Spermiengewinnung differenzielle Qualität mit Dichte-Gradienten-Zentrifugierung

Summary

In diesem Beitrag wollen wir die Leistung der Dichte-Gradienten-Zentrifugierung-Technik und deren Anwendung in Sperma-Physiologie-Forschung beschreiben.

Abstract

Bei der sexuellen Fortpflanzung eines männlichen Gameten oder Samenzelle verschmilzt mit einer weiblichen Gameten Befruchtung herbeizuführen. Jedoch müssen eine große Anzahl von Spermien mit Düngung Fähigkeit zur Interaktion mit einem weiblichen Gameten zur Befruchtung zu gewährleisten. Als solche ist die befruchtende Fähigkeit der einzelnen Spermien entscheidend für die erfolgreiche Reproduktion. Dichte-Gradienten-Zentrifugierung ist seit mehreren Jahrzehnten als reproduzierbare, schnell, effizient, effektiv und extrem anpassungsfähig Methode, nur qualitativ hochwertige Spermien in assistierten Reproduktionstechnik zu verwendenden sammeln verwendet worden. Die Protokolle, die wir hier beschriebenen konzentrieren sich auf die Nutzung der diskontinuierlichen Percoll Dichte Gradienten Zentrifugation (PDGC) Technik, drei verschiedene Populationen von Hahn Spermien durch ihre Qualität zu isolieren. Wir waren in der Lage, nieder-, Mittel- und qualitativ hochwertige Spermien zu sammeln. Wir beschreiben auch reproduzierbare Protokolle, die bestimmende Fruchtbarkeit Potenzial der Spermien zur Folge haben, durch die Bewertung ihrer Lebensfähigkeit, Mobilität und Durchlässigkeit. Sammlung von Spermien durch ihre Qualität mit PDGC Technik würde nützlich sein, um präzise und gründlich charakterisieren Spermien mit potenziellen differenzielle Fruchtbarkeit.

Introduction

Bei Wirbeltieren männlichen Gameten intensiven Selektionsdruck zu unterziehen; von einem männlichen reproduktiven Fitness ist daher ausschlaggebend für eine erfolgreiche Befruchtung zu erreichen. Männer bestimmten Wirbeltierarten muss Samenzellen in großen Mengen und von ausreichender Qualität zu produzieren, um den Bedürfnissen der Befruchtung. Spermien haben eine Spermien-Kopf und eine Geissel, sind die meisten polarisierten Zellen im Körper. Sie sind auch in der Qualität der Spermien sehr heterogen (Leben und tot, morphologisch normal und abnormal und unbeweglich, niedrigen mobile und hohe mobile), die offenbart sich durch die breite Vielfalt in reproduktive Effizi....

Protocol

Alle hier beschriebene Methoden wurden von den institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) von der University of Georgia genehmigt.

1. Waschen mit traditionellen Zentrifugation

1. Phosphat-Pufferlösung (PBS) vorzubereiten. 8,0 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na₂HPO₄ und 0,24 g KH₂PO₄ bis 800 mL destilliertem Wasser (dH₂O) zugeben. Anpassen des pH-Werts 7,4 mit 0,1 N HCl und bringen die Lösung 1 L mit dH₂O.
2. Motilität Puffer vorzubereiten. Fügen Sie 6,5 g NaCl, 4,5 g Glukose, 0,444 g CaCl₂ und N - Tris-[macht] 11,5 g Methyl-2-amino-Ethanesul....

Results

Die PDGC-Technik führte zu deutliche Trennung der drei Schichten der Spermien durch Maß an Qualität über alle Parameter. Sperma trennt in eine qualitativ hochwertige Schicht unterhalb der höheren Dichte Lösung, ein mittlerer Qualität Schicht zwischen der höheren und niedrigeren Dichte Lösung und eine minderwertige Schicht über der niedrigeren Dichte Lösung. Diese Unterschiede in der Qualität sind deutliche Unterschiede in der Lebensfähigkeit (Abbildung 4), Mo.......

Discussion

Fruchtbarkeit die Rentabilität der tierischen Erzeugung bestimmt nicht nur, sondern dient auch als ein Mittel der natürlichen Selektion Arten für die Existenz. Die ultimative Funktion einer Samenzelle ist um eine Eizelle zu befruchten. Die Eileiter einer Frau wählt nur die fittesten Spermien zur Befruchtung der Eizelle^23,24zu gewährleisten. In-vitro- Untersuchungen ergaben auch eine enge Korrelation zwischen qualitativen Sperma Züge und Befruchtung Erfol.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accudenz	Accurate Chemical and Scientific Corporation, Westbury, NY, USA	AN7050
Percoll	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	P7828
Schiff' s Reagenz	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	3952016
TES	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	T1375
Eosin Y	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	E4009
Nigrosin	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	198285
ST 40R Zentrifuge	Thermo Scientific, Waltham, MA, USA	75004524
DU 530 Life Sciences UV/Vis Spektralphotometer	Beckman Coulter, Brea, CA, USA		Kein Katalog gefunden
Olympus IX 71 Inverses Fluoreszenz- und Phasenkontrastmikroskop	Olympus America Inc., PA, USA		Kein Katalog gefunden