Azelluläre und zellulären Lunge Modell Tumor Metastasen zu studieren

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll für eine ex Vivo Lunge Krebs Modell, die imitiert die Schritte der Tumorprogression und hilft, um einen Primärtumor zu isolieren, zirkulierende Tumorzellen und metastatischen Läsionen.

Zusammenfassung

Es ist schwierig, Tumorzellen zu verschiedenen Zeitpunkten der Tumorprogression zu isolieren. Wir haben eine ex Vivo Lunge Modell, die das Zusammenspiel von Tumorzellen mit einer natürlichen Matrix und kontinuierlicher Strom an Nährstoffen zeigen kann, sowie ein Modell, das die Interaktion von Tumorzellen mit normalen zellulären Komponenten und eine natürliche Matrix zeigt. Die azellulären ex Vivo Lunge Modell wird durch eine Ratte Herz-Lungen-Block zu isolieren und entfernen alle Zellen, die mit dem Decellularization-Verfahren erstellt. Die rechten Bronchus abgebunden und Tumorzellen werden durch eine Spritze in der Luftröhre platziert. Die Zellen bewegen und die linke Lunge zu füllen. Die Lunge befindet sich dann in einem Bioreaktor, der Lungenarterie einen kontinuierlichen Fluss von Medien in einem geschlossenen Kreislauf erhält. Der Tumor auf die linke Lunge angebaut ist der Primärtumor. Die Tumorzellen, die in den zirkulierenden Medien isoliert werden Tumorzellen im Umlauf sind und die Tumorzellen in der rechten Lunge sind metastatischen Läsionen. Das zelluläre ex Vivo Lunge Modell entsteht durch das Auslassen des Decellularization-Prozesses. Jedes Modell kann verwendet werden, um verschiedene Forschungsfragen zu beantworten.

Einleitung

Krebsmetastasen ist der Schuldige hinter den meisten krebsbedingte Todesfälle und stellt die ultimative Herausforderung bei den Bemühungen zur Bekämpfung von Krebs. Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, ein Protokoll für eine vierdimensionale (4D) Zellkultur zu entwerfen, die eine Dimension des Flusses, neben dem dreidimensionalen (3D) Zelle Wachstum hat. Es steht für die drei Phasen des Prozesses Metastasen [d.h., der Primärtumor, zirkulierende Tumorzellen (CTC) und metastatischen Läsionen].

In den letzten drei Jahrzehnten brachte Wissenschaftler auf der ganzen Welt eine unvergleichliche Fülle von Informationen zu verstehen, die Mechanismen der metastatischen Progression bei verschiedenen Krebsarten, die die Aussicht auf eine Heilung oder progressionsfreie Überleben verbessert. Deutlich verbessert die klinische Behandlung von einigen Krebsarten wie Brustkrebs,¹; Einige Krebsarten wie Lungenkrebs, haben jedoch noch eine schlechte überleben². In Vitro und in Vivo Tiermodellen haben maßgeblich bei der Schaffung von neuen Erkenntnisse über die Mechanismen, die die Entwicklung der Krankheit zugrunde liegen. In den letzten Jahren Zell-Linie abgeleitet Xenotransplantate (CDX) und Patienten abgeleitet Xenotransplantate (PDX) wurden von größerem Interesse, da sie viele relevanten Merkmale des menschlichen Primärtumor³, z. B. Wachstum Kinetik, histologischen Merkmale, Verhalten bewahren Merkmale und das Ansprechen auf die Therapie. Jedoch hat jedes Modell seine Grenzen zum Verständnis des Mechanismus der CTC-Bildung und Metastasen in entfernten Organ^4,5,6.

Vor kurzem haben wir ein 4-D- ex Vivo Lunge Krebs Modell durch die Verwendung von des Konzepts der Orgel reengineering und Perfusions-basierte Zellkultur entwickelt. Es ahmt die menschliche Lunge-Krebs-Wachstum durch die Bildung von perfusable Tumor Knötchen, die im Laufe der Zeit, mit einem ähnlichen menschlichen Krebs abgesondert wachsen Protein Produktion⁷. Es repräsentiert die Gen-Ausdruck-Signatur, die prognostiziert schlechte Überlebensrate bei Patienten mit Krebs und zeigt auch eine therapeutische Antwort von Tumor-Regression auf Cisplatin Behandlung^8,9. Die Lunge-Modell wurde weiter modifiziert, so dass es metastatische Läsionen bilden kann. Die CTCs entwickeln sich aus einem Primärtumor und Intravasate in das Gefäßsystem und Leber in die kontralaterale Lunge metastatischen Läsionen¹⁰zu bilden. Genexpressionsstudien empfehlen eine ausgeprägte Expressionsprofil des Primärtumors, CTCs, und die metastatischen Läsionen und die Hochregulation der Teilmenge von Genen, die für den Phänotyp¹⁰erforderlich. Dieser metastatischen Prozess erfolgt aufgrund des Vorhandenseins von biologischen Bedingungen bei Patienten mit Krebs gesehen. Der Vorteil dieses Modells ist das Vorhandensein einer natürlichen Matrix und Architektur und eine Perfusion der Nährstoffe, die zur Bildung von Knötchen Tumor führt. Darüber hinaus gibt es auch Gelegenheit, die Auswirkungen der verschiedenen Komponenten des Tumors Mikroumgebung oder Drogen auf Tumorprogression im Laufe der Zeit zu studieren. Dieses Modell kann verwendet werden, um einen Zellbereich Krebs (Lungenkrebs, Brustkrebs, Sarkom etc.) in einem Labor zu wachsen.

Protokoll

Die Protokolle für Tierversuche wurden durch die institutionelle Animal Care and Use Committee am Houston Methodist Research Institute genehmigt und durchgeführt in Übereinstimmung mit allen Vorschriften, Gesetze, Richtlinien und Richtlinien.

1. Rat Lunge Ernte

1. Ein 4 bis 6 Wochen alten männlichen Sprague-Dawley Ratten durch eine intraperitoneale (IP) Injektion von Ketamin (100 mg/kg) und Xylazin (10 mg/kg) in seine Flanke zu betäuben. Narkose durch die Suche nach einer Abwesenheit von Bewegung bei die hinteren Gliedmaßen Zehe mit Zange gequetscht ist zu gewährleisten.
2. Rasieren Sie nach 10 min, Brust und Bauch und wischen Sie die Haut mit einem Chlorhexidin-Tupfer.
3. Abziehen Sie die Haut, indem Sie es sich mit der Pinzette und mit einem Einweg Skalpell einritzen. Führen Sie nach der Eröffnung der Brusthöhle durch Eingrabung mit Skalpell eine bilaterale Thorakotomie von der vorderen Seite des Brustkorbes auf der linken und der rechten Seite der Membran mit einer Schere schneiden.
   Hinweis: Dies ist eine Operation nicht überleben.
4. Halten Sie den Brustkorb und Spritzen Sie 2 mL Heparin (1.000 Einheiten/mL) in die Rechte Herzkammer des schlagenden Herzens mit Hilfe einer Nadel 27 G.
   Hinweis: Dies wird Bildung von Blutgerinnseln in der Lunge verhindern.
5. Vollständig zu entfernen Sie den Brustkorb mit einer Schere und platzieren Sie eine 18 G-Nadel in der linken Herzkammer wie ein Schlot, bis Blut herauskommt. Dann Spritzen Sie 15 mL heparinisierten Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (12,5 Einheiten/mL; heparinisierten PBS) in die Rechte Herzkammer mit einer 25 G Nadel.
6. Schneiden Sie der minderwertigen und überlegenen Vena Cava, zwei große Venen auf der rechten Seite des Herzens, und spülen Sie die Lunge mit einer zusätzlichen 10 mL heparinisierten PBS in der rechten Herzkammer mit einer 27 G Nadel.
   Hinweis: Die minderwertige Vena Cava ist unter dem Boden des Herzens als eines großen Schiffes visualisiert mit rotem Blut gefüllt. Ebenso ist die überlegene Vena Cava im oberen Teil des Herzens als eines großen Schiffes visualisiert.
7. Schneiden Sie die Luftröhre, an der Basis der Schilddrüse. Entfernen Sie vorsichtig die absteigende Aorta auf der Ebene der Truncus Vene und Äste der Aorta am Arch.
8. Nehmen Sie die Herz-Lungen-Block aus der Brusthöhle und dem Rest des Körpers Ratte.
9. Führen Sie Ventriculotomy durch Schneiden, die Hälfte der rechten und linken Ventrikel und legen Sie eine maßgeschneiderte vorgefüllten 18 G Edelstahl-Nadel Kanüle durch den rechten Ventrikel in den wichtigsten Pulmonalarterie (PA).
10. Sichern Sie die Kanüle mit einer 2: 0-Seidenkrawatte und setzen Sie sorgfältig den rechten Ventrikel und Atrium.
11. Legen Sie ein weiblicher Luer-SCHOTT in der linken Herzkammer und sichern Sie es mit einer 2: 0-Seidenkrawatte.
12. Spülen Sie die Herz-Lungen-Block mit 20 mL heparinisierten PBS durch die PA-Kanüle und legen Sie sie in ein 50 mL-Tube mit Nährmedien oder heparinisierten PBS.
    Hinweis: Gehen Sie zu Schritt 3.1 Einrichten des Bioreaktors, für ein Handy-Modell. Fahren Sie bei einem azellulären Modell mit Schritt 2.1 für die Decellularization.

2. Lunge Decellularization

1. Vorbereitung des Referats decellularization
   1. Bereiten Sie jede Decellularization Kammer/Flasche durch piercing zwei Löcher in die Kronkorken und schnappte ein weiblichen Luer in die Löcher (Abb. 1A und 1 b). Sichern Sie ihn mit einem schwarzen Nylon-Ring auf der anderen Seite. In ähnlicher Weise, Bohren Sie ein einziges Loch in ein anderes Kronkorken für die intravenöse Set Anlage (Abbildung 1).
      Hinweis: Abbildung 1A und 1 b sind von der gleichen Kronkorken von zwei verschiedenen Seiten. Abbildung 1 ist eine andere Kappe mit einem Loch im Schritt 2.1.1 dargelegten.
   2. Legen ein 0,5 Zoll Rohr (in der Lungenarterie oder PA-Ende) und 6-Zoll-Rohre (Abbildung 1J) auf einen weiblichen Luer von innen die Kronkorken (Abbildung 1A und 1 b) und befestigen Sie einen männlichen Luer-Lock an den Enden. Legen Sie die Sperre mit einer 500 mL Flasche, als der Decellularization Kammer/Flasche.
   3. Schließen Sie ein Ende der zwei Röhren von 2 ft (verbunden mit einem männlichen Luer-Lock) an beiden Enden der Pumpenrohr (Abbildung 1 H), die auf den Pumpenkopf (Abbildung 1E und 1F) mit einer Patrone (Abbildung 1) mit einem weiblichen Luer befestigt wird Sperre (Abbildung 1I).
   4. Verbinden Sie die anderen Enden der 2 ft Röhren (von Schritt 2.1.3) jeweils zu einem weiblichen Luer Lock Kopf auf die Decellularization Kammer/Kronkorken (Abbildung 1 L).
   5. Richten Sie ein 250 mL heparinisierten PBS Flasche (mit 200 mL PBS) durch den Strang einer umgekehrten Flasche auf einem Ständer mit dem proximalen Ende des Fahrgast-/intravenöse (Abbildung 1), eingefügt in die Kronkorken und dem distalen Ende, verbunden mit der Decellularization c 2 ft-Rohr zu ersetzen Hamber/Flasche PA Ende (Abbildung 1 b). Schließen Sie diese 2 ft Schlauch bis zur Flasche entsorgen.
      Hinweis: Die Flaschen werden im Karton, festgelegt, wie in Abbildung 1 Kdargestellt. Die intravenöse Rohre kommen aus den hängenden Flaschen Reagenzien in der Lunge Gerüst zu verzichten.
2. Lung Decellularization Prozess
   1. Laufen Sie die heparinisierten PBS bei einem physiologischen Durchblutung Druck von 30 mm Hg (Abbildung 1 K), bis es frei in der Decellularization Kammer/Flasche fließt und dann befestigen Sie die Herz-Lungen-Block bis zum PA-Ende durch die PA-Kanüle.
   2. Zu halten, läuft die Pumpe ständig, so dass überschüssige Pufferlösung in der Decellularization Kammer/Flasche verworfen wird.
   3. PA für 15 min bei einem Perfusionsdruck von 30 mm Hg für den ersten Waschgang (Abbildung 1 K) durchlaufen Sie heparinisierten PBS.
   4. Ersetzen Sie die heparinisierten PBS-Flasche mit 0,1 % Natrium-Dodecyl-Sulfat (SDS) in entionisiertem Wasser und Durchspülen der Lungenkrebs für 2 h für die Decellularization.
   5. Perfundieren Sie nach der Decellularization deionisiertes autoklaviert Wasser durch die Lunge Gerüst für 15 Minuten.
   6. Dann perfundieren Sie 1 % nicht-ionische Waschmittel in entionisiertem Wasser für 10 Minuten.
   7. Ersetzen Sie die Decellularization Kammer/Flasche mit 500 mL autoklaviert PBS mit 1 X Antibiotika (Penicillin-Streptomycin Amphotericin) ergänzt die hängenden Lunge in der Flasche mit dem Deckel intakt zu halten.
   8. Entsorgen Sie die intravenöse richten, habe das 2 ft Rohr befestigt an den Entsorgung Container zurück zur Lungenarterie Ende der Decellularization Kammer, und führen Sie die Pumpe mit 6 mL/min (Abbildung 1 L).
   9. Durchspülen Sie der Lunge für 72 h und wechseln Sie die PBS mit Antibiotika alle 12 h.
      Hinweis: Die azelluläre Lunge ist sofort einsatzbereit. Es kann bei-80 ° c bis benötigt gespeichert werden. Wenn Rosa Flecken oder Blutgerinnseln deutlich in die Lungenlappen visualisiert werden können, entsorgen Sie die Lunge. Es ist möglich, nach dem Zufallsprinzip für DNA oder Histopathologie zu testen. Eine komplette azelluläre Lunge wird nicht angezeigt, dass Zellen und 99,9 % der DNA abgewaschen.
      Hinweis: Beim Arbeiten mit einem zellulären Lunge Modell überspringen der Decellularization. Die geerntete Lunge (Schritt 1) kann direkt im Bioreaktor eingestellt werden.

(3) Bioreaktor-Set-up

1. Bereiten Sie die Bioreaktor-Flasche und die Elemente für den Aufbau benötigt.
   1. Drei Bohrungen in einem 500 mL-Flasche in gleicher Entfernung und einer weiblichen Luer in alle drei Löcher, mit schwarzem Nylon Ringe (Abb. 2A und 2 b) zu beheben.
      Hinweis: In beiden Löchern endet die Luer-Lock Gesicht außen, während ein Ende das Innere der Flasche zeigt.
   2. Schneiden Sie eine 6 im Pumpenrohr, eine 2 im Rohr, eine 6 im Rohr, ein Schlauch 1,5 ft, eine 2 ft Rohr und eine 10 ft Oxygenator pro Bioreaktor.
   3. Schneiden ein 18 G Edelstahl-Nadel und wieder, verbinden Sie die Enden mit biokompatiblen Rohre für eine Trachealkanüle Kanüle.
   4. Wickeln Sie das Rohr Oxygenator mit Luer Lock Konnektoren an den Enden auf einem Magnetventil Drahtgeflecht mit Autoklav Bänder (Abbildung 2).
   5. Autoklaven der oben genannten Elemente und halten Sie sie im UV Licht für 10 min.
2. Richten Sie die Pumpe in die regelmäßige Zelle Kultur brutmaschine (37 ° C, 5 % CO₂) mit richtigen Abstand zwischen den Fächern, eine 500 mL Flasche passt.
3. Die Pumpe Patrone Sprühen Sie 70 % Äthanol auf und schließen Sie die Pumpe Schlauch mit Luer Lock Buchsen an beiden Enden an der Pumpe.
4. Richten Sie die Oxygenator umwickelt das Magnetventil Drahtgeflecht in die Zelle Kultur brutmaschine indem das Pumpenrohr und das andere Ende mit dem 1,5 ft Rohr im Bioreaktor ein Ende (Abfluss) der Oxygenator anschließen.
5. Richten Sie die Bioreaktor-Flasche in eine biologische Kabinett mit aseptischen Bedingungen.
   1. Befestigen Sie ein 3-Wege-Hahn (gelb) auf den Kopf eines weiblichen Luer Steuerung durch PA.
   2. Schließen Sie ein One-Way-Absperrhahn (blau) an einen anderen weiblichen Luer Lock SCHOTT für Zelle Aussaat durch die Luftröhre (Abb. 2F).
   3. 2 im Schlauch auf der Außenseite zu verbinden (weiß) und 6 im Schlauch auf der Innenseite der Flasche zu die Medien, zu zirkulieren. Passen Sie einen männlichen Luer Lock zu einem Schlauch 2 ft und befestigen Sie einen weiblichen Luer Lug Stil Tee bieten Zugang zum Hinzufügen oder entfernen alles.
   4. Legen Sie ein One-Way-Absperrhahn auf eine Öffnung des Dreiwege Steckers (weiblichen Luer Lug Stil Tee).
   5. 2 ft Röhren einen männlichen Luer Lock und einem weiblichen Luer Lock zuordnen.
   6. Fügen Sie 200 mL RPMI1640 mit 10 % FBS und 1 % Antibiotika Zellkulturmedium (variiert je nach Anforderung der Zelle) und übertragen Sie des Bioreaktors in den Inkubator zu. Schließen Sie die Oxygenator Schlauch an die beiden offenen Enden (One-Way-Absperrhahn und Tee Connector) einen geschlossene Bioreaktor zu machen.
6. Pre-laufen Sie die Pumpe mit 6 mL/min in die Zelle Kultur brutmaschine mit Zellkulturmedien Oxygenator und Röhren, füllen, damit keine Luftblasen im Schlauch vorhanden.
7. Nachdem die Rohre mit Medien befüllt sind, schließen Sie den Absperrhahn und entfernen Sie die Bioreaktor-Flasche aus dem Inkubator durch Trennen der Oxygenatoren von beiden Enden der Bioreaktor-Flasche.
8. Setzte die Bioreaktor-Flasche in der Biosicherheit Kabinett, Nährmedien durch den Absperrhahn übergeben, und der Hahn durch den Luer-Anschluss-Stecker PA Kanüle von der Lunge Gerüst (azellulärer oder zellulären) zuordnen.
   Hinweis: Hier ist es möglich, die azellulären Modell (nach dem Decellularization-Verfahren) oder eine frisch geerntete Herz-Lungen-Block zu verwenden (d. h., die zellulären Modell, wie es behält die native rattenzellen).
9. Übergeben Sie Kultur Medien durch ein One-Way-Absperrhahn Luft zu entfernen und binden die trachealen Kanüle durch einen Seidenfaden zur Trachea.
10. Achten Sie darauf, um zu vermeiden, Verdrehung der PA und der Trachea. Nahe der Bioreaktor-Flaschenverschluss mit der Lunge Gerüst im Inneren wieder aseptisch des Bioreaktors in den Inkubator zu übertragen und starten Sie die Pumpe mit einer Geschwindigkeit von 6 mL/min.
11. Führen Sie Kulturmedien für 10-15 min um sicherzustellen, dass alle Lappen bekommen aufgeblasen und die Lunge sieht in guter Form (Abbildung 2).

(4) Metastasen Modell und Cell Seeding

Hinweis: Fahren Sie auf die Zelle mit dem oben genannten Lunge Modell für einen Primärtumor WACHSTUMSSTUDIE Aussaat. Ändern Sie die Lunge Gerüst (azellulärer oder zellulären) wie folgt für die metastatische Modell.

1. Nehmen Sie den Bioreaktor mit der Lunge Gerüst aus dem Inkubator und steckte es in die Biosicherheit Kabinett.
2. Verwenden Sie eine Luer-Lock-Spritze 5 mL Kultur Medien über die Luftröhre und öffnen Sie die Bioreaktor-Kappe mit den hängenden Lunge Gerüst (Abb. 2F).
3. In diesem Schritt muss eine weitere Person in der Modifikation von der Lunge zu einem metastasierendem Modell helfen.
4. Bekommen Sie Seide 2-0 bereit und eckige Zange verwenden, um einen Pass durch die Luftröhre am Gabelung Punkt zu machen.
5. Binden Sie die Luftröhre gonna die Rechte Lunge an der Bifurkation Stelle und überprüfen Sie den freien Fluss der Medien durch die Luftröhre, die linke Lunge vorbei Nährmedien.
   Hinweis: Sobald die Luftröhre an der Bifurkation Stelle gebunden ist, werden Zellen ausgesät durch die Luftröhre automatisch zu säen, die linken Lappen weitergeleitet. Es kann vor der Aussaat der Zellen durch Druck Kultur Medien durch die Luftröhre getestet werden. Im metastasierten Modell bewegt sich die Medien auf den linken Lappen, die aufgeblasen werden, und nicht auf den rechten Lappen¹⁰.
6. Eine 20 mL Luer Lock Spritze auf die Trachealkanüle Kanüle und fügen Sie ATCC Lungenkrebszellen (A549, H1299) in 50 mL RPMI1640 komplette Nährmedien (Abb. 2F).
7. Führen Sie die Zelle, die Aussaat in der Biosicherheit Kabinett. 15 mL von Zellen in der Spritze und lassen Sie es durchlaufen die Lungenlappen durch die Schwerkraft. Fügen Sie den Rest der Zellen, bevor eventuelle Luftblasen durchlaufen.
8. In azellulärer Lunge Aussaat, tropfte in den Bioreaktor Flasche PERFUNDIERTEN Medien sammeln Sie und lassen Sie es durchlaufen die Luftröhre wieder 3 X.
   Hinweis: Die PERFUNDIERTEN Medien hat manchmal die Krebszellen ausgesät. Daher für die effiziente Saat, setzen Sie wieder die Medien wieder in der Luftröhre durch die Spritze.
9. Einmal ausgesät, ziehen Sie die Spritze, 15 min. warten frische Medien hinzufügen und des Bioreaktors Inkubator wieder zurückzukehren. Entfernen Sie eventuelle Luftblasen im Schlauch.
10. Starten der Pumpe, damit die Medien mit 6 mL/min durchspülen.

Ergebnisse

Die Lunge von Ratte geerntet unterhält die intakte Gefäßsystem Alveolen¹¹ (Abb. 3A und 3 b). Auf Decellularization sind die extrazelluläre Matrix Komponenten eine azelluläre Lunge, wie Kollagen, Fibronektin und Elastin,¹¹ (Abbildung 3, 3D, 3Eund 3F) erhalten. Die Decellularization führt zu eine vollständige Entfernu...

Diskussion

Die ex-Vivo 4-D Lunge bietet die Möglichkeit, Tumorwachstum und Metastasierung in einem Labor zu untersuchen. Eine native Lunge-Matrix ist ein komplexes System, das unterstützt normalgewebe und Zell-Zell-Interaktionen, Zelle-Matrix Interaktionen, Zelldifferenzierung und Gewebe Organisation unterhält. Es bietet Gelegenheit, fügen Sie jeder Tumor Mikroumgebung Komponenten, um ihre Auswirkungen auf das Tumorwachstum und die Interaktion mit anderen Zellen zu studieren.

Die Lunge-Ernte ist...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Sprague Dowley Ratte	Harlan	206M	Männlicher
Chlorhexidin-Tupfer	Prevantics, NY, USA	NDC 10819-1080-1
Heparin	Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USA	NDC 25021-400-10
18-Gauge-Nadel	McMaster Carr, USA	75165A249
2-0 Seidenkrawatte	Ethicon, San Angelo, TX, USA	A305H
Masterflex L/S Pumpe	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07554-80
Masterflex L/S Pumpenkopf	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-05
Masterflex L/S Pumpenkartusche	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-70
Tygon Schlauch	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	14171211
MasterFlex Pumpschlauch	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-16
Luer-Lock-Buchse	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-34	75165A249
Luer-Lock-Kupplung	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45513-04
schwarzer Nylonring	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-45509-04
Intravenöses Set	CareFusion	41134E
Natriumdodecylsulfat (SDS)	Fisher Scientific	CAS151-21-3
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Antibiotika	Gibco	15240-062
Silikonoxygenator	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	ABW00011	Saint-GoBain-Drahtgeflecht
	1164610105	Lowes	New York Draht
Weiblicher Luer-Lug-Typ TEE	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-56
Männlicher Luer-Integral-Sicherungsring für 200series Barb	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45518-08
Weiblicher Luer-Gewinde-Koppler	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-22
Clave-Anschluss	ICU Medical	11956
Hi-Flo & Handel; 4-Wege-Absperrhahn mit drehbarem Luer-Locksmith	Medical	MX9341L
MasterFlex Pumpschlauch	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-13	für Kanüle