Method Article

Dissektion und koronale Slice Vorbereitung Maus Hypophyse zu entwickeln

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

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Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll zur Hypophyse zu sezieren und bereiten Hypophyse koronalen Abschnitte von Mäusen zu entwickeln.

Abstract

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Die Hirnanhangdrüse oder Hypophyse ist ein wichtiges endokrine Organ Sekretion von Hormonen, die wichtig für die Homöostase. Es besteht aus zwei Drüsen mit getrennten embryonale Herkunft und Funktionen – die Neurohypophysis und die Adenohypophysis. Die entwickelnden Maus pituitäre Drüse ist klein und zart mit eine längliche ovale Form. Ein koronaler Abschnitt wird bevorzugt, um die Adenohypophysis und Neurohypophysis in eine einzige Scheibe der Hypophyse Maus angezeigt.

Das Ziel dieses Protokolls ist es, richtige Hypophyse koronalen Abschnitte mit gut erhaltenen Gewebe Architekturen aus Entwicklungsländern Mäuse zu erreichen. In diesem Protokoll beschrieben detailliert wie man sezieren und Prozess Hypophyse richtig von Mäusen zu entwickeln. Erstens werden Mäuse durch Transcardial Perfusion von Formaldehyd vor der Präparation fixiert. Dann sind drei verschiedene sezierenden Techniken angewendet, um intakte Hypophyse je nach Alter von Mäusen zu erhalten. Für Fetale Mäuse bis 4 Tage embryonalen Tag(e) 17,5-18,5 und Neugeborene bis Jahren, werden die gesamte Sella Regionen einschließlich Sphenoid Knochen, Drüse und Trigeminal Nerven indiziert. Für Welpen sind Alter postnatale Tagen (P) 5-14, der Hypophyse verbunden mit Trigeminal Nerven als Ganzes seziert. Bei Mäusen über 3 Wochen alt sind die Hypophyse sorgfältig frei aus dem umliegenden Gewebe seziert. Gewusst wie: der Hypophyse einbetten in eine korrekte Ausrichtung mithilfe der umgebenden Gewebe als Landmarken zu befriedigen koronalen Abschnitte anzeigen Diese Methoden sind hilfreich bei der Analyse von histologischer und Entwicklungsstörungen Funktionen der Hypophyse bei der Entwicklung von Mäusen.

Introduction

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Die Hirnanhangdrüse oder Hypophyse ist ein wichtiges endokrine Organ Sekretion von Hormonen, die wichtig für die Homöostase1,2. Anatomisch ist die Hypophyse eine '' Two-in-One'' Struktur bestehend aus der Neurohypophysis und der Adenohypophysis. Diese Teile haben unterschiedliche embryonale Herkunft und Funktion sehr unterschiedlich. Die Neurohypophysis ergibt sich aus der neuralen Ektoderm und sondert Oxytocin und Antidiuretic Hormon. Die Adenohypophysis stammt aus Rathkes-Tasche und ist verantwortlich für die Freisetzung von Hormonen wie Wachstumshormon, Prolaktin, Schilddrüsenhormone – Förderung, Follikel –....

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Protocol

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C57BL/6 Mäusen werden in bestimmten Pathogen-freies Bedingungen gezüchtet. Alle tierische experimentellen Methoden sind nach den Richtlinien von Animal Care und Ethikkommission medizinischen Universität zweiten Militär genehmigt.

1. Dissektion der postnatalen Entwicklung Hypophyse

  1. Perform-Anästhesie: Neugeborene Mäuse (P0 - P5) auf zerstoßenem Eis induzieren Hypothermie zu platzieren. Injizieren Sie bei Mäusen, die älter als 5 Tage alt 5 % Urethan (30 µL/g Körpergewicht) intraperitoneal, um Anästhesie zu induzieren. Antworten zu Tail/Prisen Toe zu beurteilen. Gehen Sie erst, nachdem die Maus reagiert nicht auf die Schmerzreize i....

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Results

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Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Hypophyse aus Entwicklungsländern Mäuse zu sezieren. Für die Neugeborenen Maus, die gesamte Sella-Regionen mit der Hypophyse, die Trigeminal Nerven und der Unterseite Sphenoid Knochen wurden heraus von der Schädelbasis seziert. Die kleinen und zarten Hypophyse intakt geblieben während des Prozesses (Abbildung 1A). Bei Mäusen, die älter als 5 Tage, der Hypophyse, befestigt an den seitlichen Trigeminal Nerven wurden dann.......

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Discussion

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Für die Entwicklung von murinen Hypophysen, wurde es technisch schwierig, geeignete koronalen Abschnitte aufgrund ihrer winzig und zerbrechlich Funktionen und anatomische Besonderheiten6,8zu erhalten. Einige Forschungsgruppen wählte somit Mitte sagittale Abschnitte, die Morphologie der embryonalen und neonatale Hypophyse11,12zu analysieren. Mitte-sagittale Abschnitt der Hypophyse kann aber auch zeigen vor.......

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Disclosures

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Die Autoren haben nichts preisgeben.

Acknowledgements

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Diese Arbeit wurde durch die Zuschüsse aus dem National Natural Science Foundation of China (31201086, 31470759 und 31671219) und Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900) unterstützt.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Werkzeuge/Ausrüstung
Chirurgische Schere-geradeJinZhongJ21010kann bei anderen Anbietern gekauft werden
Feine Schere-strainJinZhongWA1010kann bei anderen Anbietern gekauft werden
Blunt PinzetteJinZhongJD1020kann bei anderen Anbietern gekauft werden
Feine PinzetteDumontRS-5015zur Isolierung der Hypophysennadel
26G (0,45 mm)HongDafür die transkardiale Perfusion
Spritze (1 mL)BD300841kann bei anderen Anbietern gekauft werden
Spritze (10 mL)BDkann bei anderen Anbietern gekauft werden
35-mm-SchüsselCorning430165kann bei anderen Anbietern erworben werden
LinsenreinigungspapierShuangQuankann bei anderen Anbietern erworben werden
Anatomisches MikroskopOLYMPUS SZX-ILLB2-200kann bei anderen Anbietern erworben werden
EinbettkassetteThermo Fisher22-272423kann bei anderen Anbietern erworben werden
Das Konsolensystem für GewebeeinbettungKEDEEKD-BM11kann bei anderen Anbietern
MikrotomThermo FisherHM315Rkann von anderen Anbietern erworben
Superfrost-Plus ObjektträgerThermo Fisher22-037-246kann von anderen Anbietern erworben werden
DeckglasThermo Fisher12-543kann von anderen Anbietern erworben werden
FluoreszenzmikroskopOLYMPUSBH2-RFCAkann von anderen Anbietern erworben werden
Name<strong>UnternehmenKatalognummerKommentare
Reagenzien
UrethanBBI EB0448
NaClSigmaS9625für PBS
KClSigmaP9541für PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650für PBS
K2HPO4SigmaP2222für PBS
NaNO2Sigma237213
Heparin-Natrium-InjektionSPHH31022051für Perfusionssalzlösung
Paraformaldehyd (PFA)SigmaP6148
EthanolSCR10009218
XylolSCR10023418
ParaffinThermo Fisher8330
HämatoxylinSigmaH9627für H& E-Färbung
Eosin YSigmaE4009für H& E Färbung
Kaninchen Anti-Wachstumshormon (GH)Nationales Hormonzur Immunfärbung
AntikörperHypophyse Programm
Kaninchen Anti-Maus GFAP AntikörperSigmaG9269zur Immunfärbung
Ziege Anti-Kaninchen IgG, HRPJackson111-035-003für Immunfärbung
TSA SystemNEN Life Science ProdukteNEL700für die Immunfärbung
von Streptavidin, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356für die Immunfärbung
von Anti-FITC, Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090für die Immunfärbung
erworben werden werden ,

References

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  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

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Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

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