Hier stellen wir drei verschiedene Experimente zur Aeromonas Infektion in C. Eleganszu studieren. Mit diesen praktischen Methoden, ist es leicht, die Toxizität unter und innerhalb der Aeromonas Arten zu bewerten.
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Methodenartikel
Bewertung von Virulenz und Pathogenese der Aeromonas Infektion in einem Caenorhabditis Elegans -Modell
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Der menschliche Krankheitserreger Aeromonas nachweislich klinisch Gastroenteritis, Wundinfektionen, Sepsis und Infektionen der Harnwege verursachen. Die meisten menschliche Krankheiten gemeldet wurden, vier Arten von Bakterien zugeordnet werden: Aeromonas Dhakensis, Aeromonas Hydrophila, Aeromonas Veroniiund Aeromonas Caviae. Der Modellorganismus Caenorhabditis Elegans ist eine Bacterivore, die eine ausgezeichnete Infektionsmodell durch, um die bakterielle Pathogenese der Aeromonaslernen bietet. Hier stellen wir drei verschiedene Experimente zur Aeromonas Infektion mit C. Elegans -Modell, einschließlich überleben, flüssige Toxizität und Muskel Nekrose Assays zu studieren. Die Ergebnisse der drei Methoden, die Bestimmung der Virulenz der Aeromonas entsprachen. A. Dhakensis zeigte sich der giftigsten unter den 4 wichtigsten Aeromonas Arten klinische Infektionen verursachen werden. Diese Methoden erweisen sich als eine bequeme Möglichkeit zum Bewerten der Toxizität unter und innerhalb der Arten Aeromonas und dazu beitragen, unser Verständnis der Pathogenese der Aeromonas Infektion.
Einleitung
Der menschliche Krankheitserreger Aeromonas, nachweislich klinisch Gastroenteritis, Wundinfektionen, Sepsis und Harnwege Infektionen1,2verursachen. Die meisten menschlichen Erkrankungen gemeldet wurden, vier bakteriellen Spezies zugeordnet werden: Aeromonas Dhakensis, Aeromonas Hydrophila, Aeromonas Veroniiund Aeromonas Caviae 2,3 , 4 , 5. unter den Infektionskrankheiten Aeromonas , Weichgewebe Infektionen können schwerer Morbidi....
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Protokoll
1. Vorbereitung des Kulturmediums
Hinweis: Siehe Tabelle 1 für die Vorbereitung der Lösung.
- Um M9 Medium12vorzubereiten, lösen Sie 1,5 g KH2PO4, 5,66 g Na2HPO4und 2,5 g NaCl in 500 mL entionisiertem Wasser auf. Autoklaven bei 121 ° C für 20 min. warten, bis auf Raumtemperatur abgekühlt und dann hinzufügen 0,5 mL 1 M MgSO4 vor dem ersten Gebrauch.
- Lösen sich um Nematoden Wachstum Medium (NGM)12vorzubereiten, 3 g NaCl, bakterielle Pepton 2,5 g und 20 g Agar in 1 L deionisiertes Wasser. Autoklaven bei 121 ° C für 20 min. w....
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Ergebnisse
Folgen Sie den oben beschriebenen Protokolle, ist es leicht zu unterscheiden, die Toxizitäten von den vier Aeromonas Strapazen. Die überleben-Assay von C. Elegans ist in Abbildung 1dargestellt. Die Überlebensraten von C. Elegans mit Aeromonas Arten, im Auftrag von hoch zu niedrig angezeigt infiziert waren: A. Caviae, A. Veronii, A. Hydrophila und A. Dhakensis. Zwar gibt es Vielfalt in Bezug auf Toxizität u.......
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Diskussion
C. Elegans ist das natürlich eine Bacterivorous Nematode Zufuhr Bakterien als Nahrung und hat eine komplizierte angeborene Immunität gegen Bakterien während seiner evolutionären Prozess entwickelt. Zwei der wichtigsten Organe Erhaltung und Unterstützung der Immunität sind die Epidermis und Darm9,13. Die Epidermis und Bands des Muskels von C. Elegans ähneln die Weichgewebe Strukturen in Säugetieren und beim Menschen6. Aufg.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Wir sind dankbar für die Unterstützung von C. Elegans zentrale Einrichtung in Taiwan und der diagnostischen Mikrobiologie und antimikrobielle Resistenz Labor der National Cheng Kung University Hospital für die Bereitstellung der Aeromonas isoliert. Wir anerkennen auch die Caenorhabditis Genetik Center (CGC) und die WormBase. Wir danken auch Savana Moore für das Manuskript zu bearbeiten.
Diese Studie wurde teilweise unterstützt durch Zuschüsse aus dem Ministerium für Wissenschaft und Technologie von Taiwan (meist 105-2628-B-006-017-MY3) und der National Cheng Kung University Hospital (NCKUH-10705001), p.l. Chen.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Schüttel-Inkubator | YIH DER | LM-570R | Bakterien-Inkubation |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Vorbereitung des Nährmediums |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Vorbereitung des Nährmediums |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Herstellung von Nährmedien |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Vorbereitung des Nährmediums |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Vorbereitung des Nährmediums |
| agar | Difco | 214530 | Zubereitung des Nährmediums |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Vorbereitung des Nährmediums |
| Cholesterin | SIGMA | C8503 | Zubereitung des Kulturmediums |
| ethanol | SIGMA | 32205 | Zubereitung des Nährmediums |
| KOH | SIGMA | P5958 | Vorbereitung des Nährmediums |
| 6 cm Petriplatte | ALPHA PLUS | 46 | Agarplatte Vorbereitung |
| 96-Well-Platte | FALCON | 353072 | Liquid Assay |
| bakterielles Pepton | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Vorbereitung des Kulturmediums |
| Hefeextrakt | SIGMA | 92144 | Zubereitung des Nährmediums |
| Zitronensäure & Bulle; H2O | SIGMA | C1909 | Vorbereitung des Nährmediums |
| Tri-Kaliumcitrat & Bull; H2O | SIGMA | 104956 | Herstellung von Nährmedium |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Vorbereitung des Nährmediums |
| Dinatrium-EDTA | SIGMA | E1644 | Zubereitung des Kulturmediums |
| FeSO4• 7 H2O | SIGMA | 215422 | Vorbereitung des Nährmediums |
| MnCl2• 4 H2O | SIGMA | 221279 | Vorbereitung des Nährmediums |
| ZnSO4• 7 H2O | SIGMA | 204986 | Vorbereitung des Nährmediums |
| CuSO4• 5 H2O | SIGMA | C8027 | Vorbereitung des Nährmediums |
| Trypton | SIGMA | 16922 | Zubereitung des Nährmediums |
| Mikroskopsystem | Nikon | Eclipase Ti invert | Mikroskopische Bildgebung |
| Wissenschaftliche CCD-Kamera | QImbsp; | Retiga-2000R Fast 1394 | Mikroskopische Bildgebung |
Referenzen
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.....
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Nachdrucke und Genehmigungen
