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Methodenartikel

Unterdrückung des multiplen Myeloms Zellwachstum In Vivo durch Single-Wall Carbon Nanotube (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geliefert

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DOI:

10.3791/58598

⸱

13. Dezember 2018

 ,  , 
1Department of Cancer Biology, Lerner Research Institute, Cleveland Clinic, 2Department of Medical Oncology, Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Manuskript beschreibt die Synthese von einem einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhrchen (SWCNT)-konjugiert MALAT1 antisense Gapmer DNA-Oligonukleotid (SWCNT-Anti-MALAT1), welche die zuverlässige Zustellung der SWCNT und potente Wirkung des zeigt Anti-MALAT1 in vitro und in vivo. Methoden zur Synthese, Modifikation, Konjugation und Injektion von SWCNT-Anti-MALAT1 werden beschrieben.

Zusammenfassung

Die einwandigen Kohlenstoff-Nanoröhrchen (SWCNT) ist eine neue Art von Nanopartikel, die verwendet wurde, um mehrere Arten von Drogen in Zellen, wie Proteine, Oligonukleotide und synthetischen kleinen Molekül-Drogen zu liefern. Die SWCNT verfügt über anpassbare Dimensionen, oberflächliche großflächig und kann flexibel mit Drogen durch verschiedene Modifikationen an seiner Oberfläche binden; Daher ist es ein ideales System, Medikamente in die Zellen zu transportieren. Lange forensisches RNAs (LncRNAs) sind eine Gruppe von mehr als 200 nichtcodierender RNA nt, die nicht in Protein übersetzt werden, sondern spielen eine wichtige Rolle in biologischen und pathophysiologischen Prozessen. Metastasen-assoziierten Lunge Adenokarzinom Transkript 1 (MALAT1) ist eine hoch konservierte LncRNA. Es konnte gezeigt werden, dass höhere MALAT1 die schlechte Prognose der verschiedenen Krebsarten, einschließlich Multiples Myelom (MM) verbunden sind. Wir haben gezeigt, dass MALAT1 DNA-Reparatur und Zelle Tod im MM regelt; So können MALAT1 als ein therapeutisches Ziel für MM betrachtet werden. Die effiziente Bereitstellung von antisense Oligo zu hemmen/Zuschlag MALAT1 in-vivo ist jedoch nach wie vor ein Problem. In dieser Studie wir SWCNT mit PEG-2000 zu ändern und eine Anti-MALAT1-Oligo zu konjugieren, testen die Lieferung dieses mittels in-vitro-injizieren es intravenös in einem verbreiteten MM-Maus-Modell und beobachten eine deutliche Hemmung der MM-Progression, was darauf hindeutet Diese SWCNT ist eine ideale Lieferung-Shuttle für Anti-MALAT1 Gapmer DNA.

Einleitung

Die SWCNT ist eine neuartige Nanomaterialien, die verschiedenen Arten von Drogen, wie Proteine, kleine Moleküle und Nukleinsäuren, stabil und effizient mit ideale Verträglichkeit und minimale Toxizität in Vitro1 und in-vivo2liefern kann. Funktionalisierten SWCNT kann hat große Biokompatibilität und Wasser Löslichkeit, kann als ein Shuttle für kleinere Moleküle verwendet werden, und sie dringen in die Zellmembran3,4,5.

LncRNAs sind eine Gruppe von RNA (> 200 nt), die aus dem Genom zu mRNA transkribiert werden, aber nicht in Proteine übersetzt werden. Erhöhung der Beweis hat gezeigt, dass LncRNAs in der Regulation der Gene Expression6 beteiligen und engagieren sich in der Initiierung und Progression der meisten Arten von Krebs, einschließlich MM7,8,9. MALAT1 ist ein nuklearer bereichert forensisches Transkript 2 (NEAT2) und einer hoch konservierten LncRNA10. MALAT1 wird zunächst im metastasierten nicht-kleinzelligen Lungenkrebs (NSCLC) Krebs11erkannt, aber hat in zahlreichen Tumoren5,12,13überexprimiert wurden; Es ist eines der höchst exprimierten LncRNAs und korreliert mit einer schlechten Prognose in MM8,14. Die Expression des MALAT1 ist signifikant höher bei tödlichen Kurs extramedulläre MM Patienten im Vergleich zu denen nur als MM15diagnostiziert.

In einer früheren Studie haben wir bestätigt, dass Anti-MALAT1 Oligos robust zu DNA-Schäden und Apoptose in MM16 führen mithilfe von Gapmer DNA antisense Oligonucleotides targeting MALAT1 (Anti-MALAT1) in MM-Küvetten. Die Gapmer DNA besteht aus antisense-DNA und verbunden durch 2'-OMe-RNAs, die MALAT1 Spaltung durch RNase H-Aktivität nach der Bindung17veranlassen könnte. Die in-vivo Transporteffizienz antisense Oligos begrenzt noch seiner klinischen Verwendung.

Um die Lieferung zu testen SWCNT-Effekt für Anti-MALAT1 Gapmer Oligos, die Anti-MALAT1-Gapmer, die DNA zu DSPE-PEG2000-Amin konjugiert wird funktionalisiert SWCNT. SWCNT-Anti-MALAT1 wird in einem MM disseminierter Mausmodell dann intravenös injiziert; eine markante Hemmung wird nach vier Behandlungen beobachtet.

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Protokoll

Alle Experimente mit Tieren wurden vorab von der Cleveland Clinic IACUC (institutionelle Animal Care und Use Committee) genehmigt.

1. Synthese funktionalisierter SWCNTs

  1. Mischen Sie 1 mg SWCNTs, 5 mg DSPE-PEG2000-Amin und 5 mL sterilisiert Nuklease-freies Wasser in ein Glas funkeln Fläschchen (20 mL). Schütteln Sie es gut auf alle Reagenzien vollständig auflösen.
  2. Beschallen Sie das Fläschchen in einem Wasser-Bad-Sonikator einer Sendeleistung von 40 Watt für 1 h bei Raumtemperatur (RT, 20 min x 3, wechseln Sie das Wasser alle 20 min um eine Überhitzung zu vermeiden). Dann, bei 24.000 X g für 6 h Zentrifugieren Sie und sammeln Sie die überstehende Lösung. Diese funktionale SWCNT Lösung kann für 2 Monate bei 4 ° C aufbewahrt werden.
  3. Hinzugeben Sie 1 mL SWCNT Lösung aus Schritt 1.2 auf einem 100 kDa MWCO zentrifugale Filter Gerät, gefolgt von 4 mL sterilisiert Nuklease-freies Wasser. Zentrifuge für 10 min bei 4.000 X g bei RT, zusätzliche DSPE-PEG2000-Amin zu entfernen. Wiederholen Sie den Zusatz von 4 mL Wasser und der Zentrifugierung 5 X. Mehr als 0,5 mL der übrig gebliebenen SWCNT Lösung verbleibt im Filter nach jedem Zentrifugation.
  4. Messen der Konzentration der SWCNT Lösung übrig gebliebenen im Filter ein UV/VIS-Spektrometer mit 808 nm nach dem letzten waschen. Die letztendliche Konzentration ist in der Regel ca. 50 mg/L (berechnet nach der Methode von Kam Et Al.18entwickelt).
    Hinweis: Sicherstellen Sie, dass DSPE-PEG-funktionalisiert SWCNTs wasserlöslich nach Schritt 1.4 sind und sind in verschiedenen biologischen Lösungen ohne sichtbare Aggregation nach ein paar Wochen stabil.

2. Konjugation von Anti-MALAT1 Gapmer DNA flankiert von 2'-O modifizierte RNAs an funktionalisierten SWCNT

  1. Fügen Sie 0,5 mg Sulfo-LC-SPDP in 450 µL DSPE-PEG2000-Amin SWCNT funktionalisiert. Fügen Sie 50 µL 10 X PBS und dann 2 h bei RT inkubieren
  2. Um zusätzliche Sulfo-LC-SPDP zu entfernen, fügen Sie die Reaktion der Schritt 2.1 auf einem 100 kDa MWCO zentrifugale Filter Gerät, gefolgt von 4 mL Nuklease-freies Wasser. Zentrifugieren Sie 5 X für 10 min bei 4.000 X g bei RT Repeat Zugabe von 4 mL Wasser und der Zentrifugierung.
  3. Fügen Sie 200 nM Thiol-modifizierten Anti-MALAT1-Cy3 Gapmer DNA in 1,5 mL der kommerziellen DVB-t-Lösung und inkubieren Sie 90 min bei RT Purify das Produkt mit einer NAP-5 Spalte, nach der Hersteller-Protokolls. Eluieren Anti-MALAT1-Cy3 mit 500 µL sterilisierte Nuklease-frei 1 x PBS.
    Hinweis: Die funktionalisierten SWCNT speicherbar mit zusätzlichen DVB-t, das Disulfid Anleihen bei der Lagerung von Thiolated Anti-MALAT1 Gapmer DNA gebildet Spalten könnte. Die zusätzlichen DVB-t kann durch aNAP-5 Spalte vor Konjugation mit SWCNT entfernt werden.
  4. Die Sulfo-LC-SPDP-behandelten DSPE-PEG2000-Amin SWCNT Lösung bleibt im Filter sammeln und mit 500 µL Anti-MALAT1-Cy3 Lösung verdünnen. Inkubieren Sie es dann bei 4 ° C für 24 h. 3 Wochen kann die konjugierte SWCNT-Anti-MALAT1 bei 4 ° C aufbewahrt werden. Nach dem gleichen Verfahren kann die konjugierte SWCNT mit Scramble antisense Oligo synthetisiert und als SWCNT-Kontrolle verwendet werden.

(3) Tail Vene Injektion von SWCNT-Anti-MALAT1

  1. Ein MM disseminierter Mausmodell zu generieren.
    1. Um die besten Ergebnisse des Vergleichs zu erreichen, ordnen Sie nach dem Zufallsprinzip 14 NOD. CB17-Prkdcscid/J Mäusen (8 Wochen alt) in Test- oder Kontrolle Gruppen (sieben in jeder Gruppe) mit dem gleichen Verhältnis Männer/Frauen.
    2. Reinigen Sie die Betrieb-Bank und sterilisieren sie mit 70 % Alkohol.
    3. Verwenden Sie eine Wärmelampe, die Maus, um das Heck Vene erscheinen helfen warm. Die Maus richtig mit einer Rute Injektion Restrainer zurückhalten.
    4. 5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry Zellen in 50 µL PBS durch die Rute Vene ohne Betäubung zu injizieren. Drücken Sie die Einstichstelle mit einem Alkoholtupfer für 30 S. Mark der injizierten Maus und schicken Sie es an einem sauberen Käfig.
  2. Beginnen Sie die Behandlung am 7. Tag nach der Injektion MM.1S Zelle.
    1. 50 µL PBS mit SWCNT-Anti-MALAT1 in die Rute Vene der Maus zu injizieren. Verwenden Sie PBS, SWCNT-Steuerelement als Steuerelement enthält.
    2. Drücken Sie die Einstichstelle mit einem Alkoholtupfer für 30 s.
    3. Beachten Sie die lokale Blutung auf das Heck und das allgemeine Verhalten der Maus für 1 min, und dann zu einem sauberen Käfig zurückkehren. Beobachten Sie alle eingespritzten Mäuse wieder vor der Rückkehr des Käfigs in das Rack, um sicherzustellen, dass die Injektionen gut vertragen werden.
  3. Wiederholen Sie die Injektion alle 7 Tage bis zur Beendigung des Experiments.
    1. Das Experiment zu beenden, wenn die allgemeine Gesundheit der Maus verschlechtert: als nicht essen oder trinken, das Erscheinungsbild der blasse Pfoten, eine subkutane Blutung, Kurzatmigkeit, verringerte Aktivität, eine Lähmung der unteren Gliedmaßen und/oder eine berührbare Masse in die Bauch wird beobachtet.

4. Bewertung der Fortschreiten der Erkrankung

  1. Bewerten Sie den allgemeinen Status der Mäuse jeden Tag nach der Injektion MM.1S-Luc-mCherry Zelle. Achten Sie besonders wenn die Mäuse entwickeln lähmt der unteren Extremitäten.
  2. Bewerten Sie das Tumorwachstum mit einer in-vivo imaging-System 1 x in der Woche vor der Injektion SWCNT-Anti-MALAT1.
    1. Bereiten Sie frische 15 mg/mL D-Luciferin mit 1 X PBS.
    2. Die Mäuse mit einer Isofluran-Verdampfer (3 – 5 % für die Induktion und 1 – 3 % für die Wartung, abhängig vom Status der Mäuse) zu betäuben.
    3. 150 mg/kg D-Luciferin in jeder Maus intraperitoneale Injektion, 5 min vor Bildgebung; dann Bild die Mäuse in Bauchlage mit einem Spektrum imaging-System.
    4. Sammeln Sie aufeinander folgenden Bildern der Mäuse alle 2 min bis Lumineszenz Sättigung erreicht ist. Stellen Sie die Intervallzeit entsprechend dem D-Luciferin Aufnahme/Signal.
  3. Verwenden Sie CO2 , die Mäuse zu opfern, die Beendigung des Experiments angelangt ist.
  4. Da es ein MM verbreiteten Modell handelt, verarbeiten Sie die Mäuse wie folgt.
    1. Wiegen Sie die Maus vor der Präparation.
    2. Peripheren Blut aus dem Herzen für ein komplettes Blutbild (CBC)-Assay durchgeführt durch eine Blutzelle Zähler Maschine zu sammeln. Die Anzahl der weißen Blutkörperchen und rote Blutkörperchen sowie das Verhältnis von Lymphozyten, sind die primären Indizes.
    3. Isolieren Sie die Milz zu und wiegen Sie es. Berechnen Sie das Verhältnis der Milz/Körpergewicht; Ansicht > 0,5 % als Erweiterung der Milz.
    4. Das Gewebe von Knochenmark, Lymphknoten, Milz, Nieren und das Gewebe mit sichtbaren Metastasen zu sammeln.
    5. Sammeln Sie die Wirbelsäule, wenn die Maus eine Lähmung der unteren Gliedmaßen entwickelt.
    6. RNA und Proteine aus dem Knochenmarkproben zu extrahieren.
    7. Beheben Sie alle restlichen Gewebe in Formalin.
    8. Tauchen Sie für Entkalkung die Knochenproben in 0,25 M EDTA-Lösung (pH 8,0) für 5 Tage nach 24 Stunden nach der Fixierung.
    9. Tauchen Sie alle Proben in 75 % Alkohol für langfristige Lagerung.
  5. Vergleichen Sie die Signalstärke der Luciferase zu den gleichen Zeitpunkten in zwei Gruppen. Zeichnen Sie aus beiden Gruppen die Opfer-Termine für jede Maus und berechnen Sie Survival-Kurven der beiden Gruppen mit Software zu.
    Hinweis: Alle Verfahren sind in Abbildung 1zusammengefasst.

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Ergebnisse

Um die Wirkung der Hemmung der Anti-MALAT1 Gapmer DNA in MM zu demonstrieren, wir die Expression von MALAT1 abgerissen und in H929 und MM.1S Zellen verwendet. Achtundvierzig Stunden später wurden Zellen für die Analyse der Knock-down Effizienz und der Status der Apoptose in Zellen mit Anti-MALAT1 Gapmer oder Kontrolle DNA transfiziert. qRT-PCR-Ergebnisse zeigten, dass der MALAT1 Ausdruck in H929 und MM.1S Zellen effizient Anti-MALAT1 Gapmer DNA abgerissen (Abb. 2

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Diskussion

Beweis hat gezeigt, dass bei der Regulierung der zahlreiche physiologische und pathophysiologische Prozesse im Krebs, einschließlich MM7,8,9LncRNAs teilnehmen; Sie haben das Potenzial für die Krebsbehandlung, ausgerichtet werden, die von antisense Oligonukleotide20,21,22realisiert werden können. Die US Food and Drug Administration (FDA)...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Die Autoren der Lerner Forschungsinstitut Proteomik, genomische, und bildgebenden Kerne für ihre Hilfe und Unterstützung danken. Finanzierung: Diese Arbeit wurde von NIH/NCI Stipendium R00 CA172292 (J.J.Z.) und Startkapital (zu J.J.Z.) und die klinische und translationale Wissenschaft Collaborative (CTSC) der Case Western Reserve University Core Auslastung Pilot Grant (zu J.J.Z.) finanziell unterstützt. Dabei verwendet der Leica SP8 confocal Mikroskop, das gekauft wurde, mit finanzieller Unterstützung von nationale Institute der Gesundheit SIG Grant 1S10OD019972-01.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
SWCNTsMillipore-Sigma704113
DSPE-PEG2000-AmineAvanti Polar Lipids880128
Bad-UltraschallgerätVWR97043-992
mL ZentrifugalfilterMillipore-SigmaZ740208-8EA
UV/VIS-SpektrometerThermo Fisher ScientificaccuSkan GO UV/Vis Mikrotiterplatten-SpektralphotometerExtinktionskoeffizient von 0,0465 L/mg/cm bei 808 nm
Sulfo-LC-SPDPProteoChemc1118
DTT-LösungMillipore-Sigma43815
NAP-5 SäuleGE Healthcare17-0853-01
In-vivo-BildgebungssystemPerkinElmer
NOD. CB17-Prkdcscid/J MäuseCharles River Labor250
DurchflusszytometerBecton Dickinso
LipofectamineInvitrogen11668019Lipofectamine2000
Fetales Rinderserum (FBS)Invitrogen10437-028
RMPI-1640 MediumInvitrogen11875-093
MALAT1-QF:synthetisiert durch IDT Unternehmen5' - GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'
MALAT1-QR:synthetisiert von IDT Company5' - TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'
GAPDH-QF:synthetisiert von IDT Company5' - CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3'
GAPDH-QR:synthetisiert von IDT Company5' - CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'
Quantitative PCR mit SYBR Green PCR MastermixThermo Fisher ScientificA25780
RevertAid First-Stand cDNA-SynthesekitThermo Fisher ScientificK1621
anti-MALAT1synthetisiert von IDT Company5'-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T
*G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'
Cell Viability Assay KitPromega CorporationG7570CellTiter-GloLumineszierendes Zellviabilitäts-Assay-Kit
accuSkan GO UV/Vis Mikrotiterplatten-SpektralphotometerThermo Fisher Scientific
ZentrifugalfilterMillipore-SigmaUFC910008
SPSS SoftwareIBMVersion 24.0
D-LuciferinMillipore-SigmaNr. L9504
4

Referenzen

  1. Jiang, X., et al. RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis. Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).
  2. Murakami, T., et al. Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy. Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).
  3. Kam, N. W., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality. Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).
  4. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing. Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).
  5. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway. Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).
  6. Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies. Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).
  7. Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer. Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).
  8. Ronchetti, D., et al. Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma. Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).
  9. Wong, K. Y., et al. Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma. Molecular Cancer. 14, 175(2015).
  10. Schmidt, L. H., et al. The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth. Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).
  11. Ji, P., et al. MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer. Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).
  12. Luo, J. H., et al. Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas. Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).
  13. Guffanti, A., et al. A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing. BMC Genomics. 10, 163(2009).
  14. Cho, S. F., et al. MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression. BMC Cancer. 14, 809(2014).
  15. Handa, H., et al. Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma. British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).
  16. Hu, Y., et al. Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma. Leukemia. , (2018).
  17. Lennox, K. A., Behlke, M. A. Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides. Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).
  18. Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).
  19. Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells. Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).
  20. Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).
  21. Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma. Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).
  22. Amodio, N., et al. Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity. Leukemia. , (2018).
  23. Highleyman, L. FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration. BETA. 5, (1998).
  24. Smith, R. J., Hiatt, W. R. Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder. JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).
  25. Aartsma-Rus, A. FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides. Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).
  26. Nelson, S. F., Miceli, M. C. FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy. The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).
  27. Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery. American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).
  28. Ali-Boucetta, H., et al. Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics. Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).
  29. Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes. Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).
  30. Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods. International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).
  31. Padilla-Parra, S., et al. Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).
  32. Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery. Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).
  33. Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages. Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).
  34. Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA. Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).
  35. Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).
  36. Lelimousin, M., Sansom, M. S. Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization. Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).
  37. Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers. J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).
  38. Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells. Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).
  39. Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles. American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).
  40. Ruggiero, A., et al. Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).

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