Bewertung der menschlichen Fettgewebe mikrovaskuläre Funktion mit Videomicroscopy

Summary

Videomicroscopy Systeme werden verwendet, um die funktionelle Eigenschaften der isolierten Fettgewebe Arteriolen in Reaktion auf physiologische und pharmakologische Stimuli zu untersuchen. Diese Technik kann verwendet werden, zu prüfen, mikrovaskuläre Phänotypen in verschiedenen Fettgewebe Domänen bei übergewichtigen Menschen.

Abstract

Während Fettleibigkeit zur Entwicklung von Stoffwechsel- und Herz-Kreislauf-Krankheit eng verknüpft ist, ist wenig bekannt über Mechanismen, die diese Prozesse steuern. Es wird vermutet, dass Pro-atherogenen Mediatoren aus dem Fettgewebe vor allem in Verbindung mit Mittel-/viszerale Adipositas entlassen Pathogene Gefäßveränderungen, lokal und systemisch fördern können, und die Vorstellung, dass Herz-Kreislauf-Krankheit möglicherweise die Folge der Fettgewebe Dysfunktion entwickelt sich ständig weiter. Hier beschreiben wir eine einzigartige Methode der Videomicroscopy, die Analyse der gefäßerweiternde und Vasokonstriktor Antworten von intakten kleinen menschlichen Arteriolen entfernt aus dem Fettgewebe Depot des lebenden menschlichen Themen beinhaltet. Videomicroscopy wird verwendet, um die funktionelle Eigenschaften der isolierten Mikrogefäßen in Reaktion auf physiologische oder pharmakologische Stimuli mit einem unter Druck stehenden System, die in Vivo -Bedingungen imitiert zu untersuchen. Die Technik ist ein sinnvoller Ansatz zum Verständnis der Pathophysiologie und molekularen Mechanismen, die vaskuläre Dysfunktion lokal in das Fettgewebe Milieu beitragen. Anomalien im Fettgewebe Microvasculature sind darüber hinaus auch mit systemischen Erkrankungen verbunden worden. Wir wandte diese Technik um Depot-spezifische vaskuläre Reaktionen bei übergewichtigen Probanden zu untersuchen. Wir beurteilen die Endothel-abhängige Vasodilatation, erhöhte Fließfähigkeit und Acetylcholin im Fettgewebe Arteriolen (50-350 µm Innendurchmesser, Länge von ca. 2-3 mm) isoliert aus zwei verschiedenen adipose Depots während der bariatrischen Chirurgie von der gleichen Person. Wir bewiesen, dass Arteriolen von viszeralem Fett beeinträchtigt Endothel-abhängige Vasodilatation im Vergleich zu isoliert aus dem subkutanen Depot Schiffe aufweisen. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass die viszerale Mikroumgebung vaskulären endothelialen Dysfunktion zugeordnet ist möglicherweise relevante klinische Beobachtung Systemerkrankung Mechanismen erhöhte viszerale Adipositas verlinken. Die Videomicroscopy-Technik lässt sich prüfen, vaskuläre Phänotypen aus verschiedenen Fettdepots sowie Erkenntnisse über Personen mit verschiedenen Graden von Übergewicht und Stoffwechselstörungen zu vergleichen. Die Methode kann auch verwendet werden, vaskuläre Reaktionen längs in Reaktion auf klinischer Interventionen zu untersuchen.

Introduction

Videomicroscopy ist eine nützliche Technik genutzt, um die vasomotorische Funktion der kleinen Arteriolen entfernt lebenden menschlichen Probanden ex Vivozu untersuchen. Unser Labor konzentriert sich auf sezieren, winzige Mikrogefäßen aus verschiedenen Fettgewebe Fächer, die Auswirkungen der verschiedenen adipösen Mikroumgebungen auf den Microvasculature zu charakterisieren. Ein großer Vorteil dieser Technik ist, dass Blutgefäße aus dem menschlichen Körper entfernt funktionsfähig bleiben und können leicht innerhalb von Minuten bis Stunden nach der Biopsie untersucht werden. Physiologische Bedingungen werden nachgeahmt und stetig Transmural Druck beibehalten i....

Protocol

das Protokoll und die hier beschriebenen Beispiele wurden von Boston Universität Schule von Medizin Institutional Review Board (IRB, Protokoll #H-25644) genehmigt und wurden im Einklang mit der Deklaration von Helsinki. Alle Themen zur Verfügung gestellt schriftliche Einwilligungserklärung vor Teilnahme.

1. Vorbereitung der Lösungen und Mikro-Glas Kanülen

1. Vorbereitung der 4-2-Hydrosyethyl-1-Piperazineethanesulfonic sauer (HEPES) Kochsalzlösung. Für 1 L auflösen 8,059 g NaCl, 0,298 g KCl, 0,296 g MgSO ₄ • 7 H ₂ O, 0,235 g CaCl ₂ • 2 H ₂ O, 0,16 g KH ₂ PO ₄

Results

Unser Labor hat Videomicroscopy verwendet, um die Endothel-abhängige zu prüfen und - unabhängige Vasodilatation sowie Vasocontractile Funktion des Fettgewebes Arteriolen von subkutanen und viszeralen Fettgewebe von übergewichtigen Menschen isoliert. Die charakteristischen Versuchsanordnung ist in Abbildung 1Aangezeigt. Fettgewebe Arteriolen sind zwischen zwei Kapillare Glaspipetten ausgesetzt und gesichert mit Fäden innerhalb der Organ-Kammer, wie in

Discussion

Die Dissektion und Isolierung von adipösen Arteriolen aus den umliegenden Geweben können ein Zeit- und arbeitsintensiver Prozess mit viel Liebe zum Detail und technisches Protokoll sein. Das Mikrodissektion Verfahren erfordert sorgfältige Fähigkeiten und spezialisierte Dissektion Utensilien um mögliche Schäden zu vermeiden, der glatten Muskulatur oder endothelialen Schichten von den Microvasculature Zelle. Selbst kleinste versehentliche Einstiche in der Arteriolen Wand können Intraluminal Druckbeaufschlagung und Ergebnis.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chemischer Name
Acetylcholin	Sigma Aldrich	A6625
Calciumchlorid (CaCl2)	Sigma Aldrich	223506
D-(+)-Glucose	Sigma Aldrich	G5767
Endothelin-1	Sigma Aldrich	E7764
Ethylenglykol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-Tetraessigsäure (EGTA)	Sigma Aldrich	E3889
Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)	Sigma Aldrich	E9884
HEPES	Sigma Aldrich	H3784
Nw-nito-L-argininmethylesterhydrochlorid	Sigma Aldrich	N5751
Magnesiumsulfat (MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
Kaliumchlorid (KCL)	Sigma Aldrich	P3911
Kaliumphosphat (KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
Papaverin	Sigma Aldrich	P3510
Natriumbicarbonat (NaHCO 3 )	Sigma Aldrich	S6014
Natriumchlorid (NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
Monobasisches Natriumphosphat-Monohydrat (NaH2Po4)	Sigma Aldrich	S9638
Name	Unternehmen	<>Katalognummer	Kommentare
Equipment
Forceps	Finescience tools	15000-08
Inverses Mikroskop	Zeiss Achromat
Laborschlauch	Euro-Pharm	250100306F999
Nadel-/Pippettenabzieher	David kopf instruments	720
Ophthalmic monofile Nylonnaht	Chirurgische Spezialitäten	A7756N
Schere	Finescience Werkzeuge	150000-08
Gefäßkammer	DMT	VAS v.2.1