Wir beschreiben die Entwicklung von einem schlanken PCOS-wie Maus-Modell mit Pellet-Dihydrotestosteron, die Pathophysiologie der PCOS und die Nachkommen aus diesen PCOS-wie Dämme zu studieren.
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Methodenartikel
Ein Hyperandrogenic Mausmodell, PCO-Syndrom zu studieren
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Hyperandrogenemia spielt eine entscheidende Rolle in der reproduktiven und metabolische Funktion bei Frauen und ist das Markenzeichen der PCO-Syndrom. Entwicklung eines schlanken PCOS-wie Maus-Modells, das Frauen mit PCOS imitiert ist klinisch relevant. In diesem Protokoll beschreiben wir ein solches Modell. Durch das Einfügen einer Länge von DHT (Dihydrotestosteron) Crystal Pulver Pellets 4 mm (Gesamtlänge der Pellets beträgt 8 mm), und monatlich zu ersetzen, können wir eine PCOS-wie Maus-Modell mit Serum DHT Level 2 fache höher als Mäuse nicht implantiert mit DHT (keine-DHT) zu produzieren. Wir beobachteten reproduktive und metabolische Dysfunktion ohne Gewicht und Körperzusammensetzung zu ändern. Während ein hohes Maß an Unfruchtbarkeit ausstellen, eine kleine Teilmenge dieser PCOS-wie weibliche Mäuse schwanger kann und ihre Nachkommen verzögerte Pubertät und erhöhte Testosteron als Erwachsene zeigen. Diese PCOS-wie schlanke Maus-Modell ist ein nützliches Tool um die Pathophysiologie von PCOS und die Nachkommen aus diesen PCOS-wie Dämme zu studieren.
Einleitung
Hyperandrogenism ist das Markenzeichen von PCO-Syndrom (PCOS) nach NIH-Kriterien und der überschüssige Androgen und PCOS (AE-PCOS) Gesellschaft. Frauen mit PCOS haben Schwierigkeiten, schwanger und haben ein erhöhtes Risiko von Schwangerschaft Komplikationen1. Selbst wenn sie schwanger werden, haben ihre weiblichen Nachkommen eines negativen gesundheitlichen Ergebnisse2,3. Tiermodelle sind entwickelt worden, mit verschiedenen Strategien4,5,6,7,
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Protokoll
Hier präsentieren wir Ihnen detaillierte Protokolle für DHT Pellet Vorbereitung und Eingliederung "und" für reproduktive und metabolischen Tests. Die Mäuse, die in dieser Studie verwendeten waren eine gemischte Hintergrund (C57/B6, CD1, 129Sv) und waren gepflegt mit Nahrung und Wasser Ad Libitum in einem 14/10 h-Hell-Dunkel-Zyklus bei 24 ° C in der Broadway-Forschungsgebäude Tierhaus an der Johns Hopkins University School of Medizin. Alle Verfahren wurden von der Johns Hopkins University Animal Care und Use Committee genehmigt.
1. Erstellen Sie PCOS-wie Maus-Modell
-
DHT-Pellet-Vorbereitung
- Autok....
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Ergebnisse
Serum-DHT-Spiegel und Glukose-Toleranz-test
DHT-Spiegel wurden aus gesammelten Serum durch beide ELISA und LC-MS gemessen nach Protokoll 1,24 – 1,25, und 2,9, 3.0. Die DHT Absolutwerte unterscheiden sich zwischen Massenspektrometrie und ELISA, jedoch die relative Falte, die von DHT Vs keine-DHT einsetzen ist ähnlich von beiden Assays und über Experimente15,23,
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Diskussion
Hyperandrogenism ist ein wesentliches Merkmal des PCOS. Das Serum DHT-Spiegel (zwei Falten höher in DHT Mäuse als bei keine-DHT Mäusen) verwendet in diesem Protokoll sind niedriger als die von anderen Forschern in früheren Studien gemeldet und sind so kalibriert, dass um Frauen mit PCOS5,19proportional zu imitieren, 20,21. Im Gegensatz zu anderen Modellen ändert dieses 2-fold DHT-Modell nicht .......
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Offenlegungen
Nichts preisgeben.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde unterstützt durch die National Institutes of Health (Zuschüsse R00-HD068130, S.W) und dem Baltimore Diabetes Research Center: Piloten und Machbarkeit Stipendium (S.W).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Kristallines 5α-DHT-Pulver | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Silastic Schlauch | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0,04 Zoll/1 mm Innendurchmesser x0,085 Zoll/2,15 mm Außendurchmesser |
| Medizinisches Klebesilikon | Faktor II, InC. | A-100 | |
| Schutzbrille, Laborkittel, Handschuhe und Masken. | |||
| 10 & Mikro; L Pipettenspitzen ohne Filter | USA Scientific | 11113700 | |
| Objektträger für Abstrich | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik zum Färben von Zellen | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL Spritze | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| aufgesetzte Nadel: 20 G | BD | 305176 | |
| Lineal: beliebig lang als 10 cm mit Millimeterskala. | |||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Ketaminhydrochlorid | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Chirurgische Klammer | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Insulinspritze | BD | 329461 | 1/2 CC, niedrig dosierte U-100 Insulinspritze |
| Trokar | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Mikroskop | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Deutschland |
| Ohrlocher | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testosteron Ratte/Maus ELISA Kit | IBL | B79174 | |
| DHT ELISA Kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| One Touch Ultra Glucometer | Life Scan, Inc. | ||
| One-Touch-Ultra-Teststreifen | Life Scan, Inc. | ||
| Eppendorf Tube | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Rasierklinge | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| chirurgische Unterlage | Fisher Scientific | 50587953 | Hersteller: Andwin Scientific 56616018 |
| Betadine Antiseptic Solution | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (n-Butylcyanacrylat) | 3M Science. Auf das Leben |
Referenzen
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....
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Nachdrucke und Genehmigungen
