In dieser Arbeit beschreiben wir eine akute, chronische und Mehrgenerationen Bioassay zur Untersuchung der Auswirkungen von Einzel- und kombinierte Stressoren auf die türkisfarbene Killifische Nothobranchius Furzeri. Dieses Protokoll dient zur Lebensgeschichte Züge (Mortalität, Wachstum, Fruchtbarkeit, Gewicht) und kritische thermische Maximum zu studieren.
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Methodenartikel
Protokoll für akute und chronische Ökotoxizität Prüfung von Türkis Killifische Nothobranchius furzeri
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Killifische Nothobranchius Furzeri ist eine aufstrebende Modellorganismus auf dem Gebiet der Ökotoxikologie und ihre Anwendbarkeit bei akuten und chronischen Ecotoxicity Tests nachgewiesen. Insgesamt ist die Empfindlichkeit der Spezies zu toxischen Verbindungen im Bereich mit, oder höher als die der anderen Modell-Arten.
Diese Arbeit beschreibt Protokolle für akute, chronische und Mehrgenerationen Bioassays Einzel- und kombinierte Stressor Auswirkungen auf N. Furzeri. Aufgrund seiner kurzen Reifezeit und Lebenszyklus erlaubt dieses Wirbeltiere Modell die Studie von Endpunkten wie Reifezeit und Fruchtbarkeit innerhalb von vier Monaten. Transgenerationalen Ökobilanz-Belichtung Studien können in weniger als 8 Monaten durchgeführt werden. Da diese Sorte produziert Eizellen, die Trockenheit sind und bleiben für Jahre lebensfähig, die vor-Ort-Kultur der Arten ist nicht erforderlich, aber Einzelpersonen können rekrutiert werden, wenn erforderlich. Die Protokolle sind auf Maß Lebensgeschichte Züge (Mortalität, Wachstum, Fruchtbarkeit, Gewicht) und kritische thermische Maximum konzipiert.
Einleitung
Empfindlichkeit-Profile aus einer Reihe von Arten, strategisch ausgewählten Schadstoffen wurden beschrieben1 für die europäischen REACH-Gesetzgebung (Registrierung, Bewertung, Zulassung und Beschränkung von Chemikalien). Akute oder kurzfristige Toxizitätstests wurden meist für diesen Zweck eingesetzt, da sie einen schnellen Hinweis auf eine Art Sensibilität geben. Jedoch in ihrer natürlichen Umgebung Organismen sind über einen viel längeren Zeitraum ausgesetzt und vollständigen Lebenszyklus oder sogar mehrere Generationen möglicherweise betroffenen2. Darüber hinaus sind Organismen in verschmutzter Umgebung in der Regel a....
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Protokoll
Alle hier beschriebene Methoden wurden von der Ethikkommission der KULeuven genehmigt.
(1) schlüpfen und allgemeine Wartung von N. Furzeri
- Bereiten Fisch Medium (pH 7) bei einer Temperatur von 14 ° C und eine Leitfähigkeit von 600 µS/cm (24 ° C) gereinigtes Wasser Typ II, mit zusätzlichen standardisierte Salze hinzufügen.
- Wählen Sie aus Eiern von der GRZ (Gona-Rhe-Zhou) Labor-Linie, die unter standardisierten Bedingungen13gespeichert wurden. Wählen Sie Eiern in der DIII-Phase (d. h. bereit zu schlüpfen), erkennbar durch die Anwesenheit von goldenen Augen9 ....
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Ergebnisse
Zeigen Sie die Ergebnisse der akuten Exposition von N. Furzeri , unterschiedliche Konzentrationen von Kupfer, berechnet wie in 2.5.2, Cleardose-Wirkungs-Beziehungen (Abbildung 1). Gibt es eine Zunahme der Mortalität mit zunehmender vergiftendes Konzentration. LC50 Werte sinken im Laufe der Zeit, was bedeutet, dass mit abnehmender Konzentration, mehr Zeit, vor 50 % der Wiederholungen sterben vergeht. Für detaillierte Ergebnisse auf die akut.......
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Diskussion
Diese Arbeit beschreibt eine neue Bioassay mit Nothobranchius Furzeri, einer aufstrebenden Modellorganismus, um das Individuum zu studieren und langfristige Auswirkungen der Giftstoffe und andere Stressfaktoren kombiniert. Die vorgestellten Protokolle wurden erfolgreich eingesetzt, um die Empfindlichkeit der Gattung in ein Array von Schadstoffen (Kupfer, Cadmium, 3,4-Dichloroaniline und Chlorpyrifos) zu messen. Aufgrund seiner schnellen Lebenszyklus dieses Wirbeltiere Modell ermöglicht eine Beurteilung der suble.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Wir sind dankbar, die Kugel-Gruppe von der UAntwerpen und der Abteilung für Pflanzenschutz an der dringend für die Analyse von Wasserproben. Unterstützung bei diesem Projekt wurde von der Excellence Center bereitgestellt "Eco und sozio-evolutionäre Dynamik des Forschungsfonds KU Leuven (PF/10/007). AFG (11Q0516N) und ESJT (FWO-SB151323) wurden als Doktoranden gefördert und TP (12F0716N) als Post-Doktorand von FWO Flanders (Fonds Wetenschappelijk verwendet).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| gereinigtes Wasser Typ 1 (milli Q) | Millipore | ||
| Meersalz | Instant Ocean | ||
| 2L Kunststofftank | SAVIC | Immer getrenntes Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen | |
| 1L Kunststofftank (Laichen) | Avamoplast | Immer getrenntes Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen | |
| Netze | Aqua bilzen | Immer getrenntes Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen | |
| 2L Gläser | Sepac-Flacover | Immer separates Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen | |
| 0,5L Gläser | Sepac-Flacover | Immer separates Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen | |
| Artemia Eier | Ocean Nutrition | ||
| chironomus | Ocean Nutrition | gefroren | |
| tricaine | Sigma aldrich | ||
| Petrischalen | VWR | ||
| Parafilm | VWR | ||
| Pipetten | MLS | ||
| Pinzette | FST | ||
| 500 µ m Maschensieb | / | selbstgebautes | |
| Mikrozentrifugenröhrchen (2ml) | MARKE | Zur Lagerung von Fisch in Gefrierglasfläschchen | |
| Sigma aldrich | Für die Wasseranalyse | ||
| Wägeschiffchen | MLS | ||
| Jiffy 7c Pellets | Jiffy | ||
| Wasserbad | Gilac | für Ctmax | |
| flüssiger Stickstoff | Air liquide | ||
| digitales Thermometer | Testo AG | testo 926 | |
| HETO therm Heizung | Anker Schmitt | ||
| kalibrierte Waage | Mettler-Toledo AG | ||
| Kamera | / | ||
| Plattform für Kamera | / | Selbstbau | |
| Multiparameter-Kit | HACH | ||
| Gefrierschrank (-80°; C) | Panasonic Ultratiefkühlschrank | ||
| Name | Company | Katalognummer | Kommentare |
| Fysio | |||
| Homogenisierungspuffer | VWR | 0,1 M TRIS– HCl, pH 8,5, 15 % Polyvinylpyrrolidon, 153 &Mikro; M MgSO4 und 0,2 % Triton X-100 | |
| Chloroform:Methanol | Sigma Aldrich | ||
| Glyceryltripalmitat | Sigma Aldrich | ||
| Amyloglucosidase | Sigma Aldrich | A7420 | |
| Glukoseassay-Reagenz | Sigma Aldrich | G3293 | |
| Biorad Proteinfarbstoff | VWR | ||
| 96-Well-Mikrotiterplatte | Greiner Bio-one | ||
| 384 Mikrotiterplatten | Greiner Bio-one | ||
| 2 ml Glasröhrchen | Fiers | Für die Fettanalyse | |
| 2,5ml eppendorf Röhrchen | VWR | ||
| Homogenisator | Ultra-turrax TP 18/10 | ||
| Photospektrometer | Infinite M200 TECAN | ||
| Heizung für Glasröhrchen | Hach CSB REACTOR | ||
| Zentrifuge | Eppendorf Centrifuge 5415 R | ||
| Inkubator | Bumako |
Referenzen
- European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
- Philippe, C., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
