Methylenblau-Dye-Injektion in das Nierenbecken erleichtert die Beurteilung der Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel während der Maus embryonalen Harnwege Entwicklung. Hier wird ein Protokoll für Methylenblau-Dye-Injektion in das Nierenbecken beschrieben.
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Methodenartikel
Beurteilung der Harnwege Junction Obstruktion Mängel durch Methylenblau-Dye-Injektion
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel sind angeborene Anomalien induzierende Hydronephrose und Hydroureter. Murine Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel können beurteilt werden, durch die Verfolgung Methylenblau färben Strömung innerhalb der Harnwege. Methylenblau-Dye in das Nierenbecken der perinatalen embryonale Nieren injiziert und Farbstoff wird überwacht von den Nierenbecken der Niere durch den Harnleiter und in das Lumen der Blase nach dem hydrostatischen Druck anwenden. Farbstoff Anhäufung werden deutlich in der Blase Lumen der normalen perinatale Harnwege, sondern wird zwischen dem Nierenbecken und den Endpunkt der eine abnorme Harnleiter, eingeschränkt werden, wenn die Harnwege Hindernisse auftreten. Diese Methode ermöglicht die Bestätigung der Harnwege Kreuzung Hindernisse und Visualisierung von Hydronephrose und Hydroureter. Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll für Methylenblau färben Injektion in das Nierenbecken, Harnwege Kreuzung Hindernisse zu bestätigen.
Einleitung
Das Harnsystem besteht aus einem Paar Nieren und Harnleiter und einer gemeinsamen Blase und Harnröhre. Die Hauptfunktion des Harnsystems ist Körper-Homöostase durch die Verwaltung der Wasser- und Elektrolyt-Gleichgewicht des Blutes. Die Nieren filtern das Blut zur Kontrolle Elektrolyt Konzentrationen und Säure-Basen-Gleichgewicht und produzieren Urin um überschüssiges Wasser und Abfällen einschließlich Solute und Stoffwechselprodukte auszuscheiden. Urin wird dann durch den Harnleiter aus dem Nierenbecken der Niere, die Bladderin einer unidirektionalen Weise transportiert, wo es gespeichert und schließlich über die Harnröhre1beseitigt.
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Protokoll
Mäuse (Wnt5a Flox / Flox Mäuse (Wnt5a tm1.1Tpy) und Dll1Cre Linie, UVJO-Maus-Modell) 7 wurden nach NIH-Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren verwaltet und studierte unter ein Protokoll durch die NCI-Frederick Animal Care and Use Committee genehmigt.
1. Vorbereitung des Methylenblau Farbstofflösung
- 0,1 g Methylenblau Pulver zu messen.
- Lösen sich die Methylenblau in 10 mL normale Kochsalzlösung oder 1 x Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) vollständig durch vortexen.
- Filtern die 10 mg/mL Methylenblau-Lösung mit einer Spritze ....
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Ergebnisse
Die Nieren und unteren Harnwege befinden sich dorsal zu den meisten anderen inneren Organe wie Leber und Darm. Nach dem Entfernen dieser andere innere Organe, sind ein paar Nieren und Harnleiter und einer einzelnen Blase sichtbar (Abb. 1A). Auf erfolgreiche Dissektion fließt der Farbstoff injiziert das Nierenbecken in die Blase über den Harnleiter von der Niere. Das Nierenbecken ist der trichterartige dilatative proximalen Teil der Harnleiter in die Niere. Da.......
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Diskussion
Maus-Nieren sind funktionale Beginn E16.5 und ein Farbstoff-Injektion-Test ist ab diesem Zeitpunkt theoretisch möglich. Jedoch die Niere ist zu klein, um mit der Farbstofflösung injiziert werden und Phänotypen wie Hydronephrose und Hydroureter sind nicht eindeutig beobachtet, da diese Phänotypen als Nebeneffekt des Urins durch abnorme Urin Transport aufgebaut sind. Diese Phänotypen von Hindernissen wie UPJO oder UVJO, sind offensichtlich am E18.5 durch aufgeblähten Nieren und Harnleiter. Größere Nieren von Embryonen im E.......
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Offenlegungen
Der Autor hat nichts preisgeben.
Danksagungen
Ich danke Dr. Alan O. Perantoni (CDBL/NCI/NIH) für die Einreichung des Manuskripts zu unterstützen. Ich danke auch Dr. Michael Hall (CDBL/NCI/NIH) und Nirmala Sharma (CDBL/NCI/NIH) für die Bearbeitung dieser Handschrift. Ich bin dankbar für seine ausgezeichnete Maus Tierhaltung, Lai Thang (SAIC). Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health, National Cancer Institute und Center for Cancer Research unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Methylenblau | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL Einwegspritze mit BD Luer-Lok Spitze | BD | 309657 | |
| Acrodisc Spritzenfilter mit Supor Membrane | Pall Corporation | 4614 | |
| Exel Kopfhautvene (Schmetterling) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Feinfühlige Operationsschere | Roboz Chirurgisches Instrument Co. KG | RS-6702 | |
| Mikro-Präparierzange | Roboz Chirurgisches Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Pinzette; Muster #5 | Roboz Chirurgisches Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Nadeln 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Referenzen
- Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
- Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
- Bohnenpoll, T., Kispert, A.
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Nachdrucke und Genehmigungen
