Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infiziert werden in natürlichen Populationen zu unterdrücken, die Übertragung von Arboviren freigesetzt. Wir beschreiben Methoden nach hinten Ae. Aegypti mit Wolbachia Infektionen im Labor für Experimente und Feld Freigabe, Vorsichtsmaßnahmen zum Labor Anpassung und Auswahl zu minimieren.
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Methodenartikel
Pflege, Aedes Aegypti Moskitos mit Wolbachia infizierte
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Aedes Aegypti Moskitos experimentell infiziert mit Wolbachia sind in Programme, um die Ausbreitung von Arboviren wie Dengue-Fieber, Chikungunya und Zika genutzt. Wolbachia-infizierte Mücken ins Feld, entweder Populationsgrössen durch inkompatible Paarungen zu reduzieren oder Populationen mit Mücken zu verwandeln, die refraktär gegenüber Übertragung des Virus sind freigegeben werden können. Für diese Strategien, um erfolgreich zu sein müssen die Mücken, die in das Feld aus dem Labor entlassen mit einheimischen Mücken wettbewerbsfähig sein. Jedoch kann Pflege Mücken im Labor führen Inzucht, genetische Drift und Labor-Anpassung, die kann ihre Fitness im Bereich reduzieren und kann die Ergebnisse von Experimenten verwirren. Um die Eignung der verschiedenen Wolbachia Infektionen für den Einsatz im Feld zu testen, ist es notwendig, die Mücken in einer kontrollierten Laborumgebung über mehrere Generationen hinweg zu erhalten. Wir beschreiben ein einfaches Protokoll für die Aufrechterhaltung der Ae. Aegypti Moskitos in das Labor, das für beide Wolbachiaeignet-infizierten und Wildtyp Mücken. Die Methoden minimieren Labor Anpassung und Umsetzung Auskreuzung um die Bedeutung der Experimente für Feld Mücken zu erhöhen. Darüber hinaus werden Kolonien unter optimalen Bedingungen zu maximieren Sie ihre Fitness für Freiland Versionen beibehalten.
Einleitung
Aedes Aegypti Moskitos sind verantwortlich für die Übertragung von einigen der wichtigsten Arboviren in der Welt, einschließlich Zika, Dengue-Fieber und Chikungunya1. Diese Viren sind eine zunehmende Bedrohung für die globale Gesundheit immer, da die weite Verbreitung von Ae. Aegypti in den Tropen weiterhin2,3,4zu erweitern. Weibliche Ae. Aegypti bevorzugt ernähren sich von menschlichem Blut5 und somit Leben in unmittelbarer Nähe zu den Menschen, insbesondere in städtischen Gebieten, wo die Populatione....
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Protokoll
Blut Fütterung der Moskitos am Menschen wurde von der University of Melbourne menschliche Ethik-Kommission genehmigt (Genehmigung Nr.: 0723847). Alle Freiwilligen zur Verfügung gestellt Einwilligung schriftliche.
1. Larvenstadium Aufzucht
Hinweis: Die Mücken sind in 26 ± 0,5 ° C und 50-70 % Relative Luftfeuchtigkeit, mit einem 12:12 h (Licht: dunkel) Photoperiode für diese Kolonie Wartungsprotokoll statt. Diese Bedingungen sind ähnlich wie die durchschnittlichen klimatischen Bedingungen in Cairns, Australien und im optimalen thermischen Bereich für Ae. Aegypti überleben und Entwicklung44<....
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Ergebnisse
Abbildung 4 zeigt die Auswirkungen der suboptimale Ernährung auf die Entwicklung von Ae. Aegypti Larven. Wenn Container verfügen über 0,25 mg Futter pro Larve pro Tag oder weniger, die Entwicklungszeit erhöht für Männer und Frauen, und ist weniger synchron als im Container mit 0,5 mg von Lebensmitteln versehen. Wenn angemessener Nahrung nicht während der gesamten Dauer der Larvalentwicklung erfolgt, hätte dies negative Auswirkungen auf den Zeitpunkt .......
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Diskussion
Nach dem Protokoll hier vorgestellten für die Wartung von Wolbachia-infizierten Ae. Aegypti sollten sicherstellen, dass gesunde Mücken eine gleich bleibende Qualität für Experimente entstehen und Freisetzungen zu öffnen. Im Gegensatz zu anderen Protokollen, die die Produktion von großen Mengen von Mücken priorisieren (siehe Referenz-57), sind die Methoden konzentriert sich auf die Maximierung ihrer Fitness, sowohl innerhalb der Generationen durch entspannte Aufzucht Durchführungs.......
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Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.
Danksagungen
Wir erkennen Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson und Clare Doig für ihre Beiträge zur Entwicklung unserer Kolonie Wartung Methoden und drei anonymen Gutachtern für ihre Vorschläge, die dazu beigetragen, um das Manuskript zu verbessern. Unsere Forschung stützt sich auf ein Programm Grant und Kameradschaft, AAH von den National Health und Medical Research Council und eine Übersetzung vom Wellcome Trust zu gewähren. PAR ist ein Empfänger von einem australischen Regierung Training Programm Forschungsstipendium.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Wildtyp Aedes aegypti | Gesammelt von Feldstandorten in Queensland, Australien, siehe Yeap und andere39 für Details | ||
| w Mel-infizierte Aedes aegypti | Bereitgestellt von der Monash University. Informationen zum Stamm <w finden Sie unter Walker und anderesup class="xref">23 | ||
| > AlbB-infizierte Aedes aegypti | Bereitgestellt von der Monash University. Informationen zum Stamm w finden Sie unter Xi and others21 | ||
| MelPop-infizierter Aedes aegypti | Bereitgestellt von der Monash University. Weitere Informationen zum Stamm finden Sie unter McMeniman und andere22 | ||
| Instant-Trockenhefe | Lowan | stimuliert das Schlüpfen von Eiern. Zu finden in Lebensmittelgeschäften. Andere Marken können verwendet werden | |
| 5 L Kunststoffwanne | Quadrant | Q110950 | Wird zum Schlüpfen und Aufziehen von Larven verwendet. Andere Produkte können verwendet werden |
| Fischfutter (Tetramin Tropentabletten) | Tetra | 16152 | den Larven als Nahrungsquelle zur Verfügung gestellt. Webadresse: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE |
| Kunststoffbehälter | Werden für die Aufzucht von Larven verwendet. Jeder Kunststoffbehälter über 500 ml sollte geeignet sein | ||
| Glaspipette | Wird zum Übertragen von Larven und Puppen zwischen Behältern verwendet. Webadresse: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez | ||
| Clicker-Zähler | RS Pro | 710-5212 | Wird zur Unterstützung der Zählung von Larven, Puppen und Eiern verwendet. Webadresse: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y |
| Aufzuchtschalen | Gratnells | Wird für die Aufzucht von Larven verwendet. Webadresse: http://www.gratnells.com | |
| Nylonnetz | Wird verwendet, um Larven und Puppen in Behälter mit Süßwasser umzufüllen. Andere Marken können verwendet werden. Webadresse: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white | ||
| Cages | BugDorm | DP1000 | Beherbergt ausgewachsene Mücken. Es können alternative Produkte verwendet werden. Webadresse: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html |
| 35-ml-Plastikbecher | Huhtamaki | AA272225 | Wird verwendet, um erwachsenen Mücken Wasser oder Saccharose zuzuführen. Andere Marken können verwendet werden |
| 35 ml Plastikbecherdeckel | Huhtamaki | GB030005 | Wird verwendet, um erwachsene Mücken mit Saccharose zu versorgen. Andere Marken können verwendet werden |
| Watte | Cutisoft | 71841-13 | Feuchte Watte wird Erwachsenen als Wasserquelle zur Verfügung gestellt. Andere Marken können verwendet werden |
| Weißer Zucker | als Zuckerquelle für erwachsene Mücken bereitgestellt. Erhältlich in Lebensmittelgeschäften | ||
| Rope | M Recht Zubehör | C323C/W | Wird verwendet, um Erwachsenen Saccharoselösung zu bieten. Andere Marken können verwendet werden. Webadresse: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/ |
| Plastikbecher (groß) | Wird als Behälter für die Eiablage verwendet. Jeder Plastikbecher, der 100 ml Wasser fasst, sollte als | ||
| CE015962. | Es können alternative Produkte verwendet werden, aber wir verwenden diese Marke, weil sie relativ geruchlos ist. Hellere Farben werden als Kontrast zu Eiern verwendet. Webadresse: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html | ||
| Filterpapier | Whatman | 1001-150 | Wird als alternatives Eiablagesubstrat verwendet. Andere Marken können verwendet werden |
| Latexhandschuhe | SemperGuard | Z560979 | Verhindert Mückenstiche an den Händen bei der Blutfütterung. Andere Marken können verwendet werden. Webadresse: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/ |
Referenzen
- Mayer, S. V., Tesh, R. B., Vasilakis, N. The emergence of arthropod-borne viral diseases: A global prospective on dengue, chikungunya and zika fevers. Acta Trop. 166, 155-163 (2017).
- Campbell, L. P., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
