Ein vielseitiges Modell schwer Tick Befall an Kaninchen, Labor

Zusammenfassung

Wir haben eine einfache und vielseitige System um harten Zecken ernähren sich von Labor Kaninchen entwickelt. Unsere nicht mühsam Protokoll leicht zugängliche Materialien verwendet und kann je nach den Anforderungen der verschiedenen experimentellen Einstellungen angepasst werden. Die Methode ermöglicht die komfortable Überwachung bzw. Stichprobe von Zecken während der gesamten Dauer der Fütterung.

Zusammenfassung

Der Einsatz von lebenden Tieren in der Zecke Forschung ist entscheidend für eine Vielzahl von experimentellen Zwecken, einschließlich der Wartung der harten Tick Kolonien im Labor. In Zecken alle Entwicklungsstadien (außer Ei) sind Hematophagous und erwerben eine Blutmahlzeit, wenn ihre Wirbeltier Wirte zugeordnet ist unerlässlich für den erfolgreichen Abschluss ihres Lebenszyklus. Hier zeigen wir Ihnen eine einfache Methode, die leicht öffenbare Kapseln verwendet für die Fütterung von harten Zecken auf Kaninchen. Die Vorteile der vorgeschlagenen Methode sind seine Einfachheit, kurzer Dauer und vor allem vielseitige Anpassung an die Bedürfnisse der spezifischen experimentellen Anforderungen. Die Methode ermöglicht die Verwendung von mehreren Industrie-und Handelskammern (verschiedene Größen) auf das gleiche Tier, das Fütterung mehrerer Phasen oder verschiedenen Versuchsgruppen senken die insgesamt tierische Anforderung erlaubt. Nicht reizend und leicht zugänglichen Materialien minimiert Beschwerden an die Tiere, die leicht erholt von einem Experiment und angeboten für Annahme oder wiederverwendet werden können wenn das ethische Protokoll erlaubt.

Einleitung

Die harten Zecken (Ixodidae) sind bekannt als langsame Fütterung Arthropoden und aufsetzbar auf einem Host für mehrere Tage oder Wochen, je nach Tierart und Entwicklungs-Stufe¹. Diese obligatorische Hematophagous Arthropoden sind Vektoren einer Vielzahl pathogener Erreger, wie Bakterien, Protozoen und Viren, und so stellen eine erhebliche Gefahr für Mensch und Tier¹. Wenn Tick Biologie studieren oder Bewertung neuer Methoden, die Einrichtung eines effektiven Häckchens Fütterungssystem ist entscheidend, um effektiv die Experimente zu entwerfen und erreichen die Ziel(e) der Studie. Vor kurzem mehrere künstliche Tick Fütterungssysteme (Vermeidung des Einsatzes von lebenden Tieren) wurden entwickelt,^2,3,4 und sollten wann immer möglich verwendet werden. Jedoch diese Systeme konnten nicht vollständig Zecken ernähren sich von lebenden Tieren zu ersetzen, und sie sind kein geeigneter Ersatz für viele physiologische Voraussetzungen für wissenschaftliche Studien. Daher in einigen Fällen ist der Einsatz von experimentellen Tiere beherbergt entscheidend für die Relevanz der experimentellen Ergebnisse garantieren.

Labor-Neuseeland-Kaninchen haben gezeigt, die am besten geeignete und zugänglich Gastgeber für mehrere Ixodid Häckchen Arten^5,6,7,8,9. Zwei gemeinsame Strategien der Zecken ernähren sich von Kaninchen wurden häufig verwendet: (a) ernähren sich von Hasenohren bedeckt mit Baumwolle Tuch oder Socken^6,7, und (b) Fütterung in Baumwolle Taschen⁹, Nylon-Flaschen¹⁰ oder Neopren Kammern¹¹ an das Kaninchen Rücken geklebt. Die Fütterung auf die Hasenohren ist kein elegantes System, weil Zecken (vor allem Frühphase, Larven oder Nymphen) können kriechen und befestigen Sie tief in den Gehörgang, das ist unangenehm für das Tier und macht die Überwachung der Zecke Fütterung und/oder die Erholung der gestaut Zecken schwierig. Dieses System ist auch beschränkt sich auf nur zwei Tick Fachgruppen auf Ohren von Socken geschützt durch elisabethanischen Halsbänder, vollständig abgedeckt, die eine erhebliche Unannehmlichkeit für das Tier. Andere Systeme^9,10,11 sind auf jeden Fall weiter fortgeschritten und gut geeignet für harte Tick Kolonie Wartung. Jedoch sind sie in der Anzahl der experimentellen Gruppen platziert auf das Kaninchen sowie in die veränderbaren Größen/Formen der Fütterungen Kammern eingeschränkt. Darüber hinaus müssen diese Protokolle oft humpelnd die hinteren Kaninchen Beine zur Vermeidung von kratzen und die Verwendung des elisabethanischen Halsbänder Pflege zu verhindern.

Hierin bieten wir eine einfache, nicht mühsam und sehr effektive Methode um mehrere Gruppen von harten Zecken in geschlossenen Kammern geklebt, um das Kaninchen wieder fallenden eine Jacke zu ernähren, überflüssig elisabethanischen Halsbänder oder humpelnd während des Experiments. Unser System verwendet insbesondere elastische Kapseln aus ein Ethylen-Vinyl-Acetat (EVA)-Schaumfolie von Moskito Netz abgedeckt und an das rasierten Kaninchen wieder mit schnellen erstarren (3 min) nicht reizend Latex Kleber geklebt. Diese Technik ermöglicht die Befestigung von mehreren Kapseln der gewünschten Größe oder Form, und nur wenige Wochen nach dem Experiment die Kaninchen sind vollständig erholt. Das System eignet sich vor allem für die nymphal und Erwachsenen schwer Tick-Phasen, aber mit einer kleinen Änderung kann es für Larven sowie Fütterung verwendet werden. Die EVA Schaumstoff-basierte Methoden für harte Tick Fütterung können auf andere Arten von Wirbeltieren Gastgeber, zum Beispiel Schafe angepasst werden (die als eine der Alternativen in diesem Papier gezeigt wird).

Protokoll

Hinweis: In dieser Studie Kaninchen waren gepflegt in standardkäfige mit Lebensmitteln und Wasser angeboten Ad Libitum an die französische Agentur für Food, Umwelt- und Arbeitsschutz & Sicherheit (ANSES) akkreditiert Tierhaltungen in Maisons-Alfort, Frankreich. Tiere wurden zweimal täglich durch zwei erfahrene Techniker für abnorme Hautreaktionen, gesundheitliche Probleme oder Komplikationen beobachtet. Die Versuchsraum wurde gesichert durch die Gestaltung des Innenraum des Einganges mit doppelseitigem Klebeband um versehentliche Entweichen von Zecken zu vermeiden. Die Methode funktioniert am besten, wenn zwei Menschen als Team arbeiten, aber es möglich ist, einzelne im Alleingang von einer erfahrenen Person abzuschließen. Obwohl die meisten Kaninchen zahm und ruhig sind, können Anzeichen von Stress während der Bearbeitung auftreten. Um sicherzustellen, dass ein Kaninchen nicht selbst durch kämpfen zu verletzen, manuelle Zurückhaltung kann erreicht werden, indem sanft an das Genick in einer Hand zu halten, während andererseits es unterstützt Hinterhand. Die sechs Monate alte, Rambouillet bei nationalen Veterinary School von Alfort (ENVA), weibliche Schafe am Zentrum für biomedizinische Forschung (CRBM) Einrichtungen gehalten wurde, wo Wasser und Nahrung mitgelieferten ad libitum waren, und es wurde zweimal täglich überprüft.

Hinweis: Unser Labor erhielt Erlaubnis zur Nutzung von Kaninchen und Schafe Tick Fütterung durch die Ethik-Kommission für Tier Experimenten kommt Anses/ENVA/UPEC, erlauben Zahlen 01741.01 und 11/10/16-5 b, beziehungsweise. Da wir nur Pathogen-freies Zecken in unseren Experimenten verwendet, wurden die Kaninchen, die in dieser Studie verwendeten Annahme über das weiße Kaninchen Association, Paris, Frankreich angeboten.

1. Vorbereitung der Kapseln

1. Schneiden Sie die gewünschte Größe der Kapsel von EVA Schaumfolie (Abb. 1A). Um die äußeren Ecken (Abbildung 1B) der Kapsel zu zufälligen Loslösung zu minimieren, wenn es auf die Kaninchen Haut kleben.
   Hinweis: Die Rahmenstärke der Kapsel sollte ca. 8 mm. Verwendung einer 5 mm dicken Schaumstoff-Blatt für die Larven, Nymphen und kleine Erwachsene Zeckenarten wie Ixodessein. Eine 1 cm Dicke Schaumstoffplatte eignet sich für große Erwachsene Zecken Amblyomma SP., Hyalomma SP., etc. , die die Größe der Kapsel variiert auf den experimentellen Anforderungen basiert. Zum Beispiel für 20 Ixodes Erwachsene Paare, 200 Nymphen oder 1.000 Larven verwenden wir eine innere Kapsel Größe 5 x 5 cm², 6 x 7 cm² oder 7 x 9 cm², beziehungsweise.
2. Selbstklebende Haken 8 mm breite Streifen geschnitten (siehe Tabelle der Materialien) mit Klebeband und kleben sie an den vorbereiteten EVA Schaumstoff Rahmen (Abbildung 1C).
3. Schnitt die gleiche Größe-Streifen aus selbstklebende Schleife Band (siehe Tabelle der Materialien) und Binden an den Seiten Haken befestigt an den EVA-Schaum-Rahmen (Abbildung 1D).
4. Schneiden Sie die entsprechende Größe der feinen Moskito-Netz (Maschenweite kleiner als 50 µm) auf die Größe des Rahmens EVA-Schaum und kleben Sie es auf die selbstklebende Schleife (Abb. 1E und 1F). Schneiden Sie die Überhänge, falls erforderlich.
   Hinweis: Diese Art der Kapsel kann verwendet werden, Nymphen und Erwachsene schwer Zeckenarten, zu ernähren, während verschiedene Dichtungssystem der Kapseln für Larven füttern (ergänzende Abbildung1) erforderlich ist, um versehentliche Flucht der Larven über die befestigte zu verhindern Haken und Ösen Seite.

2. Vorbereitung des Kaninchens vor Zecken Befall

1. Rasieren Sie den Bereich der Kaninchen Rücken und Seiten mit Clippers (Abb. 2A) verwendet werden.
2. Tragen Sie nicht reizend Latex Kleber auf die gesamte Oberfläche der Kapsel bereit und warten auf 1 min (Abbildung 2B).
3. Kleben Sie die Kapsel durch Drücken auf die Haut (besonders an den Ecken) mit den Fingern für ca. 3 Minuten (Abbildung 2 und 2D).
   Hinweis: Wenn mehr als eine Kapsel zu kleben, stellen Sie sicher, mindestens 5 mm Abstand zwischen ihnen (Abb. 2E und 2F) zu halten. Wir vermeiden in der Regel die Region der Wirbelsäule, aber es kann verwendet werden, wenn nötig.
4. Heben Sie die Kapseln um ihre Verbundenheit mit der Haut eine Sichtkontrolle. Wenn die Fraktionslosen Regionen gefunden werden, tragen Sie den Kleber mit einem Spachtel und drücken Sie die Taste für weitere 3 Minuten.
5. Gelten Sie Schutzfolie für den hinteren Pfoten des Kaninchens beugen Jacke Schäden (Abbildung 2G).
   Hinweis: Dieser Schritt ist optional und soll vor allem Jacke Schaden, nicht Schaden, die Tick-Kapsel verhindert werden.
6. Setzen Sie auf die Kaninchen Jacke indem die Vorderbeine durch die Öffnungen und den Hals, machen sichere Kaninchen atmen bleibt bequem anziehen. Legen Sie die hinteren Beine durch die elastischen Gehäuse bei diesem Schritt nicht und lassen Sie den Reißverschluss geöffnet (Abbildung 2H).

(3) Tick Befall

1. Legen Sie die Zecken in einer kunststoffspritze (1 oder 5 mL je nach Anzahl der Personen) mit dem Nadel-Ende geschnitten und mit Baumwolle (Abbildung 1G) eingesteckt. Wenn eine kleine Menge von Zecken befallen werden sollen, verwenden Sie Zange.
   Hinweis: Für Tick Kolonie Wartung ermöglichen die engorged Zecke sind Female(s), Eier zu legen, mit anschließenden Schraffuren in der Spritze (5 oder 10 mL) abgedeckt durch das Moskito-Netz umhüllt von einem Gummiband¹² , umständliche Manipulation der Larven zum Zeitpunkt zu vermeiden Sie auf dem Host (Abbildung 1H) angewendet. Auch voll engorged Larven darf in der Spritze mausern (ergänzende Abbildung 1I; 5 oder 10 mL) für direkten Befall des Kaninchens mit Nymphen.
2. Legen Sie die Spritze tief in die Kapsel über die offene Ecke und die Zecken durch Drücken des Spritzenkolbens zu impfen. Drehen Sie langsam den Kolben in Richtung der Kaninchen Haut um die restlichen Zecken befestigt auf den Kolben zu entfernen und herausziehen Sie gleichzeitig aus der Kapsel (Abbildung 2ich).
   Hinweis: Wenn einige der Personen aus der Kapsel Krabbeln, zurück sie mit Pinzette.
3. Schließen Sie die Kapsel durch setzerscheinungen der Haken und Ösen-Band.
4. Legen Sie die Hinterbeine des Kaninchens in die hintere elastische Gehäuse aus der Jacke und Reißverschluss geschlossen.
   Hinweis: Vergewissern Sie, dass ein Zeigefinger zwischen den Hals der Jacke und das Kaninchen um Komfort zu gewährleisten und um zu vermeiden, kauen auf die Jacke passen.
5. Die Kaninchen in den Käfig (Abbildung 2J) zurück.
   Hinweis: Variieren Sie die Zeit vor dem Befall, Sammlung von vollgestopft Zecken zwischen den verschiedenen Zeckenarten und die Entwicklungsstadien. Beispielsweise sind für Ixodes Scapularis und Ixodes Ricinus, die Dauer der Fütterung für Erwachsene, Nymphen und Larven 6 – 9, 3 – 4 und 2 – 3 Tage, bzw.. Eine Liste mit Referenzen für 29 verschiedene harte Tick Lebenszyklen unter Laborbedingungen Levin und Shumacher (2016)⁹entnehmen.

4. Erfassung und Monitoring von Zecken

1. Nehmen Sie die Kaninchen aus dem Käfig, an der Werkbank und entpacken Sie die Jacke.
2. Zurückhalten Sie sanft, die Kaninchen mit den Händen. Öffnen Sie die Kapsel durch Lösen der Haken und Ösen-Band (Abbildung 2 K und 2 L) und sammeln Sie die Zecken durch Bürsten engorged Larven (ergänzende Abbildung1) oder Nymphen zu einer Plastikschale oder mit Hilfe einer Pinzette für Erwachsene (Abbildung 2L ). Wenn teilweise (nicht voll) gefüttert Zecken erforderlich sind, verwenden Sie einen Tick Twister oder Zange sie getrennt.
   Hinweis: Wenn die Zecke Kolonien finden Sie den Hinweis in Schritt 3.1. Pflegen Sie engorged Zecken in entsprechenden feucht und Temperaturbedingungen nach bestimmten Zeckenarten.
3. Bei Bedarf Oeffnungen Sie die Haken und Ösen-Band um die Kapsel zu schließen.

5. Wiederherstellung des Kaninchens

1. Entfernen Sie das Moskito-Netz vollständig aus der Kapsel und lassen Sie die Jacke auf das Kaninchen (Abbildung 2M).
2. Warten Sie ca. 3-4 Wochen und versuchen Sie, die Kapsel zu entfernen, indem Sie sanft Trimmen einer der Ecken (Abbildung 2N). Wenn die Kapsel noch fest verbunden ist, wiederholen Sie diesen Schritt eine Woche später.
3. Entfernen Sie die Jacke und lassen Sie die Kaninchen in den Käfig zu erholen.
   Hinweis: Sobald die Kapsel nicht leuchtet, überprüfen Sie die Haut des Kaninchens für abnorme Reaktionen. Obwohl normalerweise keine Behandlung erforderlich ist, kann bei Reizung eine erweichenden Lotion verwendet werden.
4. Wenn das Protokoll und Experimente zu ermöglichen, können die wiederhergestellten Kaninchen (Abbildung 2O) wiederverwendet oder zur Adoption angeboten.
   Hinweis: Kaninchen haben gezeigt, dass Tick Widerstand wiederholten Tick Befall¹³einmal ausgesetzt zu erwerben; Reinfestations sind daher nicht empfohlen, es sei denn, das Experiment erfordert.

Ergebnisse

Hier schlagen wir zum ersten Mal eine detaillierte Schritt-für-Schritt-Methode der harten Tick Fütterung aus EVA-Schaum Kapseln angewendet um eine rasierte Kaninchen Rücken, abgedeckt durch eine Jacke (Abbildung 1 und Abbildung 2). Dieses Protokoll eignet sich für verschiedene Arten von Experimenten, wenn unterschiedliche Tick Gruppen auf demselben Host erforderlich sind und können auch für massenhafte Aufzucht v...

Diskussion

Der wichtigste Schritt in diesem gesamten Protokoll soll die Kapsel fest auf die rasierte Haut kleben. Aus diesem Grund ist konstanter Druck für mindestens 3 Minuten kritisch, besonders an den Ecken. Wenn die Zecken in die Kapsel zu impfen, ist es wichtig, diese anzuwenden tief in die gegenüberliegende Ecke vom offenen zum Zecke während der Versiegelung zu vermeiden. Bei der Planung der Experimente ist darauf zu achten, dass die Jacke um Schäden zu vermeiden, Kauen oder kratzen die Kapseln abgedeckt sind. Stellen Sie sic...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Neuseeländische Kaninchen (2,5-3,5 kg)	Charles River	Stamm Code 571
Rambouillet Schaf	Lokaler Anbieter - zeckenfreier Bauernhof	Weiblich 6 Monate alt
EVA-Schaum 5 mm dick	Cosplay Shop	EVA-PE451kg (950mm x 450mm)	10 mm PE45 kg Schaumstoff aus dem Cosplay Shop kann für die große erwachsene Zeckenart verwendet werden
Schaumstoffplatte 9" X 12" 6 mm-Weiß	Amazon	FOAMSHT6-20	6 mm-EVA Schaumstoff kann über Amazon bestellt werden als Alternative zu dem Schaumstoff aus dem Cosplay Shop
Volle Länge Kaninchenjacken	Harvard Apparatus, Inc.	620077- mittel, 6270078 - groß
Ungiftiger Latexkleber	Tränenflicker	Stoff & Leder Kleber
Schlauchförmig Baumwolle orthopädisch glatt rechts	BSN Medical	9076 (12-15 cm breit)
Moskitonetz	Loisirs Creatifs	Sehr feines Filter-Nylon-Mesh-Gewebe	Jedes Moskitonetz oder Vorhangmaterial mit einer Maschenöffnung von weniger als 50 μm; m geeignet ist.
Leukoplast	BSN medical S.A.S	LF 72361-02
Klebeband mit Klettverschluss	AIEX Store	AIEX 39,37 Fuß/12m Klettband mit selbstklebender Klebebandrolle, 20 mm Breite, weiße Farbe	Fullfiled by Amazon
Schnell trocknender Kleber	Fixtout	Sekundenkleber