Obwohl viele Insekten in der Unterordnung Heteroptera (Insecta: Hemiptera) sind giftig, deren Venom-Zusammensetzung und die Funktionen ihrer Venom-Toxine sind meist unbekannt. Dieses Protokoll beschreibt Methoden zum Heteropteran Gifte für weitere Charakterisierung, mittels Elektrostimulation, Belästigung und Drüse Dissektion zu ernten.
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Methodenartikel
Ernte Venom Giftstoffe aus Assassin Bugs und andere Heteropteran Insekten
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Heteropteran Insekten wie Assassin Bugs (Reduviidae) und riesigen Wasserwanzen (Belostomatidae) stammte aus einem gemeinsamen Vorfahren predaceous und giftige, und die Mehrzahl der erhaltenen Wanzen behalten diese trophische Strategie. Einige Wanzen ernähren vertebrate Blut umgestellt haben (z. B. Kissing Fehler, Triatominae; und Bettwanzen, Cimicidae) während andere zurückgesetzt haben, ernähren sich von Pflanzen (die meisten Pentatomomorpha). Allerdings ist mit Ausnahme von Kissing Bugs verwendet, um zu erleichtern, Blut-Fütterung, wenig Speichel über Heteropteran Gifte im Vergleich gegen die Gifte der Schlangen, Spinnen und Skorpione bekannt.
Ein Hindernis für die Charakterisierung von Heteropteran Venom Giftstoffe ist die Struktur und Funktion der Venom/Lippen Drüsen, die sowohl morphologisch komplex sind und mehrere biologische Aufgaben (Verteidigung, Beutefang und extraoralen Verdauung). Dieser Artikel beschreibt drei Methoden, mit denen wir erfolgreich Heteropteran Gifte zu sammeln. Erstens stellen wir Elektrostimulation sowie eine komfortable Möglichkeit, Venom zu sammeln, die oft tödlich, wenn injiziert ist Beute Tiere entfällt die Kontamination von Drüsengewebe. Zweitens zeigen wir, dass sanfte Belästigung der Tiere ausreichen, um Venom Extrusion aus dem Rüssel und/oder Venom spucken in einigen Gruppen von Wanzen zu produzieren. Drittens, beschreiben wir Methoden zur Ernte Venom Giftstoffe durch Dissektion narkotisierter Tiere, die Giftdrüsen zu erhalten. Diese Methode ist komplementär zu anderen Methoden, wie es gestatten, Ernte von Toxinen aus Taxa in denen Elektrostimulation und Belästigung unwirksam sind. Diese Protokolle können Forscher Giftstoffe aus Heteropteran Insekten zur Charakterisierung von Struktur und Funktion und mögliche Anwendungen in Medizin und Landwirtschaft zu ernten.
Einleitung
Heteropteran Gifte sind potent bioaktiven Substanzen1. Beispielsweise die Venom/Speichel Absonderungen von Blut-Fütterung Heteroptera wie Kissing Bugs (Triatominae) und Wanzen (Cimicidae) erleichtert die Fütterung durch Störung der Hämostase2. Giftstoffe in diese Gifte Zielen auf mehrere Wege einschließlich Koagulation, Thrombozytenaggregation sowie Vasokonstriktion und den Schmerz und Jucken Wege. Gifte von den meisten anderen Heteropteran-Arten werden angepasst, um Raub, anstatt Blut-Fütterung zu erleichtern. Ihre Gifte verursachen Lähmung, Tod und Gewebe Verflüssigung bei in Wirbellose Tiere3
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Protokoll
Dieses Protokoll entspricht der University of Queensland Maßnahmengruppe in Responsible Care und das Verwenden von Tieren in Forschung und Lehre (PPL 4.20.11) sowie die National Health und Medical Research Council Australian Code für die Pflege und Nutzung der Tiere für wissenschaftliche Zwecke (8th Edition 2013).
Achtung: Achten Sie darauf, nicht Envenomated werden beim Umgang mit Assassin Bugs. Achten Sie darauf, um die Augen zu schützen, im Umgang mit Arten, die Venom defensiv zu spucken. Kümmern sich im ganzen nicht auf Versuchstiere zu verletzen. Dazu gehören Überwachung des Drucks über Beschränkungen wie G....
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Ergebnisse
Einige Heteropteran Arten, wie die Harpactorine p. Plagipennis und die Reduviine Platymeris Rhadamanthus, liefern zuverlässig große Mengen (5-20 µL) des Giftes in Reaktion auf Elektrostimulation (Tabelle 1). Im allgemeinen führen die meisten Peiratine, Reduviine und Harpactorine Bugs Venom als Reaktion auf diese Methode. Unter den Stenopodaine Fehler entlockte Elektrostimulation Venom aus Oncocephalus SP., aber nicht Thodelmus sp. Die H.......
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Diskussion
Der wichtigste Schritt bei der Ernte Assassin Bug Venom ist die Auswahl der geeigneten Methode je nach Zweck der Studie. Jede der drei Methoden zur Ernte Heteropteran Gifte hat vor- und Nachteile je nach downstream-Anwendungen.
Induktion Fehler Venom aus der Rüssel (Protokolle 1-3) vertreiben vermeidet Kontamination des Giftes von Drüsengewebe. Darüber hinaus diese Methoden sind nicht tödlich und können viele Male wiederholt werden, im Laufe des Lebens einen Fehler. Elektrostimulation in der R.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Wir anerkennen finanzielle Unterstützung von der Australian Research Council (Zuschüsse DP130103813 und LP140100832, G.F.K., DECRA Gemeinschaft DE160101142, EABU), der Australian National Health & Medical Research Council (Principal Research Fellowship APP1044414, G.F.K.), und der University of Queensland (Postdoctoral Fellowship, A.A.W.).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Elektrostimulator | Grass Technologies | S48 Square Pulse Stimulator | Elektrostimulator für gepulste Elektrostimulation |
| Federleichte Pinzette | Australischer Entomologe Zubehör | E122B | Für den Umgang mit lebenden giftigen Insekten |
| Proteasehemmer Cocktail | Sigma | 4693124001 | Zur Verhinderung der autoproteolytischen Verdauung von Gift |
| Dissektion Ausrüstung | Australian Entomological Supplies | E152Micro | Für feine Dissektionen |
| Insektenstifte | Australian Entomological Supplies | E162 | Für feine Dissektionen |
Referenzen
- Walker, A. A., Weirauch, C., Fry, B. G., King, G. F. Venoms of heteropteran insects: A treasure trove of diverse pharmacological toolkits. Toxins. 8 (2), 43(2016).
- Ribeiro, J. M. C., Assumpção, T. C., Francischetti, I. M. B. An insight into the sialomes of bloodsucking Heteroptera. Psyche (Stuttg). 2012, 1-16 (2012).
- Ambrose, D. P., Ma....
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Nachdrucke und Genehmigungen
