Identifikation, histologische Charakterisierung und Dissektion der Maus Prostata Lappen für In-vitro-3D Sphäroid Kultur Modelle

Summary

Gentechnisch veränderte Mäuse sind nützliche Modelle für die Untersuchung von Prostata-Krebs-Mechanismen. Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Identifizierung und sezieren Prostate Lappen aus einer Maus Urogenitales System, basierend auf Histologie, zu unterscheiden und zu isolieren und als Sphäroide für nachgelagerte Analysen der primären Prostata-Zellen in Vitro Kultur.

Abstract

Gentechnisch veränderte Mausmodelle (GEMMs) dienen als effektive präklinischen Modellen zur Untersuchung von den meisten Arten von menschlichen Krebsarten, einschließlich Prostatakrebs (PCa). Verständnis der Anatomie und Histologie der Maus Prostata ist wichtig für die effiziente Nutzung und richtige Charakterisierung von solchen Tiermodellen. Die Maus-Prostata hat vier verschiedene Paare von Lappen, mit jeweils eigenen Merkmalen. Dieser Artikel beschreibt die richtige Methode der Dissektion und Identifikation der Maus Prostata Lappen für Krankheit-Analyse. Post-Dissektion der Prostata-Zellen weiter kultiviert in Vitro zum mechanistischen Verständnis kann. Seit Maus Prostata Primärzellen neigen dazu, ihre normale Eigenschaften verlieren wenn kultivierte in Vitro, beschreiben wir hier eine Methode für die Zellen zu isolieren und wächst sie als 3D Sphäroid Kulturen, die effektiv für die Erhaltung der physiologischen Eigenschaften der Zellen. Diese 3D Kulturen einsetzbar für Zellmorphologie und Verhalten in der Nähe von physiologischen Bedingungen untersuchen verändert Ebenen und Lokalisierungen der wichtigsten Proteine und Bahnen an der Entwicklung beteiligt und Verlauf der Krankheit zu analysieren und mit Blick auf Antworten auf medikamentöse Behandlungen.

Introduction

Die wissenschaftliche Gemeinschaft hat versucht, die komplexen Mechanismen der menschlichen Krebsentstehung jahrzehntelang aufzuklären. Während Identifizierung von potenziellen Akteure und Drogeziele mit Patienten Zellen und Gewebe-Studien beginnt, erfordert die translatorische Anwendung solcher Befunde oft die Verwendung von präklinischen Tiermodellen. Die Verwendung von gentechnisch veränderten Mäusen Modelle (GEMMs) bis Modell menschlichen Krebsarten ist kontinuierlich gestiegen, seit der Gründung des Maus Modelle der menschlichen Krebserkrankungen Consortium (NCI-MMHCC), ein Ausschuss, der versucht, zu beschreiben und zu vereinheitlichen Eigenschaften von Maus-Kre....

Protocol

Alle hier beschriebenen Maus-Experimente wurden nach den Richtlinien in der institutionellen IACUC zugelassene Protokolle SUNY Upstate Medical University durchgeführt.

(1) die Dissektion des Urogenitalsystems (UGS)

Hinweis: Der Schaltplan ist in Abbildung 1dargestellt.

1. Einschläfern Sie eine 3-Monate-alten männliche C57BL/6-Maus mit CO₂ inhalativer Euthanasie Methode oder eine andere anerkannte Technik.
   Hinweis: Mäuse im Alter von 3 bis 12 Monaten können erfolgreich für das Experiment verwendet werden. Ältere Mäuse (> 6 Monate) haben wahrscheinlich mehr Fett ru....

Results

Die Maus Prostata Lappen identifiziert werden können und seziert mit ihren Standorten in Bezug auf die Samenbläschen und der Harnröhre. Die Maus-Prostata besteht aus 4 Paare der Lappen liegt dorsal und ventral, der Samenbläschen und der Harnröhre. Abbildung 4a und 4 b (oben) zeigen den dorsalen und ventralen intakt Prostata, zusammen mit der Samenbläschen und der Harnröhre. Die unteren Verkleidungen (Abbildung 4 c

Discussion

Dieses Papier beschreibt die Methoden zur Präparation der Maus Prostata und Identifikation der einzelnen Lappen. Auch beschrieben, ist das Protokoll für die Kultivierung der Maus Prostata-Zellen in einer 3D Kultur für in-vitro- Analyse.

Ein wichtiger Schritt bei der Dissektion-Protokoll ist (1) Ernte die gesamte UGS aus der Maus und trennen die einzelnen Organe unter dem Mikroskop Dissektion. Das Prostatagewebe ist sehr klein und umgeben von den Rest des UGS; So ist es praktisch unmög.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chirurgische Instrumente für die Maus (Maus-Präparierset)	World Precision Instruments	MOUSEKIT
Dissektionsmikroskop
RPMI Medium	Thermofisher Scientific	11875093
Dissektionsmedium (DMEM + 10%FBS)	Thermofisher Scientific	11965-084
Fötales Rinderserum	Thermofisher Scientific
PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung)	Thermofisher Scientific	10010031
Kollagenase	Thermofisher Scientific	17018029	10x Brühe (10mg/ml) in RPMI herstellen, filtrieren, sterilisieren, aliquotieren und bei -20 ° lagern; C
Trypsin-EDTA (0,05%)	Thermofisher Scientific	25300054
DNase I	Sigma-Aldrich	10104159001  ROCHE
Spritzen und Nadeln	Fisher Scientific
Fisherbran  Sterile Zellsiebe, 40μm; m	Fisher Scientific	22-363-547
PrEGM BulletKit	Lonza	CC-3166	Alle Komponenten hinzufügen, aliquotieren und bei -20 °C lagern.
Matrigel Membranmatrix	Thermofisher Scientific	CB-40234
Dispase II Pulver	Thermofisher Scientific	17105041	10x Bestand (10mg/ml) in PrEGM herstellen, filtrieren, sterilisieren, aliquotieren und bei -20 & deg lagern; C