Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Synthese von Plazenta Chondroitinsulfat A Bindung Peptid (PlCSA-BP)-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel über einstufigen Beschallung und Bioconjugate Techniken. Diese Partikel bilden ein neuartiges Instrument für die gezielte Bereitstellung von Therapeutika, die meisten menschlichen Tumoren und Plazenta Trophoblasten zur Behandlung von Krebserkrankungen und plazentare Störungen.
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Methodenartikel
Synthese und Charakterisierung von Plazenta Chondroitin Sulfat (PlCSA) - Targeting Lipid - Polymer Nanopartikel
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Eine wirksame Krebs therapeutische Methode reduziert und beseitigt Tumoren mit minimaler systemischer Toxizität. Aktiv targeting Nanopartikel bieten einen vielversprechenden Ansatz in der Krebstherapie. Plazentar Chondroitinsulfat Glykosaminoglykan (PlCSA) drückt sich auf einer Vielzahl von Krebszellen und Plazenta Trophoblasten und Malaria Protein, das VAR2CSA speziell an PlCSA binden können. Eine gemeldete plazentar Chondroitinsulfat A Bindung Peptid (PlCSA-BP), abgeleitet von Malaria Protein VAR2CSA, kann auch speziell an PlCSA auf Krebszellen und Plazenta Trophoblasten binden. Infolgedessen konnte PlCSA-BP-konjugiert Nanopartikel als Instrument zur zielgerichteten Wirkstoffabgabe menschlichen Krebserkrankungen und Plazenta Trophoblasten eingesetzt werden. In diesem Protokoll beschreiben wir eine Methode zu synthetisieren, PlCSA-BP-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel geladen mit Doxorubicin (PlCSA-DNPs); die Methode besteht aus einer einzigen Beschallung Schritt und Bioconjugate Techniken. Darüber hinaus werden verschiedene Methoden zur Charakterisierung von PlCSA-DNPs, einschließlich der Bestimmung ihrer physikalisch-chemischen Eigenschaften und zelluläre Aufnahme durch plazentare Choriocarcinoma (JEG3) Zellen beschrieben.
Einleitung
Eine wirksame Krebs therapeutische Methode reduziert und beseitigt Tumoren mit minimaler systemischer Toxizität. Daher ist die selektive Tumor targeting der Schlüssel zum erfolgreiche therapeutischen Methoden zu erforschen. Nanopartikel bieten eine vielversprechende Möglichkeit für die Krebstherapie und molekulare Baugruppen mit unterschiedlichen Funktionsgruppen Wirksamkeit von Medikamenten zu verbessern und reduzieren damit verbundenen Nebenwirkungen1,2. Darüber hinaus nutzen Nanopartikel Systeme vor allem passive und aktive targeting um Ziel Tumoren3zu erreichen.
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Protokoll
1. Vorbereitung der Stammlösungen
- Bereiten Sie eine wässrige Lösung von 4 % Ethanol durch Verdünnung 4 mL absolutes Ethanol mit 100 mL Reinstwasser. Die Lösung bei 4 ° c Lagern
Hinweis: Reinstwasser bezeichnet Wasser ohne Verunreinigungen wie Bakterien, Partikel, Ionen oder Nukleasen. Reinstwasser aus eine Wasseraufbereitungsanlage mit einem Ziel-Widerstand von bis zu 18,2 mΩ·cm, d.h. geringe anionischen Belastung ermittelt. - Bereiten Sie eine 1 mg/mL Soja-Lecithin-Stammlösung durch Auflösen von 20 mg Soja-Lecithin in 20 mL der wässrigen Lösung von 4 % Ethanol. Lagern Sie Soja-Lecithin-Stammlösung bei 4 ° c
- Bereiten Sie eine 25 mg/mL DS....
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Ergebnisse
In diesem Protokoll PLGA, DSPE-PEG-COOH und Soja Lecithin sind einer repräsentativen Polymer, Lipid-PEG-COOH Konjugat Lipid, bzw.. Die Synthese von PlCSA gezielt Lipid-Polymer Nanopartikel über einen einstufigen Beschallung Methode und einer EDC/NHS-Technik ist in Abbildung 1dargestellt. Zunächst unter Beschallung Bedingungen, Soja Lecithin, PLGA und DSPE-PEG-COOH selbst zusammensetzen, Form Kern-Schale strukturiert DNPs. Der Kern besteht aus PLGA un.......
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Diskussion
Dieses Protokoll bietet eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Synthese von PlCSA-BP-konjugiert Lipid-Polymer Nanopartikel. Die einstufigen Beschallung Methode, Lipid-Polymer Nanopartikel vorzubereiten ist schnelle, reproduzierbare und unterscheidet sich von typischen Nanoprecipitation Methoden, die Heizung, aufschütteln oder Verdunstung betreffen. Die entwickelte Methode reduziert daher die Synthese-Zeit. Darüber hinaus ist die EDC/NHS Bioconjugate in diesem Protokoll verwendeten eine häufig gebrauchte und güns.......
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Offenlegungen
X.F. und B.Z. sind die Erfinder das patent PCT/CN2017/108646 und 201710906587.6 Verfasst von SIAT, die eine PlCSA ausgerichtete Nanopartikel-Synthese-Methode und Anwendung abdeckt. Potenzielle Interessenkonflikte wurden von den anderen Autoren bekannt gegeben.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse vom National Key Research und Development Program of China (2016YFC1000402), der National Natural Sciences Foundation (81571445 und 81771617) und Natural Science Foundation der Provinz Guangdong (2016A030313178), unterstützt. X.F. und die Shenzhen Basic Research Fund (JCYJ20170413165233512), X.F.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| plCSA-Peptid | Shanghai GL Biochem | 573518 | für die Peptidsynthese |
| Ethanol absolut | Sinopharm Chemisches | 10009218 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| Sojalecithin | Avanti Polar Lipids | 441601 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 für die Synthese | |
| von NanopartikelnDoxorubicin | JKKhemische | 113424 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| Acetonitril | Shanghai Lingfeng | 1008621 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| PLGA | Sigma-Aldrich | 719897 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| Ultraschallprozessor | Sonics | VCX130 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| Zentrifugenfilter (MWCO 10 kDa) | Millipore | UFC801024 | für die Aufreinigung von Nanopartikeln |
| Zentrifuge | Sigma | 3-18KS | für die Aufreinigung von Nanopartikeln |
| : 2-[Morpholino]ethansulfonsäure (MES) | Sigma-Aldrich | M3671 | für die Peptidkonjugation |
| 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidhydrochlorid (EDC) | Sigma-Aldrich | 3450 | für die Peptidkonjugation |
| N-Hydroxysuccinimid (NHS) | Sigma-Aldrich | 56480 | für die Peptidkonjugation |
| Dialysebeutel | Spectrum | 132592T | für die Aufreinigung von Nanopartikeln |
| PBS | Hyclone | SH30028.01 | für Zellkulturen |
| 10 mL Zentrifugenröhrchen, Polypropylen | Aladdin | S-025 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| 15 mL Zentrifugenröhrchen, Polypropylen | Corning | 430791 | für verschiedene Anwendungen |
| 0,22 μm m steriler Spritzenvorsatzfilter | Millipore | SLGV033RB | für die Reinigung von Nanopartikeln |
| 1 ml Spritze, Polypropylen | BD | 328421 | für die Synthese von Nanopartikeln |
| Malvern Zetasizer | Malvern | Nano ZS | für Partikelgrößenanalyerer |
| Phosphowolframsäure | für TEM | ||
| TEM-Gitter | EMCN | BZ10024a | für TEM |
| UV-VIS-Spektrometer | Leagene | DZ0035 | für TEM |
| Transmission Elektronenmikroskop | JEOL | JEM-100CXII | für Partikelgrößenanalyer |
| BCA-Reagenz A | Thermo Fisher Scientific | 23228 | für BCA-Assay BCA-Reagenz |
| B | Thermo Fisher Scientific | 23224 | für BCA-Assay |
| 96-Well-Platten | Corning | 3599 | für BCA |
| Assay Plate Reader | Thermo Fisher Scientific | Multiskan™ GO | für BCA-Assay |
| 12-Well-Platten | Corning | 3513 | für Zellkulturen |
| JEG3-Zellen | Zellbank der Chinesischen Akademie der Wissenschaften | TCHu195 | Humane Plazenta |
| DMEM/F12 | Hyklon | SH30272.01 | phenolrotfreies |
| fötales Rinderserum (FBS) | GIBCO | 10100 | für Zellkultur |
| Penicillin/Streptomycin | GIBCO | 15070063 | für Zellkultur |
| Fluoreszenzmikroskop | OLYMPUS | CKK53 | für die Zellaufnahme |
| Paraformaldehyd | Shanghai Lingfeng | 1372021 | für die Zellularaufnahme |
| DAPI | Sangon Biotech | A606584 | für die Zelluaufnahme |
| Eindeckmedium | Life | P36961 | für die Zelluaufnahme |
Referenzen
- Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
- Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
- Jabir, N. R., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
