Nasale Potentialdifferenz, Trans-epithelialen Ionentransport bei Mäusen zu quantifizieren

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur nasalen Potentialdifferenz bei Mäusen zu messen. Der Test wird die Funktion des transmembranen Ion Transporter wie der Mukoviszidose transmembranen Leitwert Regler und der epithelialen Natrium-Kanal quantifiziert. Es ist wertvoll zur Bewertung der Wirksamkeit neuartiger Therapien für Mukoviszidose.

Zusammenfassung

Die nasale potenzielle Unterschied Test wurde seit fast drei Jahrzehnten zur bei der Diagnose der zystischen Fibrose (CF) zu unterstützen. Es hat sich als hilfreich im Falle von gedämpft, Oligo oder Mono-symptomatischen Formen von CF in der Regel später diagnostiziert, und CF-bedingten Erkrankungen wie kongenitale bilaterale Fehlen der Samenleiter, idiopathischer chronischer Pankreatitis, allergische bronchopulmonale Aspergillose und Bronchiektasen. In klinischen und präklinischen Einstellungen wurde der Test verwendet wie ein Biomarker, Antworten auf gezielte therapeutische Strategien für vgl. Anpassung der Test eine Maus zu quantifizieren anspruchsvoll ist und kann einen damit verbundenen Sterblichkeit zur Folge haben. Dieses Papier beschreibt die ausreichende Tiefe der Narkose erforderlich, um einen nasalen Katheter in Situ für kontinuierliche Perfusion. Es werden Maßnahmen zur Vermeidung von Broncho-Aspiration von Lösungen in der Nase durchströmt. Es beschreibt auch die Pflege der Tiere am Ende des Tests, einschließlich Verwaltung aus einer Kombination von Gegenmittel von Anästhetika, rasch die Rücknahme der Narkose mit vollständige Genesung der Tiere führt. Repräsentative Daten aus einem CF und Wildtyp Maus zeigen, dass der Test zwischen CF und nicht-CF unterscheidet. Insgesamt ermöglicht das Protokoll hier beschriebenen zuverlässige Messungen des funktionellen Status von Trans-epithelialen Chlorid und Natrium-Transporter in spontan atmen Mäuse sowie mehrere Tests im gleichen Tier und gleichzeitig Test-bezogene Mortalität.

Einleitung

Seit fast drei Jahrzehnten wurden elektrischen möglichen Unterschied (PD) Messungen zur funktionellen Status von transmembranen Ionen-Transporter auf der Nasenschleimhaut, als Vertreter des distalen Airways¹ausgedrückt zu bewerten. Wie ein mehrstufiger dynamischer test^2,3, Nasal PD ermöglicht funktionale Dissektion der Cystic Fibrosis Transmembrane Leitwert Regulator (CFTR) und epitheliale Natrium-Kanal (ENaC) Aktivität, lokalisiert sowohl an der apikalen Membranen der Epithelzellen und kritische Rollen in Oberfläche Hydratation Atemwege ausübt. Die große klinische Anwendung der nasalen....

Protokoll

Die Untersuchungen und Verfahren wurden von der Ethikkommission für Tierversuche des UCL (2017/UCL/MD/015) und im Einvernehmen mit der Gesetze der Europäischen Union für Tierversuche in der Forschung (CEE n ° 86/609) genehmigt. Die Ermittler sind für die Tierversuche, die nach der Richtlinie 2010/63/EU des Europäischen Parlaments und des Rates vom 22. September 2010 zum Schutz der für wissenschaftliche Zwecke verwendeten Tiere geeignet.

(1) vor dem test Bewertung und das Management

1. Bereiten Sie die doppelte Lumen nasale Katheter.
   Hinweis: Ein nasale Katheter erfolgt als eine doppelte Lumen Kapillarrohr, ein Lumen für die kontin....

Ergebnisse

Um die charakteristischen Ionen-Transport Anomalien in CF zu verdeutlichen, wurden nasale TE-Messungen durchgeführt, nach der oben beschriebenen, in eine F508del-CF-Maus und ein Wildtyp Kontrolle über den FVB/129 genetischen Hintergrund aus der Kolonie Brüssel-Protokolls CFTR^tm1Eur Mäuse³⁰. Diese klinisch relevante Modell, beherbergen die häufigste und einer der schwersten F508del-CFTR-Mutation^23,24

Diskussion

Dieses Papier soll eine angemessene Protokoll zur Messung der nasalen PD unter kontinuierlicher Perfusion der Lösungen in spontan atmen Mäuse auf einer Länge von Zeitaufwand für die Prüfung der Integritätdes der Ionen-Transporter, hauptsächlich CFTR und ENaC beschreiben. Alle Schritte des Protokolls wurden sorgfältig optimiert, um vollständige Tier Erholung und gute Qualität und reproduzierbare Daten zu gewährleisten. In bestimmten, wichtigen Schritte sind Anästhesie Bewertung und Management und adäquate Tier Position un.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Portex Polyethylen-Tube	Smiths Medical, Hythe, Kent, England CT21 6JL	Portex 800/100/500; 2,0 mm ID, 3,0 mmOD	zur Vorbereitung von Kapillarröhrchen für die Nasensonde
Elektrodencreme	Parker, Fairfield, NJ, USA	Redux Creme	zum Aufbau von Elektrodenbrücken
Ag/AgCl-Elektroden	Biomedical, Clinton Township, MI, USA	JNS BNT131-1,0	Mess- und Referenzelektroden
Amiliridhydrochlorid	Sigma, St. Louis, MI, USA	A7410	zur Herstellung von Perfusionslösungen
forskolin	Sigma, St Louis, MI, USA	F6886	zur Vorbereitung von Perfusionslösungen
Knick Portamess Voltmeter	Elektronisch Meβ gerä te, Berlin, Deutschland	Portavo 904 pH	zur Messung der Potentialdifferenz
Paraly SW 112 Software	Elektronisch Meβ gerä te, Berlin, Deutschland	Paraly SW112 Software	zur Erfassung von Potentialdifferenzdaten
Midazolam	Mylan, Hoeilaart, Belgien	Dormicum 15mg/3ml	als Anästhetikum
Fentanyl	Janssen Cilag, Berchem, Belgien	Fentanyl-Janssen 0,05 mg/ml	als Anästhetikum
Medetomidin	Orion Pharma, Espoo, Finnland	Domitor 1 mg/ml	als Anästhetikum
Droperidol	Janssen  Cilag, Berchem, Belgien	Dehydrobenzperidol 2,5 mg/ml	als Anästhetikum
Clonidin	Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim am Rhein, Deutschland	Catapressan 0,15 mg/ml,	um als Referenz für Anästhesiemedikamente zu dienen
IV-Katheter	Becton Dickinson, Sandy, UT, USA	24 GA x 0,75 IN, BD Insyte-W	zum Aufbau von Elektrodenbrücken
Pinzetten	Fine science Tools, Heidelberg, Deutschland	Dumont #5, Fine science Tools	zum Platzieren des Nasenkatheters
Naloxon	Braun Medical, Brüssel, Belgien	Narcan, 0,4 mg/ml	als anästhetischer Antagonist
Atipamezol	Zoetis, Bloomberg, Belgien	Antisedan, 5 mg/ml	als Medetomedin-spezifisches Gegenmittel
Heizkissen	Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA	18,8x37,5 cm; 15,5x15,5 cm	zur Vermeidung von Unterkühlung während und nach dem Test
Schlauchpumpe P1	GE Life Sciences, Uppsala, Schweden	18111091	zur Perfusion von Lösungen in der Mausnase
Cyanacrylatkleber	Loctite, Henkel, Dü sseldorf, deutschland	Sekundenkleber 3	zum Zusammenkleben von zwei Kapillarröhrchen für Nasensonde
NaCl	Sigma, St. Louis, MI, USA	RES0926S-A7	Pharma-Grade, USP
CaCl2.2H2O	Sigma, St. Louis, MI, USA	M7304	Pharma-Grade, USP
MgCl2.6H2O	Sigma, St. Louis, MI, USA	1551128	Pharma-Grade, USP
K2HPO4	Sigma, St. Louis, MI, USA	1551139	Pharma-Grade, USP
Na-Gluconat	Sigma, St. Louis, MI, USA	S2054	Pharma-Grade, USP
Ca-Gluconat	Sigma, St. Louis, MI, USA	C8231	Pharma-Grade, USP
MgSO4.7H2O	Sigma, St. Louis, MI, USA	RES0089M-A7	Pharma-Grade, USP
BD-Nadel	Becton Dickinson, Franklin Lakes, USA	BD 26G (0,45x10 mm)	intraperitoneale Injektion