Eine effiziente Vorbereitung Beispielmethode Kohlenhydrat Ionen-Signale in der Matrix-unterstützte Laser Desorption/Ionisierung Massenspektrometrie verbessern

Summary

Ein Protokoll für die Verbesserung der Kohlenhydrat Ionen-Signale in der MALDI-Massenspektrometrie durch Reform kristallinen Strukturen während der Probe Herstellungsverfahren wird demonstriert.

Abstract

Probenvorbereitung ist ein kritischer Prozess in der Massenspektrometrie (MS) Analyse von Kohlenhydraten. Obwohl Matrix-unterstützte Laser Desorption/Ionisierung (MALDI) MS ist die Methode der Wahl in Kohlenhydrat-Analyse, schlechte Ionen-Signale und Daten Reproduzierbarkeit der Kohlenhydrat-Proben weiterhin ernste Probleme. Für die Quantitative Analyse von Kohlenhydraten ist ein wirksames analytische Protokoll bietet überlegene Datenqualität erforderlich. Dieses Video zeigt Beispiel Vorbereitung Protokolle zur Verbesserung der Signalintensität und minimieren Datenabweichungen von Kohlenhydraten in MALDI-MS. Nach der Trocknung und Kristallisation der Probe Tröpfchen ist die Kristall-Morphologie von Methanol vor der massenspektrometrischen Analyse reformiert. Die Verbesserung in Kohlenhydrat-Signal wird mit MALDI bildgebende Massenspektrometrie (IMS) untersucht. Experimentelle Ergebnisse zeigen, dass Crystal Reformation Kristallstrukturen passt und Kohlenhydrat Analyten verteilt. Im Vergleich zu den getrockneten Tropfen Zubereitungsart in konventionellen MALDI-MS, Reform Kohlenhydrat Kristall Morphologien mit Methanol zeigt deutlich bessere Signalintensität, Ion Bildverteilung und Datenstabilität. Da die Protokolle hierin zeigte keine Veränderungen in der Probenzusammensetzung beinhalten, sind sie generell für verschiedene Kohlenhydrate und Matrizen.

Introduction

Kohlenhydrat-Analyse ist ein wichtiges und herausfordernden Thema. Kohlenhydrate und deren Derivate spielen eine wichtige Rolle lebenden Organismen^1,2,3. Diese Moleküle haben komplizierte Strukturen und neigen dazu, zu zersetzen. Viele von ihnen können nicht eindeutig aufgrund von Schwierigkeiten bei der Trennung und Erkennung charakterisiert werden. Obwohl die Analyse einer Vielzahl von Biomolekülen, aufgrund seiner Sensibilität und nachvollziehbare Ergebnisse⁴, Matrix-unterstützte Laser Desorption/Ionisierung (MALDI) Massenspektrometrie (MS) angewend....

Protocol

1. Probe Platte Vorkonditionierung

1. Reinigung der Probenteller
   1. Nitril-Handschuhe zur Vermeidung von Kontamination der probenplatte während der Reinigung zu tragen.
   2. Handwäsche-Probenteller mit 100,0 mL Reinigungslösung (1,0 mg/mL).
   3. Handwäsche-Probenteller mit destilliertem, entionisiertem Wasser (DDW).
   4. Spülen Sie die Probenoberfläche Platte mit 30,0 mL MeOH.
   5. Setzen Sie Probenteller in einem 600 mL-Becherglas und füllen sich mit DDW bis Probenteller vollständig in Wasser eingetaucht ist.
   6. Setzen Sie den Becher in ein Ultraschall Bad (siehe Tabelle der Mate....

Results

Repräsentative SEM Bilder der SLe^A gemischt mit DHB vorbereitet, mit DD und Rekristallisation Methoden sind in Abbildung 1dargestellt. Eine typische Morphologie der DHB ist, da durch die DD-Methode vorbereitet große nadelförmige Kristalle an der Felge und feine kristalline Strukturen in der Mitte der Probe stellen. Die typischen Längen der solche nadelförmige Kristalle sind ~ 100 µm. Nach Rekristallisation von MeOH hat die Probe eine größere Fläche.......

Discussion

Probe Heterogenität ist ein entscheidendes Problem in der MALDI-MS. DD ist die am häufigsten verwendeten Probe Vorbereitung Methode, aber die daraus resultierende Kristalle sind sehr heterogen. Solche Beispiele zeigen schlechtes Signal von Schuss zu Schuss und Probe zu Probe Reproduzierbarkeit. Auf der Suche nach "Sweet Spots" in Probeflächen während der Datenerfassung ist daher, ein gemeinsames Vorgehen in MALDI-Experimente. Solchen heterogenen Proben sind ungeeignet für die Quantifizierung in Routineanalysen.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagenz
Detergent Pulver	Alconox	242985
Methanol	Merck	106009
Acetonitril	Merck	100003
2,5-Dihydroxybenzoesäure (DHB)	Alfa Aesar	A11459
Sialyl-Lewis A (SLeA)	Sigma-Aldrich	S1782
Maltoheptaose	Sigma-Aldrich	M7753
Pipettenspitzen	Mettler Toledo	17005091
Mikrozentrifugenröhrchen	Axygen	MCT-150-C
Equipment
Milli-Q Wasseraufbereitungssystem	Millipore	ZMQS6VFT1
Puderfreie Nitrilhandschuhe	Microflex	SU-690
600 mL Becherglas	Duran	2110648
Ultraschallreiniger	Delta	DC300H
Hygrometer	Wisewind	5330
Stickstoffgas-Durchflussmesser	Dwyer	RMA-6-SSV
Thermoelemente vom Typ K	Digitron	311-1670
Vortex-Mischer	Scientific Industries	SI-0236
Mini-Zentrifuge	Select BioProducts	Force Mini
Pipette	Rainin	pipet-lite XLS
Stereomikroskop	Olympus	SZX16
Temperierbare Trockenkammer	Dieses Labor
Ultraflex II TOF/TOF Massenspektrometer	Bruker Daltonics
MTP 384 Zielplatte Stahl poliert BC	Bruker Daltonics	8280781
Flexcontrol Version 3.4	Bruker Daltonics		Steuerungssoftware
Fleximaging Version 2.1	Bruker Daltonics		Imaging Software
Flexanalysis Version 3.4	Bruker Daltonics		Analysesoftware