Isolierung, Fixierung und Immunfluoreszenz Imaging der Maus Nebennieren

Isabella Finco; Gary D. Hammer

doi:10.3791/58530

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Methodenartikel

Isolierung, Fixierung und Immunfluoreszenz Imaging der Maus Nebennieren

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DOI:

10.3791/58530

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2. Oktober 2018

Isabella Finco¹ , Gary D. Hammer¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Department of Internal Medicine (Division of Metabolism, Endocrinology, and Diabetes), University of Michigan Health System, ²Department of Cell and Developmental Biology, University of Michigan Health System, ³Department of Molecular and Integrative Physiology, University of Michigan Health System, ⁴Endocrine Oncology Program, University of Michigan Health System, ⁵Comprehensive Cancer Center, University of Michigan Health System

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir eine Methode, um die Nebennieren von Mäusen zu isolieren, das Gewebe zu beheben, sie Abschnitt und durchführen Immunfluoreszenz-Färbung.

Zusammenfassung

Immunfluoreszenz ist eine etablierte Methode zur Erkennung von Antigenen in Geweben mit der Beschäftigung von Fluorochrom-konjugierten Antikörpern und verfügt über ein breites Spektrum an Anwendungen. Erkennung von Antigenen ermöglicht die Charakterisierung und Identifizierung von mehreren Zelltypen. Oberhalb der Nieren und durch eine Schicht von mesenchymalen Zellen eingekapselt, ist der Nebenniere eine endokrine Organ, bestehend aus zwei verschiedenen Geweben mit unterschiedlicher embryologischen Herkunft, der mesonephric mittlere Mesoderm abgeleitet äußere Rinde und der neuronalen Kamm-abgeleiteten inneren Medulla. Die Nebennierenrinde sondert Steroide (d. h. Mineralocorticoids, Glukokortikoide, Sexualhormone), während das Nebennierenmark Katecholamine (z.B. Adrenalin, Noradrenalin) produziert. Während der Nebennieren forschen, ist es wichtig, einzigartige Zellen mit unterschiedlichen Funktionen unterscheiden zu können. Hier bieten wir ein Protokoll entwickelt, die in unserem Labor, das beschreibt eine Reihe von aufeinander folgenden Schritten erforderlich für den Erhalt der Immunfluoreszenz-Färbung, die Zelltypen der Nebenniere zu charakterisieren. Wir konzentrieren uns zunächst auf die Zerlegung der Nebennieren Maus die mikroskopische Entfernung von Periadrenal Fett, gefolgt von der Fixierung, die Verarbeitung und das Paraffin Einbettung des Gewebes. Wir beschreiben der Gewebe Blöcke mit einer rotierenden Mikrotom schneiden. Zu guter Letzt zeigen wir ein Protokoll für immunofluorescent Färbung der Nebennieren, die wir entwickelt haben, um unspezifische Antikörperbindung und Autofluoreszenz zu minimieren, um ein optimales Signal zu erreichen.

Einleitung

Immunohistochemistry ist eine Technik zur Erkennung von gewebeanteile mit dem Einsatz von Antikörpern gegen spezifische zelluläre Moleküle und anschließende befleckenden Techniken der konjugierten Antikörpern¹zu erkennen. Diese immunhistochemische Verfahren erfordert spezielle Fixierung und Verarbeitung von Geweben, die für das Antigen oft empirisch ermittelt werden, Gewebe und Antikörper verwendet². Die Fixierung ist entscheidend für den "ursprünglichen" Zustand des Gewebes und damit Erhaltung intakten zellulären und subzellulären Strukturen und Expressionsmuster beizubehalten. Weitere sind Verarbeitung und Einbettung V....