Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.
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Methodenartikel
Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
In dieser Studie wird eine mittlere zerebrale Arterie (MCA) Okklusion Mausmodell eingesetzt, um zerebrale Ischämie-Reperfusion zu studieren. Eine reproduzierbare und zuverlässige Maus-Modell eignet sich zur Untersuchung der Pathophysiologie der zerebralen Ischämie-Reperfusion und mögliche therapeutische Strategien für Patienten mit Schlaganfall zu ermitteln. Variationen in der Anatomie des Kreises von Willis C57BL/6 Mäusen beeinflusst ihr Infarkt-Volumen nach zerebraler Ischämie-induzierte Verletzung. Studien haben gezeigt, dass distale MCA-Verschluss (MCAO) kann dieses Problem überwinden und eine stabile Infarkt-Größe. In dieser Studie stellen wir ein zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-Reperfusion durch die Unterbrechung des Blutflusses zu den richtigen MCA. Wir verbinden die richtige MCA und rechts gemeinsame Halsschlagader (CCA) nach distal und Wiederherstellung der Durchblutung nach einer gewissen Zeit der Ischämie. Diese Ischämie-Reperfusion Verletzungen induziert ein Infarkt stabile Größe und ein Verhaltens Defizit. Peripheren Immunzellen infiltrieren die ischämische Gehirn Infiltration innerhalb von 24 h. Darüber hinaus ist der neuronale Verlust im kortikalen Bereich weniger für eine längere Dauer der Reperfusion. Daher eignet sich dieses zwei-Schiff Okklusion-Modell für die Untersuchung der Immunantwort und neuronale Erholung im Bezugszeitraum nach zerebraler Ischämie Reperfusion.
Einleitung
Der zerebralen Ischämie-Reperfusion-Maus-Modell ist eines der am weitesten verbreitete experimentelle Ansätze zur Untersuchung der Pathophysiologie der Ischämie-induzierte Gehirn Verletzungen1. Da zerebraler Ischämie-Reperfusion der peripheren Immunsystem aktiviert, peripheren Immunzellen in das ischämische Gehirn zu infiltrieren und verursachen neuronale Schäden2. Daher ist eine zuverlässige und reproduzierbare Mausmodell, die zerebrale Ischämie-Reperfusion imitiert erforderlich, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen.
C57BL/6J (B6) Mäuse sind die am häufigsten verwendeten Deh....
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Protokoll
Die institutionelle Pflege der Tiere und Nutzung Ausschüsse der Academia Sinica und Taipei Medical University genehmigt dieses Protokolls für den Einsatz von Versuchstieren.
(1) MCAO/Reperfusion Modell
- Geben Sie die Mäuse mit freiem Zugang zu Wasser und Chow, bis die Operation.
- Autoklaven der chirurgische Werkzeuge und desinfizieren Sie den OP-Tisch und Ausrüstung mit 70 % Ethanol. Tragen Sie einen Mundschutz und sterile Handschuhe. Verwenden Sie ein trockenes Korn-Sterilisator, um chirurgische Instrumente restilisieren, wenn mehrere Maus-Operationen in einem Experiment durchgeführt werden.
- Eine 8 bis 12 Woche ....
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Ergebnisse
Dieses MCAO/Reperfusion Verfahren produziert eine kortikale Infarkt in der Nähe der richtigen MCA und verursacht ein Verhaltens Defizit. Verschiedene Grade der Ischämie-induzierte Infarkt Volumen (Abb. 1AB) und neuronaler Verlust (Abbildung 1D) entstanden in der Hirnrinde des MCA-rechts durch eine Erhöhung der Ligatur Dauer. Dieser MCAO/Reperfusion Verletzungen verringert das Tier lokomotorischen.......
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Diskussion
Die MCAO/Reperfusion-Maus-Modell ist ein Tiermodell häufig eingesetzt, um transiente Ischämie bei Menschen zu imitieren. Dieses Tiermodell kann auf transgenen und Knockout-Mäusen Stämme zu untersuchen, die Pathophysiologie des Schlaganfalls angewendet werden. Besonders kritisch sind mehrere Schritte im Protokoll. (1) die Microdrill muss vorsichtig verwendet werden, wenn Sie ein Loch in den Schädel, mit unangemessene Handlung leicht verursachen Blutungen aus der MCA erstellen. (2) die MCA dürfen nicht beschädigt, und Blut.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch das Ministerium für Wissenschaft und Technologie, Taiwan (am meisten 106-2320-B-038-024, die meisten 105-2221-E-038-007-MY3 und die meisten 104-2320-B-424-001) und Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01) unterstützt. Dieses Manuskript wurde von Wallace wissenschaftliche Bearbeitung bearbeitet.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Knochenrongeur | Diener | Friedman | |
| Buprenorphin | Sigma | B-044 | |
| Cefazolin | Sigma | 1097603 | |
| Chloralhydrat | Sigma | C8383 | |
| Dissektionsmikroskop | Nikon | SMZ-745 | |
| Elektrische Haarschneidemaschine | Petpro | ||
| 10% Formalin | Sigma | F5304 | |
| Germinator Trockenperlensterilisator | Braintree Scientific | ||
| Iriszange | Karl Klappenecker | 10 cm | |
| Irisschere | Diener | 9 cm | |
| Irisschere STR | Karl Klappenecker | 11 cm | |
| Microdrill | Stoelting | FOREEDOM K.1070 | |
| Mikroschere-Vannas | HEISS | H-4240 | Klinge 7mm, 8 cm |
| Maus Gehirn Matrix | World Precision Instruments | ||
| Nicht-invasives Blutdrucksystem | Muromachi | MK-2000ST | |
| Operationsschere STR | Karl Klappenecker | 14 cm | |
| Physiologisches Überwachungssystem | Harvard Apparat | ||
| Rasierer Klingen | Ever-Ready | ||
| Stoelting Nagetierwärmer | Stoelting | 53810 | Heizkissen |
| Nahtclip | Stoelting | ||
| Pinzette | IDEALTEK | No.3 | |
| Vetbond | 3M | 15672 | Chirurgischer Kleber |
| 10-0 Naht | UNIK | NT0410 | |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium Chlorid | Sigma | T8877 |
Referenzen
- Woodruff, T. M., et al. Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke. Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11(2011).
- Chamorro, A., et al. The immunology of acute stroke. Nature Reviews. Neurology.
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Nachdrucke und Genehmigungen
