Cortisol Messung in Koala (Phascolarctos cinereus) Pelz

Zusammenfassung

Wir präsentieren ein Protokoll zur Bestimmung des optimalen Extraktionslösungsmittels zur Messung von Cortisol aus Koalafell. Die in diesem Protokoll verwendeten Lösungsmittel sind Methanol, Ethanol und Isopropanol. Die Bestimmung eines optimalen Extraktionslösungsmittels hilft bei der zuverlässigen Messung von Fellen, um die Auswirkungen chronischer Belastungen auf Koalas zu bestimmen.

Zusammenfassung

Optimale Methoden der Hormonextraktion, die verwendet werden, um Stress bei Tieren über Stichprobenarten hinweg zu messen, sind nicht immer gleich. Australiens ikonische Beuteltierart, der Koala (Phascolarctos cinereus), sieht sich einer längeren Exposition anthropogener Stressoren ausgesetzt und die Bewertung von chronischem Stress in wilden Populationen ist dringend gerechtfertigt. Eine der effektivsten Methoden, um chronischen Stress zu messen, ist durch die Analyse des Glukokortikoidhormons Cortisol in Haar oder Fell, da es physiologische und Verhaltensreaktionen unterstützt. Diese Laborvalidierungsstudie zielt darauf ab, aktuelle Techniken zu testen, um eine optimale Hormonextraktionsmethode zu validieren, die als nicht-invasive Santids-Maßnahme von Cortisol in Koalafellen verwendet werden soll. Es wird anerkannt, dass die Verwendung nicht-invasiver Techniken zur Messung von Stresshormonen aufgrund ihrer idealen praktischen und ethischen Standpunkte gegenüber traditionellen, invasiven Techniken bevorzugt wird. Darüber hinaus ist es vergleichsweise einfacher, Fell von Koalas zu erwerben, als Proben ihres Blutes zu erwerben. Diese Studie verwendete Proben von Koala-Pelz, die vom Adelaide Koala and Wildlife Hospital erworben wurden, um eine Reihe von Hormonextraktionstechniken auszuführen, um eine optimale Cortisolextraktionsmethode zu validieren. Die Ergebnisse zeigten, dass 100% Methanol die optimale Lösungsmittelextraktion im Vergleich zu 100% Ethanol oder 100% Isopropanol auf der Grundlage von Parallelitätsergebnissen lieferte. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass diese Methode der Cortisolextraktion aus Koalafellen einen zuverlässigen nicht-invasiven Assay lieferte, der verwendet werden könnte, um chronischen Stress in Koalas zu untersuchen.

Einleitung

Australische Ökosysteme erhalten das menschliche Leben durch die Bereitstellung von Dienstleistungen einschließlich Nahrung und Ballaststoffen und vielen anderen dynamischen Wechselwirkungen¹. Ironischerweise ist es die menschliche Aktivität, die als haupttreibender Treiber für Dieökosystemstörungen durch den Wandel der biologischen Vielfalt fungiert². Die Fragmentierung von Lebensräumen, bekannt als der Prozess der Aufteilung großer kontinuierlicher Lebensräume in kleine, voneinander isolierte Landflächen, ist die größte anthropogene Veränderung der biologischen Vielfalt, die die australischen Ökosysteme bedroht

Protokoll

Dieses Projekt wurde unter strengen Richtlinien für die Tier- und Humanpflege durchgeführt. Tierethik wurde von der Western Sydney University (A12373) gewährt. Zusätzlich wurden eine Laborrisikobewertung sowie Biosicherheits- und Strahlenform eingereicht und von der Western Sydney University akzeptiert, um diese Forschung sicher durchzuführen (B12366).

HINWEIS: Koala-Pelzproben für dieses Projekt wurden vom Adelaide Koala and Wildlife Hospital am 282 Anzac Highway in Plympton South Australia gewonnen. Pelz wurde von einem Koala genommen, der ins Krankenhaus eingeliefert und wegen ihrer schweren Verletzungen eingeschläfert worden war. Der ve....

Ergebnisse

Der Assay-Nachweis von Hormonmetaboliten von Interesse wird mittels Parallelität bestimmt. Mit Hilfe einer Parallelitätskurve bestimmt der 50%-Bindungspunkt auch den Probenverdünnungsfaktor auf der Standardkurve (Abbildung 1). Wie im Parallelitätsdiagramm (Abbildung 1) dargestellt, lieferten die 100% Ethanol- und 100% Isopropanol-Extrakte keine parallele Verschiebung gegenüber dem Cortisolstandard. Der 100%ige Methanolextrakt sorgte jedoch für eine parallele Verschiebung gegenüber dem Co.......

Diskussion

Es gibt eine Reihe von Studien, die eine Reihe von Techniken verwenden, um Cortisol in Säugetierfell zu erkennen. Diese Studie präsentiert Ergebnisse für den Nachweis von Cortisol in Fellen, die von einem wilden Koala gesammelt wurden, der aktuellem anthropogenen Stress ausgesetzt ist. Diese bahnbrechende Studie verwendete Pelz, um zu testen, welches der drei häufig verwendeten Lösungsmittel am besten Cortisol, ein Maß für chronischen Stress, aus Koalafell extrahiert. Die Ergebnisse zeigten, dass 100% Methanol das empfoh.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Zentrifugenröhrchen	n/a	n/a	1,5 mL
Chromstahlperlen	n/a	n/a	3,2 mm x 3
Cortisol Kit	Arbor Assays	K003-H1W	Hergestellt in Michigan, USA
DetectX Cortisol Enzyme Immunoassay Kit	Arbor Assays	K003-H5	Erstmalige Verwendung für Cortisoltests bei Koala für
Ethanol	n/a	n/a	HPLC-Qualität
Isopropanol	n/a	n/a	HPLC-Qualität
Methanol	n/a	n/a	HPLC-Qualität
Mikropipette	n/a	n/a	/a
Mikropräzisionssieb	n/a	/a	0,5 mm
Mikroplatten-Reader	Bio Radi	n/a	n/a
Mikroplatten-Waschmaschine	Bio Radi	n/a	n/a
Orbitalschüttler	Bio Line	n/a	n/a
Kunststoff-Wiegeschiffchen	n/a	n/	a n/a
Plate Sealer	n/a	n/a	n/a
Präzisionswaage	n/a	n/a	n/a
Vortex-Mischer	Eppendorf	n/a	n/a

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