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Methodenartikel

Regenerative Therapie durch Suprachoroidal Zelle Autotransplantation in trockene altersbedingte Makuladegeneration: vorläufige In Vivo Bericht

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DOI:

10.3791/56469

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12. Februar 2018

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1Low Vision Research Centre of Milan, 2Department of Ophthalmology, A. Fiorini Hospital, Sapienza University of Rome, 3Glaucoma and Low Vision Study Center, Department of General Surgery and Organ Transplants, University of Bologna, 4Department of Sense Organs, Faculty of Medicine and Odontology, Sapienza University of Rome

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Das Ziel dieser Studie ist zu beurteilen, ob das Suprachoroidal Transplantat von Fettgewebe Stammzellen in den Stromazellen vaskulären Bruch enthalten und Blutplättchen abgeleitet von Platelet-Rich Plasma durch die Limoli der Netzhaut Restaurierung Technik Sehschärfe verbessern kann und Netzhautempfindlichkeit Antworten in Augen trockene altersbedingte Makuladegeneration betroffen.

Zusammenfassung

Diese Studie richtet sich an zu prüfen, ob eine Suprachoroidal Transplantat von autologen Zellen am besten korrigierte Sehschärfe (BCVA) verbessern kann und Antworten auf Microperimetry (MY) in Augen von betroffenen altersbedingte Makula Degeneration (AMD) im Laufe der Zeit durch trockene die Produktion und Sekretion von Wachstumsfaktoren (GFs) auf umliegendes Gewebe. Patienten wurden randomisiert auf jede Studiengruppe. Alle Patienten wurden mit trockenen AMD und BCVA gleich oder größer als 1 Logarithmus der Mindestwinkel der Resolution (LogMAR) diagnostiziert. Eine Suprachoroidal autologes Transplantat durch Limoli Retinal Restaurierung Technik (LRRT) erfolgte auf Gruppe A, die 11 Augen von 11 Patienten enthalten. Die Technik wurde durch Implantation von Adipozyten, Fettgewebe Stammzellen gewonnenen die stromale vaskulären Bruch und Thrombozyten aus Platelet-Rich Plasma in den Suprachoroidal Raum durchgeführt. Gruppe B, darunter 14 Augen von 14 Patienten wurde dagegen als Kontrollgruppe verwendet. Für jeden Patienten wurde die Diagnose von konfokalen scanning Laser Ophthalmoskop und spektralen Bereich optische Kohärenztomographie (SD-OCT) überprüft. In der Gruppe A BCVA verbessert, indem 0.581, 0.504 auf 90 Tage und 0.376 LogMAR nach 180 Tagen (+32.20 %) postoperativ. Darüber hinaus stieg mein Test 11,44 dB bis 12,59 dB nach 180 Tagen. Die verschiedenen Zelltypen, die hinter der Aderhaut gepfropft konnten konstant GF-Sekretion in der Aderhaut Strömung zu gewährleisten. Infolgedessen die Ergebnisse zeigen, dass Sehschärfe (VA) in der veredelten Gruppe erhöhen kann mehr als in der Kontrollgruppe nach sechs Monaten.

Einleitung

Zell-Therapie, bestehend aus der systemische oder lokalen Injektion von Stammzellen/Vorläuferzellen in den verletzten Bereich, mehrere chronische Erkrankungen zu behandeln hat in den letzten zehn Jahren1enge aufmerksam gemacht. Seit den 1990er Jahren sind Wachstumsfaktoren (GFs) für ihre potenziell therapeutische Rolle bei Retinaatrophie2untersucht worden. In der Tat können viele menschliche Zellen GFs, produzieren die spezifische Proteine in der Lage sind, zu blockieren oder zu verlangsamen, Apoptose, d.h., den programmierten Tod der Zellen3.

Es ist bekannt, dass trockene altersbedingte Makuladegeneration (AMD) eine atrophische Netzhauterkrankung wo schrittweise und irreversible Zelltod Schädigung der Photorezeptor-Schicht und damit den Verlust der zentralen visuellen Funktion4beinhaltet. AMD ist die häufigste Ursache für Erblindung bei Menschen über 55 Jahre alt in entwickelten Ländern und 80 % der alle Makula-Degenerationen, die eine wirksame Behandlung bis dato fehlen.

Mehrere Studien haben gezeigt, dass verschiedene Quellen die autologe GFs entnommen werden können. Diese umfassen verschiedene Zelltypen, einschließlich Stromazellen Fettzellen abgeleitet von orbital Fett, Thrombozyten von Platelet-Rich Plasma (PRP) abgeleitet und Fettgewebe Stammzellen (ADSCs) enthalten in den Stromazellen vaskulären Bruch (SVF) von Fettgewebe5 ,6,7. Der aktuelle Satz von GF sorgt für Netzhaut Neuroenhancement und Untersuchungen von Filatov, Meduri, Pelaez, und Limoli hat gezeigt, dass autologe Fett-Transplantation (AFT) effektiv8,9,10.

Darüber hinaus eine vorherige Studie zeigten signifikante Verbesserungen in Elektroretinogramm (ERG) Daten, Post Suprachoroidal autologes Transplantat, trockene AMD betroffenen Augen11aufgenommen. Die chirurgisch veredelte Gewebe im Bereich Suprachoroidal moduliert die parakrine Sekretion von Netzhautzellen, verzögert ihre Apoptose6,7,12. Unter Berücksichtigung der äußeren nuklearen Schichtdicke die histologische Untersuchung der Netzhaut von Meerschweinchen zufolge GFs eine trophische Wirkung auf die Netzhaut haben könnte. Daher kann die direkte oder indirekte Nutzung der GFs potenziell therapeutische Vorteile durch ein ausgewogenes Verhältnis zwischen molekularen Induktoren und Inhibitoren6,7,12bringen.

Der Zweck dieser Methode ist zu beurteilen, ob die Suprachoroidal Transplantat von Adipozyten, ADSCs SVF und PRP am besten verbessern kann Sehschärfe (BCVA) und Microperimetry (MY) Reaktionen in trockene AMD betroffenen Augen korrigiert. Diese Studie zielt darauf ab, die therapeutische Wirkung von autologen auf der Grundlage seiner GF Produktion gemäß der zitierten Literatur6,7,12,13zu demonstrieren.

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Protokoll

Das Studienprotokoll wurde von der Ethikkommission der Low Vision Akademie genehmigt und allen Fächern eine schriftliche Einwilligung gemäß der Deklaration von Helsinki unterzeichnet. Diese Studie hat ethische Genehmigung von Loughborough und Sheffield Universitäten erhalten.

Hinweis: Die ein- und Ausschlusskriterien Kriterien der trockene altersbedingte Makuladegeneration Patienten Suprachoroidal autologes Transplantat durch Limoli Retinal Restaurierung Technik (LRRT) zu erhalten ist in Tabelle 1beschrieben.

1. Diagnose der trockene altersbedingte Makuladegeneration Patienten

  1. Ermitteln Sie die Diagnose mit der konfokalen scanning Laser Ophthalmoskop, SD-OCT und MY.
  2. Jede Gruppe BCVA für nah und fern Abstand zu bewerten. Maßnahme VA für Nahsicht (Nahaufnahme) in Punkte (Pts). BCVA zum Zeitpunkt 0 (T0), 90 (T90), Messen und 180 Tage (T180) im Vergleich zu frühe Behandlung diabetischer Retinopathie Studie (EDTRS) auf 4 Meter in LogMAR Charts.
  3. Aufzeichnung elektrischer Skotopisches, mesopischen und photopischen Zellaktivität oder Flash-ERG, nach den Maßstäben, die im Jahr 2009 von der internationalen Gesellschaft für klinische Elektrophysiologie Vision (ISCEV)11.

(2) anesthetization

Hinweis: Der Goldstandard in der Anästhesie während der LRRT ist topische Anästhesie, verstärkt durch Sub-Zapfen Infiltration der Narkose und Sedierung. In bestimmten Fällen ist eine Vollnarkose bevorzugt.

  1. Beziehen Sie Hornhaut und Bindehaut Anästhesie durch die Anwendung von topischen Lokalanästhetika eingeflößt tropfenweise 15-20 min vor der Operation mit Lidocain bei 4 % und Ropivacain 1 %.
  2. Betäubung durch Infiltration direkt in Sub-Bindehaut zu injizieren und Subtenon der Räume.
  3. Verwenden Sie lokale Infiltration in der Bauchregion, bevor das Fettgewebe extrahiert wird, sowohl in der Sub-Bindehaut und Sub-Zapfen Räume, 12 mm aus dem Limbus. Anzunehmen Sie örtlicher Betäubung des Carbocaine oder Marcain gemischt mit 1.200 IU Epinephrin.
  4. Bieten Sie intraoperativer Sedierung durch die Narkose, die ordnungsgemäß ausgeführt werden kann, mithilfe von Fentanyl als narkotisches Analgetikum durch wiederholte kleine Boli. Die Dosierung ist in der Regel 0,025 mg Fentanyl mit 1 mg Midazolam pro Bolus.

3. Limoli der Netzhaut Restaurierung Technik Vorbereitung

Hinweis: Diese Technik stellt eine Variante der Pelaezs Intervention durch die orbitale Eigenfett in den Subscleral Raum1,6,7,12transplantiert wird. Chirurgisch transplantierten Zellen produzieren viele GFs mit neurotrophen und Angiotrophic Eigenschaften in das umliegende Gewebe, Aderhaut und Netzhaut18,19,20,21,22 ,23,24,25. In LRRT der Abstand zwischen veredelte autologen Zellen und Aderhaut ist durch tiefe Sklerektomie reduziert, und die Kontaktfläche zwischen Stiel und Aderhaut wird erweitert, um die parakrine autologen Zellen Sekretion in die Aderhaut Fluss9zu fördern, 10,14.

  1. Führen Sie richtige Desinfektion jedes Auges vor der Operation mit zellulären Pfropfen zwischen der Aderhaut und Lederhaut, eine Prozedur namens Limoli Retinal Restaurierung Technik (LRRT)15,16,17.
  2. ADSCs, gewonnen durch Coleman Et Al. und Laurentius Technik (Abbildung 1) von Bauchfett, in den SVF in der Sovrachoroidal Platz15,16,17-Transplantat.
  3. Infiltrieren adipösen Pedikels mit Thrombozyten von PRP-Gel erhalten die folgenden Schritte abgeleitet.
  4. Zentrifugieren Sie Blut6,12 und sammeln Sie Platelet-Rich Plasma (PRP) zu. Der Anreiz für Thrombozyten Degranulation verursacht GF Freisetzung aus dem Fettgewebe Pedikels6,12.

4. technische Spezifikationen und Strategie

Hinweis: Fettgewebe gesammelt und gereinigt von der Abdominal-subkutanen Schicht des Patienten, nach der Lawrence und Coleman Technik17(Table of Materials).

  1. Manuell Ernte 10 mL des Fettgewebes aus der Abdominal-subkutanen Schicht eines jeden Patienten, mit einer stumpfen Kanüle 3mm an einer Verriegelung Spritze nach der Lawrence und Coleman Technik17 (Figuren 2A/2 b) angeschlossen.
  2. Reine SVF des Fettgewebes aus Blut, Fett, Öl und Flüssigkeit durch Zentrifugation für 5 min bei 1.500 x g bei 20 ° C (Abbildung 2C) zu trennen. Die SVF ist sehr reich an ADSCs17.
  3. Sammeln Sie 8 mL des menschlichen peripheren Blut mit einer 22 G Nadel und in einem separaten Rohr für PRP Vorbereitung.
  4. Zentrifugieren Sie das gesammelte Blut für 5 min bei 1.500 x g bei 20 ° C (Abb. 2D). In LRRT, die anschließenden Änderungen ergeben bessere Überlebensrate von körpereigenem Fett Transplantats ADSC Verbreitung, die erhöhte choroidale Durchblutung begünstigt, und eine umfassendere Modulation des Handelns der jene Faktoren, die nur durch Fett7abgesondert werden, 11,17.
  5. Die Suprachoroidal Tasche (mehr dazu in Schritt 4, in bestimmten 4.4 und 4.5) zu bauen, um Platz für das Transplantat entnommen orbitale Fett und sättigen das Restvolumen von dieser Tasche mit einer Mischung aus ADSCs von SVF und PRP, erhalten nach der Lawrence und Coleman Technik17.

5. Suprachoroidal Autotransplantation von LRRT (Limoli der Netzhaut Restaurierung Technik): chirurgische Verfahren und technische Details

  1. Die Lederhaut mit 6-0 Seide Naht, in der Nähe von minderwertig-temporalen Limbus zu verankern.
  2. Öffnen Sie die subkonjunktivale und Subtenonian Raum bei 11 mm unterlegen-temporalen Limbus, mit 5.5" Westcott Tenetomy gebogene Schere.
  3. Legen Sie die Limoli-Basile Bindehaut Aufrollvorrichtung in diesem Raum eine skleralen OP-Feld zu machen.
  4. Schneiden Sie eine halbmondförmige Messer 5 mm abgewinkelt Abschrägung aufbrauchen, eine Klappe auf der Seite in der Sklera bei 8 mm aus dem Limbus. Die Klappe Scharnier ist immer radial und auf der linken Seite des Chirurgen.
  5. Öffnen Sie im Inferior-zeitliche Quadranten, bei 8 mm aus dem Limbus eine tief skleralen Tür von ca. 5 mm an der Seite durch radiale Scharnier mithilfe eine halbmondförmige Messer, abgewinkelte Abschrägung oben. Sklerektomie in eine ausreichende Tiefe die Schiefer Farbe der Aderhaut anzeigen führen.
  6. Erstellen Sie eine Lücke, indem Sie entfernen ein wenig Operculum im distalen Teil der Klappe, um die Blutzirkulation in den nachfolgenden Suprachoroidal Autotransplantation zu erleichtern.
  7. Auszug mit ophthalmologischen Zange das orbitale Fett von einer Lücke oberhalb der minderwertigen schräger Bauchmuskel. Stellen Sie sicher, dass das abgesaugte Fett ausreichend durchblutet ist, um nach ihrer Implantation überleben können.
  8. Legen Sie vorsichtig die autologe Fett Klappe auf der Aderhaut Bett und Naht mit choroidale 6/0 Polyglactin Faser am proximalen Rand der Tür.
  9. Naht der skleralen Klappe, Kompression auf den dicken Stiel oder seiner Nährstoff Schiffe zu vermeiden.
  10. Infiltrieren das Stroma von den dicken Stiel mit 1 mL PRP Gel (gewonnen durch Zentrifugieren des Blutes Materials, Trennung von der Komponente und Thrombozyten Degranulation26) mit einer Kanüle 30 G Winkel (30°).
  11. Bereiten Sie die Seiten der Bindehaut für die Naht. Dann entfernen Sie die Bindehaut Aufrollvorrichtung.
  12. Naht der Bindehaut, mit 6/0 Polyglactin Faser.
  13. Lassen Sie bevor ich schließe Platz um in den Subscleral Raum zwischen der Klappe, der Aderhaut und der Aderhaut Autotransplantation, einen kleinen flexibleren Plastikschlauch mit körpereigenem Fett Transplantat einzufügen.
  14. Sättigen, ist den verbleibenden Raum zwischen körpereigenem Fett Transplantat, Aderhaut und skleralen Klappen mit 0,5 cc des SVF (Rich der ADSCs), zuvor im Schritt 3.2, indem ein kleiner flexibler Plastikschlauch in der skleralen Tasche eingelegt bereit.
  15. Schließen Sie nach Sättigung der Überlebensraum die Naht.
  16. Nach der Operation drei Tage der Antibiotika-Therapie mit 500 mg Azithromycin zu verwalten. Darüber hinaus bieten Sie Augentropfen Therapie mit einer antibiotischen und Steroid Kombination wie Chloramphenicol und Betamethason, ca. 15-20 Tage.
    Hinweis: Eine Autotransplantation bestehend aus Fettzellen, ADSCs aus SVF und PRP jetzt26eingeholt wurde. Verringern Sie den Abstand zwischen der veredelten autologen Zellen und Aderhaut durch tiefe Sklerektomie, parakrine Sekretion von autologen Zellen in der Aderhaut Energiefluss zu stimulieren. Erweitern Sie den Bereich der Kontakt zwischen dem Stiel und Aderhaut, für den gleichen Zweck.

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Ergebnisse

Bei der hier vorgestellten Verfahren wurden zwei Gruppen von trockenen AMD betroffenen Patienten mit BCVA gleich oder größer als 1 Logarithmus der Mindestwinkel der Resolution (LogMAR) in die Studie eingeschrieben. Gruppe A, Gruppe B, darunter 14 Augen von 14 Patienten darunter 11 Augen von 11 Patienten, empfangene Suprachoroidal autologes Transplantat durch Limoli Retinal Restaurierung Technik (LRRT), während, diente als Kontrollgruppe.

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Diskussion

Der primäre Zweck dieser Studie war es zu beurteilen, ob die Suprachoroidal Transplantat von Adipozyten, ADSCs SVF und PRP VA und Netzhautempfindlichkeit in trockene AMD betroffenen Augen im Laufe der Zeit verbessern könnten. Ein weiteres Hauptziel war, zeigen mögliche therapeutische Wirkungen dieser Zellen, basierend auf der neueren Literatur, da mehrere präklinische Studien haben vorgeschlagen, dass GF-Therapie für die Patientenversorgung auf verschiedene Krankheiten nützlich sein könnten.

I...

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Offenlegungen

Vorgestellt auf der ARVO 2015 Mai 3-7-Denver, CO - USA.

Danksagungen

Die Autoren haben keine Bestätigungen.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Stumpfe Kanüle, 3 mm;Mentor, Santa Barbara, Kalifornien.
Luer-LokTM Spritze. BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT Rohr. RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Zentrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1,00 Zoll (0,9 mm x 25 mm). BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Konfokales Scanning-Laser-OphthalmoskopNidek Inc, Fremont, KalifornienNidek F10 
Cirrus 5000 Spektralbereich-Optische KohärenztomographieCarl Zeiss Meditec AG, Jena, Deutschland  SD-OKT 
Maia 100809 Mikroperimetrie CenterVue S.p.A., Padua, Italien
Elektromedizinisches System der Augenelektrophysiologie,C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italien  Retimax für ERG 

Referenzen

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