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Methodenartikel

Synthese und Charakterisierung von Plazenta Chondroitin Sulfat (PlCSA) - Targeting Lipid - Polymer Nanopartikel

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DOI:

10.3791/58209

⸱

18. September 2018

 ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 2Guangdong Key Laboratory of Nanomedicine, CAS Key Lab for Health Informatics, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 3Department of Chemistry, Guangdong Medical University

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Synthese von Plazenta Chondroitinsulfat A Bindung Peptid (PlCSA-BP)-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel über einstufigen Beschallung und Bioconjugate Techniken. Diese Partikel bilden ein neuartiges Instrument für die gezielte Bereitstellung von Therapeutika, die meisten menschlichen Tumoren und Plazenta Trophoblasten zur Behandlung von Krebserkrankungen und plazentare Störungen.

Zusammenfassung

Eine wirksame Krebs therapeutische Methode reduziert und beseitigt Tumoren mit minimaler systemischer Toxizität. Aktiv targeting Nanopartikel bieten einen vielversprechenden Ansatz in der Krebstherapie. Plazentar Chondroitinsulfat Glykosaminoglykan (PlCSA) drückt sich auf einer Vielzahl von Krebszellen und Plazenta Trophoblasten und Malaria Protein, das VAR2CSA speziell an PlCSA binden können. Eine gemeldete plazentar Chondroitinsulfat A Bindung Peptid (PlCSA-BP), abgeleitet von Malaria Protein VAR2CSA, kann auch speziell an PlCSA auf Krebszellen und Plazenta Trophoblasten binden. Infolgedessen konnte PlCSA-BP-konjugiert Nanopartikel als Instrument zur zielgerichteten Wirkstoffabgabe menschlichen Krebserkrankungen und Plazenta Trophoblasten eingesetzt werden. In diesem Protokoll beschreiben wir eine Methode zu synthetisieren, PlCSA-BP-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel geladen mit Doxorubicin (PlCSA-DNPs); die Methode besteht aus einer einzigen Beschallung Schritt und Bioconjugate Techniken. Darüber hinaus werden verschiedene Methoden zur Charakterisierung von PlCSA-DNPs, einschließlich der Bestimmung ihrer physikalisch-chemischen Eigenschaften und zelluläre Aufnahme durch plazentare Choriocarcinoma (JEG3) Zellen beschrieben.

Einleitung

Eine wirksame Krebs therapeutische Methode reduziert und beseitigt Tumoren mit minimaler systemischer Toxizität. Daher ist die selektive Tumor targeting der Schlüssel zum erfolgreiche therapeutischen Methoden zu erforschen. Nanopartikel bieten eine vielversprechende Möglichkeit für die Krebstherapie und molekulare Baugruppen mit unterschiedlichen Funktionsgruppen Wirksamkeit von Medikamenten zu verbessern und reduzieren damit verbundenen Nebenwirkungen1,2. Darüber hinaus nutzen Nanopartikel Systeme vor allem passive und aktive targeting um Ziel Tumoren3zu erreichen.

Passive targeting nutzt die angeborenen Eigenschaften von Nanopartikeln und verbesserte Durchlässigkeit und Aufbewahrung (EPR) Effekte, Tumorzellen zu erreichen. Kationische Liposomen sind erfolgreich benutzt worden, Tumore in klinische Anwendungen4,5,6verschiedene Krebsmedikamente anzubieten. Trotz der potenziellen wirksam Krebs therapeutische Wirkung eine geringe Wirkstoffkonzentration in der tumorregion und der Unfähigkeit, Tumorzellen von normalen Zellen zu unterscheiden sind zwei wesentliche Einschränkungen des passiv-targeting Nanopartikel7.

Aktive targeting-Strategien nutzen Sie Antigen-Antikörper, Ligand-Rezeptor und andere molekulare Erkennung Interaktionen gezielt Medikamente an Tumoren8liefern. Plazentar Chondroitinsulfat Glykosaminoglykan (PlCSA) drückt sich im großen und ganzen auf die meisten Krebszellen und Plazenta Trophoblasten. Darüber hinaus können die Malaria Protein VAR2CSA speziell an PlCSA9,10binden. Daher kann VAR2CSA ein Werkzeug für das targeting von menschlichen Krebszellen sein. Wenn VAR2CSA mit Nanopartikeln konjugiert wird, kann das Full-Length Protein jedoch das Eindringen von Nanopartikeln in Tumorzellen einschränken. Kürzlich entdeckten wir eine PlCSA Bindung Peptid (PlCSA-BP), abgeleitet von der Malaria Protein VAR2CSA. PlCSA-BP-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel rasch auf Choriocarcinoma Zellen und deutlich erhöhte Doxorubicin (DOX) Anti-Krebs-Aktivität in Vivo11gebunden; Diese Partikel auch speziell auf Plazenta Trophoblasten gebunden und als ein Instrument für die gezielte Abgabe von Medikamenten auf die Plazenta12dienen könnte.

Lipid-Polymer Nanopartikel bestehen aus einer Lipid-Monolayer-Shell und einer hydrophoben Polymeren Kern und repräsentieren einen neuen Träger für Drug-Delivery. Diese Nanopartikel verbinden die Vorteile von Liposomen und Polymeren darin, z. B. steuerbare nanopartikelgröße hohe Biokompatibilität, nachhaltiger Wirkstofffreisetzung, hohe Medikament laden Effizienz (LE) und ausgezeichnete Stabilität13. In dieser Arbeit haben wir eine einstufigen Beschallung Methode Lipid-Polymer Nanopartikel synthetisieren. Diese Methode ist schnell, bequem und Scale-up geeignet und ist am meisten benutzt Lipid-Polymer Nanopartikel Vorbereiten von unserer Gruppe11,14 u. a.15,16,17,18 .

1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) Carbodiimide Hydrochlorid (EDC) ist eine beliebte Carbodiimide als ein Vernetzungsmittel für Biomoleküle mit Aminen und Carboxylates19Konjugation verwendet. Neben EDC ist N-Hydroxysulfosuccinimide (NHS) das am weitesten verbreitete Konjugation Reagenz in Oberfläche und Nanopartikel Konjugation Reaktionen20,21. NHS kann reduzieren die Anzahl der Nebenreaktionen und verbessern die Stabilität und Ausbeute an Ester Zwischenprodukte22,23.

Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Synthese von PlCSA gezielt Lipid-Polymer Nanopartikel. Erstens wird die einstufigen Beschallung Synthese von DOX-geladene Lipid-Polymer-Nanopartikeln (DNPs) beschrieben. Dann wird eine EDC/NHS Bioconjugate Technik zur Erzeugung von PlCSA-BP-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel eingeführt. Diese Bioconjugate Technik kann auch verwendet werden, andere Antikörper und Peptide mit Nanopartikeln zu konjugieren. Schließlich beschreiben wir die physikalisch-chemischen Eigenschaften und in-vitro- Assay verwendet, um die PlCSA ausgerichtete Lipid-Polymer Nanopartikel charakterisieren. Wir glauben, dass diese PlCSA gezielt Lipid-Polymer Nanopartikel ein effektives System für die gezielte Gabe von Medikamenten, um die meisten menschlichen Krebserkrankungen und die gezielte Bereitstellung von Nutzlasten der Plazenta zu plazentare Störungen zu behandeln sein könnte.

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Protokoll

1. Vorbereitung der Stammlösungen

  1. Bereiten Sie eine wässrige Lösung von 4 % Ethanol durch Verdünnung 4 mL absolutes Ethanol mit 100 mL Reinstwasser. Die Lösung bei 4 ° c Lagern
    Hinweis: Reinstwasser bezeichnet Wasser ohne Verunreinigungen wie Bakterien, Partikel, Ionen oder Nukleasen. Reinstwasser aus eine Wasseraufbereitungsanlage mit einem Ziel-Widerstand von bis zu 18,2 mΩ·cm, d.h. geringe anionischen Belastung ermittelt.
  2. Bereiten Sie eine 1 mg/mL Soja-Lecithin-Stammlösung durch Auflösen von 20 mg Soja-Lecithin in 20 mL der wässrigen Lösung von 4 % Ethanol. Lagern Sie Soja-Lecithin-Stammlösung bei 4 ° c
  3. Bereiten Sie eine 25 mg/mL DSPE-PEG (2000)-COOH Stammlösung durch Auflösen 100 mg DSPE-PEG-COOH in 4 mL der wässrigen Lösung von 4 % Ethanol. Speichern der Stammlösung bei-20 ° C.
  4. Bereiten Sie eine 10 mg/mL DOX Stammlösung durch Auflösen von 50 mg in 5 mL Reinstwasser DOX. Speichern Sie die DOX-Stammlösung bei 4 ° C im Dunkeln.
  5. Bereiten Sie 2 mg/mL durch Auflösen von 20 mg in 10 mL Acetonitril PLGA PLGA-Stammlösung vor. Speichern der PLGA-Stammlösung bei 4 ° C.
    Achtung: Acetonitril ist brennbar und giftig. Arbeiten mit Sorgfalt in einer Dampfhaube und entsprechende persönliche Ausrüstung, wie Laborkittel, Schutzbrille und Handschuhe aus Latex zu tragen.
  6. Bereiten Sie eine 0,1 M 2-(morpholino) Ethanesulfonic Säure (MES, pH 6.0) Stammlösung durch MES 2,17 g in 100 mL hochreines Wasser auflösen. Speichern der Stammlösung bei 4 ° C.

2. Synthese von DNPs

Hinweis: Zur Vermeidung von DOX photochemischen Abbau wurden alle Vorgänge in der Dunkelheit durchgeführt.
Nanopartikel synthetisiert wurden durch eine zuvor gemeldeten Einzelschritt Beschallung Methode11,13,14.

  1. Eine sterile 10 mL Zentrifugenröhrchen 3 mL der wässrigen Lösung von 4 % Ethanol hinzufügen. Fügen Sie dann 90 µg der Vorratslösung Soja Lecithin, 210 µg der DSPE-PEG-COOH Vorratslösung und 750 µg der Vorratslösung DOX bis 3 mL der wässrigen Lösung von 4 % Ethanol.
  2. Legen Sie die Zentrifugenröhrchen in ein Eisbad, und platzieren Sie das Eisbad auf einem Ultraschall-Prozessor.
  3. Mit einer 1 mL Spritze pipette 2 mg der PLGA Vorratslösung tropfenweise (1 Tropfen/4-6 s) in die Zentrifugenröhrchen. In der Zwischenzeit, Beschallen Sie die Röhre mit einem Ultraschall-Prozessor bei einer Frequenz von 20 kHz und einer Ausgabe Amplitude von 30 % für 5 min die DNPs synthetisieren.
    Hinweis: Um einheitliche Partikel mit kleinen Größen zu synthetisieren, muss die Geschwindigkeit bei der PLGA-Lösung in das Röhrchen getropft ist langsam und Blase sollte vermieden werden.
  4. Reinigen Sie die DNPs durch Waschen die obige Lösung in 0,1 M-MES-Puffer (pH 6.0) 3 Mal mit einer Zentrifuge Filter (MWCO, 10 kDa). Zentrifuge bei 4 ° C und 1000 × g für 3 min jedes Mal. Zu guter Letzt sollte etwa 1 mL der Nanopartikel MES gelöst bleiben.
    Hinweis: Dies ist eine akzeptable Haltepunkt in der Prozedur. Wenn nicht verwendet, um Peptide zu konjugieren, Nanopartikel können durch PBS-Puffer (pH 7,4) gereinigt werden, und die gereinigten DNPs können bei 4° C im Dunkeln gelagert werden.

(3) Konjugation von Peptiden, DNPs

  1. Ester-Aktivierung
    1. Hinzufügen von 0,4 mg von EDC (Endkonzentration 2 mM), 1 mL DNPs.
    2. Die Reaktion 0,24 mg des NHS hinzufügen (Endkonzentration 2 mM).
      Hinweis: Für einfache Zugabe der richtigen Menge an EDC und NHS, kann eine Stammlösung hergestellt werden, wenn die Reagenzien sind aufgelöst und sofort verwendet werden.
    3. Mischen Sie die reaktionskomponenten gut, und legen Sie die Reaktion auf einen Shaker; lassen Sie Reaktion für 30 min - 1 h bei Raumtemperatur im Dunkeln.
  2. Amin-Reaktion
    1. Erhöhen Sie den Puffer pH-Wert auf 7.2-7.5 mit PBS (20 ×, pH 7.4).
    2. Die Reaktionslösung 0,5 mg des PlCSA-targeting Peptids (PlCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC) hinzufügen.
      Hinweis: Vor der Zugabe, lösen Sie die Peptide in 20 % Acetonitril auf. Wenn Peptide nicht auflösbar sind, kann Ultraschall in einem Bad sonikator hilfreich.
    3. Mischen Sie die Lösung gut und dann auf einen Shaker; lassen Sie die Reaktion bei 4 ° C über Nacht im Dunkeln vorzugehen.
    4. Dialysebeutel (MWCO, 3.500 Da), Dialyse und Reinigen der PlCSA-DNPs conjugate Lösung setzen mit PBS (pH 7,4) Puffer bei Raumtemperatur für 24 h im Dunkeln.
      Hinweis: Alternativ könnte Reinigung wie in Schritt 2.4 zu PlCSA-DNPs durchgeführt werden.
    5. Für Zelle Kultur Anwendungen filtern Sie die rekonstituierte Lösung durch einen 0,22 µm sterile Spritze Filter, mögliche Ausscheidungen zu entfernen.

4. Charakterisierung der PlCSA gezielte Lipid-Polymer Nanopartikel

  1. Messung der hydrodynamischen nanopartikelgröße verwenden dynamische Lichtstreuung (DLS)
    1. Verdünnen Sie Nanopartikel mit Reinstwasser (50-fold Verdünnung). Laden Sie 500 µL der Probe in eine Küvette gemäß den Anweisungen des DLS oder Zeta potential Instruments.
      Hinweis: Zeta-Potential und DLS Küvetten können abhängig von dem Instrument den Spezifikationen abweichen.
    2. Nachdem die Messung abgeschlossen ist, notieren Sie die Partikeldurchmesser, Polydispersität Index (PDI) und Zetapotenzial. Durchschnittliche Ergebnisse von 4 Lesungen wiederholt, und die Standardabweichung zu berechnen.
  2. Transmissions-Elektronenmikroskopie (TEM)
    Hinweis: Die Morphologie der Nanopartikel wurde durch TEM mit negativen Fleck-Methode beobachtet. 24
    1. Verdünnen Sie Nanopartikel mit Reinstwasser (400-fold Verdünnung). Fügen Sie 20 µL der Probe auf ein TEM-Raster hinzu und lassen Sie Sie für 5 Minuten sitzen.
    2. 100 µL von 2 % (w/V) Phosphotungstic Acid und lassen Sie das Droplet für 2 min. Docht entfernt sitzen.
    3. Trocknen Sie die TEM-Raster bei Zimmertemperatur.
    4. Legen Sie die Beschleunigungsspannung TEM bei 80 kV, und vergrößern Sie das Bild auf 100.000 ×, die Nanopartikel zu visualisieren.
  3. Bestimmung der Kapselung Effizienz (EE) und LE
    1. Erstellung der Standardkurve. DOX Reinstwasser zur Vorbereitung DOX Lösungen von fünf verschiedenen Konzentrationen zu lösen: 1 µg/mL, 5 µg/mL, 10 µg/mL, 50 µg/mL und 100 µg/mL. Messen Sie die Absorption der DOX Lösungen bei 480 nm mit einem UV-VIS-Spektrometer. Generieren Sie eine Standardkurve basierend auf die DOX-Konzentrationen.
    2. Verdünnen Sie 25 µL von Nanopartikeln mit 500 µL ultrareinem Wasser. Messen Sie die Absorption bei 480 nm mit einem UV-VIS-Spektrometer. Berechnen Sie die Droge-Konzentrationen der Standardkurve.
    3. Berechnen Sie LE, die unter Verwendung der folgenden Gleichung:
      LE = ((Menge der Medikamente in Nanopartikel) / (Gesamtgewicht Materialien)) × 100 %.
    4. Berechnen Sie die EE unter Verwendung der folgenden Gleichung:
      EE = ((Menge der Medikamente in Nanopartikel) / (Menge zugegeben Droge)) × 100 %.
  4. Messung der Konjugation Effizienz mit Hilfe des Bicinchoninic Säuren (BCA) Tests 25 , 26 , 27
    1. Pipette 25 µL standard Peptid-Lösungen (Tabelle 1) oder PlCSA-DNPs in Mikrotestplatte Vertiefungen in zweifacher Ausfertigung. Jedes gut 200 µL des Reagenz arbeiten hinzu, und mischen Sie die Platte auf einer Platte Shaker für 30 s.
    2. Die Abdeckplatte, und bei 37 ° C für 30 min inkubieren.
    3. Messung der Extinktion bei 562 nm auf ein Lesegerät, Platte. Die PlCSA Konzentrationen von PlCSA-DNPs berechnen mithilfe der generierten Standardkurve.
    4. Berechnen Sie die Konjugation Effizienz unter Verwendung der folgenden Gleichung:
      Konjugation Effizienz = ((Betrag des Peptids in Nanopartikel) / (Menge zugegeben Peptid)) × 100 %.
DurchstechflascheVolumen des Verdünnungsmittels (μL)Lautstärke und Quelle des Peptids (μL)Final-Peptid-Konzentration (μg/mL)
A0300 Aktien1000
B250250 der Durchstechflasche einer Verdünnung500
C250250 der Ampulle B Verdünnung250
D250250 der Durchstechflasche C Verdünnung125
E300Es werden 200 von Fläschchen D Verdünnung50
F250250 Fläschchen E Verdünnung25
G400100 Fläschchen F Verdünnung5
H50000

Tabelle 1. Vorbereitung der Standard Peptide

(5) Fluoreszenz-Mikroskopie Bewertung der PlCSA gezielt Nanopartikel Aufnahme in Choriocarcinoma (JEG3) Zellen

  1. Zellen auf sterile 12-Well-Platten bei 1.0 × 10 Samen4 Zellen/Brunnen mit kompletten DMEM/F12 (cDMEM/F12, mit 1 % Penicillin/Streptomycin und 10 % fetalen bovine Serum (FBS)). Lassen Sie die Zellen bis zu 60 % Zusammenfluss bei 37 ° C und 5 % CO2 unter feuchten Bedingungen wachsen.
  2. Entfernen Sie den Datenträger, und 1 mL kalte frische Medien mit einem niedrigen Serum-Gehalt (5 % FBS) und DNPs oder PlCSA-DNPs (5 µg DOX-Äquivalent).
  3. Inkubieren Sie die Mischung aus Zellen und Nanopartikeln bei 4 ° C für 1 h.
  4. Entfernen Sie nach der Inkubation den Datenträger, und waschen Sie die Zellen dreimal mit PBS. Dann fügen Sie 1 mL frisch cDMEM/F12, und inkubieren Sie die Zellen bei 37 ° C für 30 min.
  5. Entfernen Sie die cDMEM/F12, und waschen Sie die Zellen dreimal mit PBS.
  6. Fügen Sie 2 mL kalten 4 % Paraformaldehyd (PFA) und inkubieren Sie bei Raumtemperatur 15 Minuten, die Zellen zu beheben.
  7. Entfernen Sie die PFA. Waschen Sie die Zellen mit 2 mL PBS einmal. Fügen Sie 1 mL PBS mit DAPI (1 µg/mL) für Kerne Färbung, und in 10 min bei Raumtemperatur inkubieren.
  8. Aspirieren der PBS, und die Zellen dreimal mit PBS waschen.
  9. Fügen Sie Eindeckmittel und Bild der Fluoreszenz mit einem Fluoreszenz-Mikroskopie, mit grünen und blauen Kanäle um die DOX und Kerne, bzw. zu visualisieren.

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Ergebnisse

In diesem Protokoll PLGA, DSPE-PEG-COOH und Soja Lecithin sind einer repräsentativen Polymer, Lipid-PEG-COOH Konjugat Lipid, bzw.. Die Synthese von PlCSA gezielt Lipid-Polymer Nanopartikel über einen einstufigen Beschallung Methode und einer EDC/NHS-Technik ist in Abbildung 1dargestellt. Zunächst unter Beschallung Bedingungen, Soja Lecithin, PLGA und DSPE-PEG-COOH selbst zusammensetzen, Form Kern-Schale strukturiert DNPs. Der Kern besteht aus PLGA un...

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Diskussion

Dieses Protokoll bietet eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Synthese von PlCSA-BP-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel. Die einstufigen Beschallung Methode, Lipid-Polymer Nanopartikel vorzubereiten ist schnelle, reproduzierbare und unterscheidet sich von typischen Nanoprecipitation Methoden, die Heizung, aufschütteln oder Verdunstung betreffen. Die entwickelte Methode reduziert daher die Synthese-Zeit. Darüber hinaus ist die EDC/NHS Bioconjugate in diesem Protokoll verwendeten eine häufig gebrauchte und güns...

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Offenlegungen

X.F. und B.Z. sind die Erfinder das patent PCT/CN2017/108646 und 201710906587.6 Verfasst von SIAT, die eine PlCSA ausgerichtete Nanopartikel-Synthese-Methode und Anwendung abdeckt. Potenzielle Interessenkonflikte wurden von den anderen Autoren bekannt gegeben.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse vom National Key Research und Development Program of China (2016YFC1000402), der National Natural Sciences Foundation (81571445 und 81771617) und Natural Science Foundation der Provinz Guangdong (2016A030313178), unterstützt. X.F. und die Shenzhen Basic Research Fund (JCYJ20170413165233512), X.F.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
plCSA-PeptidShanghai GL Biochem573518für die Peptidsynthese
Ethanol absolutSinopharm Chemisches10009218für die Synthese von Nanopartikeln
SojalecithinAvanti Polar Lipids441601für die Synthese von Nanopartikeln
DSPE-PEG-COOHAvanti Polar Lipids880125 für die Synthese
von NanopartikelnDoxorubicinJKKhemische113424für die Synthese von Nanopartikeln
AcetonitrilShanghai Lingfeng1008621für die Synthese von Nanopartikeln
PLGASigma-Aldrich719897für die Synthese von Nanopartikeln
UltraschallprozessorSonicsVCX130für die Synthese von Nanopartikeln
Zentrifugenfilter (MWCO 10 kDa)MilliporeUFC801024für die Aufreinigung von Nanopartikeln
ZentrifugeSigma3-18KSfür die Aufreinigung von Nanopartikeln
: 2-[Morpholino]ethansulfonsäure (MES)Sigma-AldrichM3671für die Peptidkonjugation
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidhydrochlorid (EDC)Sigma-Aldrich3450für die Peptidkonjugation
N-Hydroxysuccinimid (NHS)Sigma-Aldrich56480für die Peptidkonjugation
DialysebeutelSpectrum132592Tfür die Aufreinigung von Nanopartikeln
PBSHycloneSH30028.01für Zellkulturen
10 mL Zentrifugenröhrchen, PolypropylenAladdinS-025für die Synthese von Nanopartikeln
15 mL Zentrifugenröhrchen, PolypropylenCorning430791für verschiedene Anwendungen
0,22 μm m steriler SpritzenvorsatzfilterMilliporeSLGV033RBfür die Reinigung von Nanopartikeln
1 ml Spritze, PolypropylenBD328421für die Synthese von Nanopartikeln
Malvern ZetasizerMalvernNano ZSfür Partikelgrößenanalyerer
Phosphowolframsäurefür TEM
TEM-GitterEMCNBZ10024afür TEM
UV-VIS-SpektrometerLeageneDZ0035für TEM
Transmission
Elektronenmikroskop		JEOLJEM-100CXIIfür Partikelgrößenanalyer
BCA-Reagenz AThermo Fisher Scientific23228für BCA-Assay BCA-Reagenz
BThermo Fisher Scientific23224für BCA-Assay
96-Well-PlattenCorning3599für BCA
Assay Plate ReaderThermo Fisher ScientificMultiskan™ GOfür BCA-Assay
12-Well-PlattenCorning3513für Zellkulturen
JEG3-ZellenZellbank der Chinesischen Akademie der WissenschaftenTCHu195Humane Plazenta
DMEM/F12HyklonSH30272.01phenolrotfreies
fötales Rinderserum (FBS)GIBCO10100für Zellkultur
Penicillin/StreptomycinGIBCO15070063für Zellkultur
FluoreszenzmikroskopOLYMPUSCKK53für die Zellaufnahme
ParaformaldehydShanghai Lingfeng1372021für die Zellularaufnahme
DAPISangon BiotechA606584für die Zelluaufnahme
EindeckmediumLifeP36961für die Zelluaufnahme
: :

Referenzen

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PeptidkonjugationBeladung mit DoxorubicinAssay zur zellul ren AufnahmeFluoreszenzmikroskopieMessung des ZetapotenzialsTEM BildgebungSynthese von PLGA NanopartikelnEsteraktivierungsreaktion
Synthese und Charakterisierung von Plazenta Chondroitin Sulfat (PlCSA) - Targeting Lipid - Polymer Nanopartikel
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