bei 21 ° c
    3. Am Ende der 5 Tage, nehmen Sie das Fläschchen mit HFD und NF von 4 ° c
      Hinweis: wie Kälte Leben fliegen, stress können lassen Sie die Fläschchen für 30 min bei Raumtemperatur zum Aufwärmen vor dem Einsatz sitzen.
    4. Mit Feuchttücher, reinigen und entfernen Sie überschüssigen Flüssigkeit von den Seiten der Durchstechflaschen.
    5. Legen Sie ein kleines Stück Filterpapier, über 1 cm x 3 cm, in den hohen Fett essen, überschüssige Flüssigkeit zu absorbieren.
      Hinweis: Dieser Schritt ist wichtig, zu verhindern, dass die fliegen kleben auf HFD Nahrung.
    6. Transfer als nächstes die fliegen auf den hohen Fett essen (mit Spiegeln). Legen Sie die Flaschen horizontal auf ihrer Seite (nicht stehend) bei 21-22 ° C für 5 Tage.
      Hinweis: Vermeiden Sie höhere Temperaturen, da dies teilweise hohe fettreiche Nahrung, wodurch die fliegen zu essen und sterben Stick schmelzen kann.
    7. Nach 5 Tagen, transfer (mit Spiegeln) die fliegen von NF und HFD in neue Fläschchen ohne Nahrung für ihren Mut, für 30 min leer lassen. Als nächstes gehen Sie zum Wiegen der Flies.
      Hinweis: Die entscheidenden Schritte in dieser HFD Fütterung Protokoll gehört zu einer gut durchmischten HFD, frei von jeder Brocken fliegen Essen oder kondensierten Öl vorzubereiten. Homogen mischen und Kühlung der HFD auf 45-30 ° C ist ratsam, vor dem Gießen in Fläschchen und Lagerung der Lebensmittel im richtigen Alter von 4 ° c Anpassung der Steuerung und experimentellen fliegen ist ebenso wichtig wie kontrollierte Ernährung und ökologischen Bedingungen vor die HFD Fütterung. Während der Einlaufphase Kontrolle und experimentelle fliegt die gleiche Menge an NF und HFD anzugeben. Sammeln Sie nie fliegen aus überfüllten Fläschchen oder Flaschen (zur Vermeidung von generationenübergreifenden Effekte). Setzen Sie immer maximal 25 fliegen pro Fläschchen während NF und HFD Fütterung um diätetische Einschränkung oder andere crowding Effekte zu vermeiden. Die HFD besteht aus 30 % Kokosöl, somit Temperaturen über 22 ° C könnte teilweise schmelzen HFD, wodurch die fliegen zum Aufkleben auf die fettige Lebensmittel und sterben. Reinigen Sie bevor die fliegen auf der HFD die Fläschchen, entfernen das restliche Öl und legen ein Filterpapier überschüssigen Flüssigkeit in der Nahrung zu absorbieren. Während der Inkubation der fliegen auf HFD, regelt die Fläschchen auf ihren Seiten um eine fettfreie horizontale Oberfläche für die fliegen.
  2. Wiegen die fliegen
    1. für jeden Genotyp und Geschlecht getestet werden, eine hochempfindliches Skala verwenden, um die Gewichte bereits beschriftete, leere 1,7 mL Röhrchen aufnehmen.
    2. Mit Fliege Betäubung oder CO 2, zu betäuben und 36 fliegen von den gleichen Genotyp, Geschlecht, zu sammeln und Einspeisung Status mit einem Pinsel in einer Pre-1,7 mL-Tube wog.
    3. Wiegen die Röhrchen mit fliegen mit der gleichen hochempfindliches Skala.
    4. Bestimmen das Durchschnittsgewicht fliegende nach dieser Formel:
      figure-protocol-3
      Hinweis: die Anzahl der fliegen in diesem Protokoll ist 36.
    5. Blitz Einfrieren der 1,7 mL-Röhrchen mit fliegen durch Eintauchen in flüssigem Stickstoff für 2 min. sammeln und die Rohre in Boxen. Als nächstes übertragen die Boxen bis-80 ° C (bevorzugte Temperatur) für die Lagerung bis zur Verwendung mit dem TAG-Assay.
      Achtung: Flüssiger Stickstoff ist bei einer sehr niedrigen Temperatur. Bitte geeignete persönliche Schutzausrüstung benutzen.

2. TAG-Assay

  1. Vorbereitung der TAG standard Konzentrationen
    1. 500 mL PBT vorbereiten (PBS 1 X 0,05 % Triton).
    2. Mit 0,5 mL Röhrchen und die TAG-Lösung (Table of Materials), bereiten Sie 100 µL des Rohlings (nur PBT) und 100 µL der sechs standard-TAG-Konzentrationen (2 µg/µL 1 µg/µL 0,5 µg/µL; 0,25 µg/µL; 0,125 µg/µL; 0,0625 µg/µL) mit der PBT.
    3. Die Rohre auf Eis legen und fahren Sie mit Schleifen fliegen.
  2. Schleifen die fliegen
    1. nehmen Sie die gefrorenen fliegen von-80 ° C (Schritt 1.3). Übertragen Sie die Röhrchen mit der fliegen auf Ice
    2. Zuerst legen Sie 2 mm Metall Mahlkugeln in eine 96-Well-Kugel-Spender, verwenden Sie einen kleinen Pinsel Extrakugeln entfernen.
    3. Ort der 96-Well-Schleifen Platte auf dem Kopf stehend auf dem Ball Dispenser und Flip die Metallkugeln direkt in die reibende Platte übertragen. Es sollte ein Ball pro Bohrloch.
    4. Mit einer Multi-Kanal-Pipette 600 µL PBT in jeder Zeile der Schleifscheibe 96-Well-Platte hinzufügen.
    5. Mit der Pinzette, fügen Sie 3 fliegt pro Bohrloch. Der Genotyp, Geschlecht und Ernährung Zustand der fliegen in jeder Zeile/gut von den Schleifen 96-Well-Platte.
    6. Legen Sie fest die Kappen auf die Schleifscheibe 96-Well-Platte. Band darf Sie nach oben, um sicherzustellen, dass es kein Durchsickern.
    7. Setzen Sie richtig die Schleifen 96-Well-Platten der Schleifmaschine. Die Maschine setzen, um die höchste Geschwindigkeit und Presse " laufen " die fliegen für 3 min. mahlen
    8. Nach 3 min, stoppen die Schleifen und fahren Sie mit Platte Zentrifugation: bewiesenge für 15 min bei 4.000 x g, 4 ° C. Nach Zentrifugation, verwalten die reibende Platte sorgfältig, um zu vermeiden, Mischen des Überstands mit dem Pellet.
  3. Probenbeladung und Bestimmung des TAG
    1. eine neue Spektralphotometer 96-Well-Platte zu nehmen. Mit einer Multi-Kanal-Pipette 200 µL des Reagenz TAG in jeder Zeile der Platte laden.
    2. Last 20 µL PBT in den ersten Brunnen der ersten Zeile ein Leerzeichen erstellen. Mischen von Pipettieren rauf und runter. Vermeiden Sie Luftblasen.
    3. Last 20 µL jeder standard Verdünnung (aus Schritt 2.1.2) in den übrigen Brunnen von der ersten Zeile und der Mix von Pipettieren rauf und runter. Vermeiden Sie Luftblasen.
    4. Mit einer Multi-Kanal-Pipette 20 µL des Überstandes aus jeder Zeile der reibende Platte auf die entsprechende Zeile in der 96-Well-Photometer-Platte übertragen. Pipette rauf und runter, gut mischen. Vermeiden Sie Luftblasen.
    5. Setzen Sie eine gasdurchlässige Folie oberhalb des 96-Well-Platte.
    6. Brüten die Platte bei 37 ° C für 10 min.
      Hinweis: In den Brunnen gibt es Bläschen, Zentrifugieren der Platte für 2 min bei 2.000 x g um alle Luftblasen zu entfernen. Bläschen beeinträchtigt auch die Extinktion lesen.
    7. Lesen Sie die Absorption von jedem Bohrloch der Platte bei 550 nm mit einem kompatiblen Mikrotestplatte Reader. Als nächstes verfolgen die Standardkurve und bestimmen die Konzentration [µg/µL] unbekannter Proben.
    8. Um den Betrag des TAG-Inhalt pro mittlere fliegen Gewicht ermitteln verwenden Sie die folgende Formel:
      figure-protocol-4
      Hinweis: In diesem Protokoll wurden 3 fliegen in 600 µL PBT gehackt; in der Folge ist das mittlere Volumen pro Fliege 200 µL.
  4. Bradford-Test und Normalisierung des TAG-Inhalt mit Protein-Inhalt
    1. bereiten sieben 100 µL Rinderserumalbumin (BSA) standard Verdünnungen (75 µg/mL; 100 µg/mL; 150 µg/mL; 200 µg/mL; 250 µg/mL; 500 µg/mL; 1.000 µg/mL) mit der PBT.
    2. Nehmen eine neue 96-Well-Platte und 200 µL 1 X Bradford-Reagenz in jeder Zeile der Platte laden.
    3. In die erste Vertiefung der ersten Zeile fügen Sie 10 µL PBT erstelle ich eine leere. Mischen von Pipettieren rauf und runter. Vermeiden Sie Luftblasen.
    4. Fügen Sie 10 µL jeder standard Verdünnung in den verbleibenden Brunnen von der ersten Zeile und der Mix von Pipettieren rauf und runter. Vermeiden Sie Luftblasen.
    5. Mit einer Multi-Kanal-Pipette 10 µL Überstand der Fliege aus jeder Zeile der reibende Platte in die entsprechende Zeile in der 96-Well-Platte übertragen. Pipette rauf und runter, gut mischen. Vermeiden Sie Luftblasen.
    6. Legen Sie eine gasdurchlässige Folie oberhalb des 96-Well-Platte.
    7. Die Platte bei 5 min bei Raumtemperatur inkubieren. In den Vertiefungen gibt es Bläschen, Zentrifugieren die Platte für 2 min bei 2.000 x g um sie zu entfernen.
      Hinweis: Bläschen wird das Ablesen der Absorption stören.
    8. Einsatz einem Spektrophotometer zu lesen die Extinktion des Rohlings, Normen und unbekannte Proben bei 595 nm. Die Standardkurve verwenden, um die Konzentrationen [µg/µL] der Proben in jeder Zeile bestimmen.
    9. Normalisieren das TAG zufrieden mit Protein-Ebene mit Hilfe der folgenden Formel:
      figure-protocol-5

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Ergebnisse

In D. Melanogasterwie der Fall mit anderen Arten ist gibt es Geschlechtsdimorphismus zwischen Männchen und Weibchen22. Es ist bekannt, dass die Weibchen größer, mit mehr Fett in ihre Bäuche als Männchen22 sind. Um die Wirksamkeit unserer Protokoll zu testen, haben wir TAG Tests ermitteln die TAG inhaltliche Unterschiede zwischen Männchen und Weibchen Standardlabor Wildtyp (w1118) fliegt. Die Daten zeigen, dass Fr...

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Diskussion

Adipositas-Induktion bei Mäusen kann Monate19,20nehmen. In Fliegen ermöglicht dieser HFD Fütterung Protokoll für die Induktion von überschüssigen Fettansammlung in einer Angelegenheit von Tagen oder weniger, verursachen erhöht in Fettansammlung erst nach 18 Uhr (siehe Abbildung 2). HFD füttern mit dem beschriebenen Protokoll Glukose Inhalt 12 erhöht oder verringert Bmm Lipase und PGC-1 Ausdruck

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Wir möchte Erika Taylor für die Bearbeitung dieser Handschrift. Diese Arbeit wurde finanziert durch Zuschüsse aus der National Institutes of Health (P01 HL098053, P01 AG033561 und R01 HL054732), r.b., doctoral Research Ergänzung (R01 HL085481) und ein Stipendium (AAUW), S.B.D. und Zuschüsse aus der American Heart Association, S.B.D. und R.T.B.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Talboys Kugeltropfer-/PerlenspenderTalboys#: 930150
Talboys Homogenisator mit hohem DurchsatzTalboys#: 930145
Mahlkugeln, Edelstahl OPS Diagnostics, LLC# GBSS 156-5000-015000 Kugeln
Masterblock 96 Well tiefe MikroplattenGreiner Bio-One# T-3058-1Karton mit 80 Platten
Greiner  96 Well Mikroplatten mit flachem BodenSigma Aldrich# M4436 40Platten
Greiner CapMat zum Versiegeln von Multiwell-PlattenSigma Aldrich# C360650 Siegelplatten
Reagenzreservoire& nbsp;Thomas Scientific# 1192T7112/PK
Thermo Scientific Finnpipette 4661040Thermo Scientific# 46610401-10 ul Multipipette
Thermo Scientific Finnpipette 4661070Thermo Scientific# 466107030-300ul Multipipette
Thermo Scientific Finnpipette 4661020Thermo Scientific#466102010-100ul Multipipette
Mehrkanal SpitzenDenville Scientific Inc# P3131-Sfür 10 μl Pipette
Mehrkanal-SpitzenDenville Scientific Inc# P3133-Sfür 200 μl Pipette
Mehrkanal-SpitzenDenville Scientific Inc#P1125für 100 μl Pipettenzange
 Roboz Schirical# 5 DumontsSuperfeine Pinzette
Mettler Toledo Excellence XS Analysenwaage Mfr# XS64Cole-Parmer wissenschaftliche Experten# EW-11333-00
Metler Toledo Excellence XS Toploading-WaageCole-Parmer wissenschaftliche Experten# EW-11333-49
96-Well-Mikrotiterplatten-ZentrifugeHettich Zentrifugen# Rotina 420R
Mikroplatte ReaderMolecular devices# SpectraMax 190
Lab-Line Bench Top Orbit Environ Shaker InkubatorBiostad# 3527
Infinity Triglyceride ReagenzThermo Scientific# TR22421
Triglyceride StandardStanbio#2103 - 030
Quick Start Bradford Protein AssayBio-RAD# 500-02051x Farbstoff Reagenz
KokosölNutiva# 69275220001415 0z Glas
PBS 10XThermo Scientific# AM9625500 ml
Triton X-100Sigma Aldrich# 9002-93-1
Gasdurchlässige FolieMacherey-Nagel# 74067550 Stück
FilterpapierVWR# 28317-241Packung mit 100
Drosophila-FläschchenGenesee ScientificKatze #: 32-116SB
Schnellstart Rinderserumalbumin StandardBio-Rad# 5000206
FlyNap AnästhetikumCarolina# 173025100 mL
Kimwipes FusselarmeUline# S-81151-lagig, 4,4 x 8,4"

Referenzen

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