Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren der Fisch Sperma Bewertung mit computerunterstützten Spermiogramm und Kühlgeräten. Die Software bietet eine schnelle, genaue und Quantitative Analyse von Fisch Spermienqualität basierend auf Motilität der Spermien, die ein nützliches Werkzeug in der Aquakultur Reproduktionserfolg zu verbessern sein kann.
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Methodenartikel
Fisch Sperma Bewertung mit Software und Kühlgeräte
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Für die Qualitätsbewertung der Gameten gibt es innovative, schnelle und quantitative Techniken, die nützliche Hinweise für die Aquakultur liefern können. EDV-Systeme für Spermiogramm wurden entwickelt, um mehrere Parameter zu messen und eines der am häufigsten gemessenen ist die Beweglichkeit der Spermien.
Zunächst wurde dieser Computertechnologie für Säugetierarten, entwickelt, obwohl es auch für Fisch-Sperma-Analyse verwendet werden kann. Fische haben Besonderheiten, die Spermien Bewertung wie eine kurze Motilität Zeit nach der Aktivierung und in einigen Fällen Anpassung an niedrigere Temperaturen beeinflussen können. So ist es notwendig, sowohl Hardware als auch Software-Komponenten, Motilität Analyse effizienter für Fisch Spermiogramm machen zu ändern. Für Säugetier-Samenzellen wird die Heizplatte verwendet, um optimale Temperaturen von Spermien zu erhalten. Für einige Fischarten ist es jedoch vorteilhaft, eine niedrigere Temperatur zu verwenden, um die Dauer der Motilität, zu verlängern, da das Sperma weniger als 2 min. lang aktiv bleiben. Kühlgeräte sind daher notwendig, über die Zeit der Analyse, einschließlich auf dem optischen Mikroskop Proben bei konstanter Temperatur im Kühlschrank zu lagern. Dieses Protokoll beschreibt die Analyse der Fisch Samenzellenmotilität mit Software für Spermiogramm und neuen Kühlgeräten um die Ergebnisse zu optimieren.
Einleitung
Die Wirksamkeit der Wiedergabe hängt von der Qualität der beiden Gameten (Eizellen und Spermien)1,2. Dies ist der wichtigste Faktor, der zur erfolgreichen Befruchtung, soll die Entwicklung von lebensfähige Nachkommen3,4beiträgt. Die günstige Bewertung der Gameten Qualität ist das beste Werkzeug für die Definition der Fruchtbarkeit Potenzial einer Probe.
Mischen von Sperma von mehreren Männern, ist eine gängige Praxis bei der Herstellung von vielen aquatischen Nutztierarten4. Jedoch die Spermien Variab....
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Protokoll
Verfahren mit tierische Probanden wurden genehmigt (2015/VSC/Erbse/00064) durch die allgemeine Ausrichtung der landwirtschaftlichen Produktion und Vieh an der Universitat Politècnica de València.
1. sammeln Sie Sperma aus reifen europäischen Aale in Gefangenschaft
Hinweis: Verwendung europäischer Aal Männchen im Becken mit Meerwasser und ein Kreislaufsystem bei konstanter Temperatur (20 ° C) beibehalten. Behandlung mit Hormonen durch wöchentliche intraperitoneale Injektion (humanes Choriongonadotropin (hCG); 1,5 IU pro g Fisch Körpergewicht). Akklimatisieren Sie allmählich mit 3 Tage in Süßwasser Fische gefolgt von....
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Ergebnisse
Analyse der Zeit-Effekt auf die Beweglichkeit der Spermien
Im Falle der europäische Aal, der Prozentsatz der statischen Spermien erhöht von 15 s bis 120 s nach Aktivierung (von 24,4 % auf 40,7 %) und der Anteil der mobilen progressive Spermien verringert (von 36,9 % auf 20,9 %) (Abbildung 1A und 1 b). Basierend auf Geschwindigkeit, Samenzellen Zellen zeigten eine Ab.......
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Diskussion
Für verschiedene Arten, darunter Fisch ist die Sperma-Analyse-Software in diesem Protokoll verwendeten von Forschern weltweit eingesetzt. Fische haben jedoch einige Besonderheiten, die die Spermien Bewertung beeinflussen können. Fisch-Spermien zeigte high-Speed im Moment der Aktivierung, die schnell sinkt und führt zu einer kurzen Zeit der Motilität nach der Aktivierung. Außerdem die Temperatur der Reproduktion ist Spezies-abhängig, und in einigen Fällen könnte um 4 ° C2,
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Dieses Projekt wird finanziell unterstützt von der COST-Vereinigung (Lebensmittel und Landwirtschaft COST Action FA1205: AQUAGAMETE und der Europäischen Union Programm Horizont 2020 Forschung und Innovation unter Marie Sklodowska-Curie Projekt IMPRESS (GA Nr. 642893). Wir möchten das Wissenschaftlerteam des PROiSER, speziell für den Schüler Alberto Vendrell Bernabéu, für seine aktive Mitarbeit in der Videoaufzeichnung dieses Projektes danken.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Humanes Choriongonadotropin | Argent Chemical Laboratories | hCG | Hormon |
| Benzocain | Merck | E1501 Sigma | Anästhesie |
| Natriumbicarbonat | Merck | S5761 Sigma | P1 mittel |
| Natriumchlorid | Merck | 1.06406 EMD Millipore | P1 Medium |
| Magnesiumchlorid | Merck | 1374248 USP | P1 Medium |
| Kaliumchlorid | Merck | P3911-500G | P1 Medium |
| Calciumchlorid | Merck | C7902-500G | P1 Medium |
| Handelssalz | Aqua Medic | Meersalz | Aktivator-Lösung |
| BSA | Merck | 05470 Sigma | Aktivator-Lösung |
| Falcon Röhrchen 15 ml | Merck | T1943-1000EA | |
| Falcon Röhrchen Halterung | Merck | R5651-5EA | |
| Eppendorfs | Merck | T9661-1000EA | |
| Mikropipette 20 & Mikro; l | Gilson | PIPETMAN® Classic | |
| Mikropipette 10 & Mikro; l | Merck | Z683787-1EA | |
| Spitzen für Mikropipetten 20 & Mikropipetten l | Merck | Z740030-1000EA | |
| Spitzen für Mikropipetten 10 & Mikropipetten; l | Merck | Z740028-2000EA | |
| Spermtrack | PROiSER | Zählkammer | |
| TruMorph | PROiSER | TruMorph | |
| Mikroskop UB 200i Serie | PROiSER | Mikroskop | |
| Kühlplatte | PROiSER | Prototyp | |
| Kühlblock | PROiSER | Prototyp | |
| ISAS v1 | PROiSER | ISAS Software |
Referenzen
- Kime, D. E., et al. Use of computer-assisted sperm analysis (CASA) for monitoring the effects of pollution on sperm quality of fish; application to the effects of heavy metals. Aquatic Toxicology. 36, 223-237 (1996).
- Kime, D. E., et al. Computer-assisted sperm analy....
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Nachdrucke und Genehmigungen
