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Methodenartikel

Ein orthotopisches Endometriumkrebs-Modell mit retroperitonealer Lymphadenopathie made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells

8K Aufrufe

DOI:

10.3791/59340

12. September 2019

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll stellt eine standardisierte Methode zum Wachstum von VX2-Zellen in Kultur dar und zur Erstellung eines orthotopischen VX2-Modells von Endometriumkrebs mit retroperitonealen Lymphknotenmetastasen bei Kaninchen. Orthotopische Endometriumkrebsmodelle sind wichtig für die präklinische Untersuchung neuartiger bildgebender Modalitäten für die Diagnose von Lymphknotenmetastasen.

Zusammenfassung

Endometriumkrebs ist die häufigste gynäkologische Malignität in Nordamerika und die Inzidenz steigt weltweit. Die Behandlung besteht aus einer Operation mit oder ohne adjuvante Therapie in Abhängigkeit von lymphen Knoten Beteiligung, wie durch Lymphadenektomie bestimmt. Lymphadenektomie ist ein morbides Verfahren, das bei vielen Patienten keinen therapeutischen Nutzen hat, und daher ist eine neue Methode zur Diagnose von Lymphknotenmetastasen erforderlich. Um neuartige Bildgebungsmittel zu testen, ist ein zuverlässiges Modell von Endometriumkrebs mit retroperitonealen Lymphknotenmetastasen erforderlich. Das Modell des VX2-Endometriumkarzinoms wurde häufig in der Literatur beschrieben; Hinsichtlich der Methode der Modelleinrichtung bestehen jedoch erhebliche Unterschiede. Darüber hinaus wurden keine Studien über die Verwendung kultivierter VX2-Zellen zur Erstellung dieses Modells berichtet, da bisher nur in vivo propagierte Zellen verwendet wurden. Hierbei stellen wir eine standardisierte chirurgische Methode und postoperative Überwachungsmethode zur Etablierung des VX2-Endometriumkrebsmodells vor und berichten über die erste Verwendung kultivierter VX2-Zellen zur Erstellung dieses Modells.

Einleitung

Endometriumkrebs, oder Krebs der Gebärmutterschleimhaut, ist die zweithäufigste gynäkologische Malignität weltweit und die häufigste Malignität in entwickelten Ländern1. Die Inzidenz von Endometriumkrebs hat stetig zugenommen und ist zwischen 2005 und 2013 um 2,3 % pro Jahr gestiegen, wobei die Sterblichkeit entsprechend um 2,2 % gestiegen ist1,2,3. Die Diagnose von Lymphknotenmetastasen ist von größter Bedeutung, da das Vorhandensein positiver Lymphknoten ein starker negativer Vorhersagegeber für das Überleben4,

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Protokoll

Tiefer Bauchwandverschluss: Identifizieren Sie die Spitze des Peritonealschnitts und greifen Sie das Peritoneum, den Rectusmuskel und die Faszien mit Gewebezangen. Alle Tierstudien wurden in den vom Animal Resource Center (ARC) zugelassenen Einrichtungen des University Health Network und in Übereinstimmung mit zugelassenen Tiernutzungs- und Pflegeprotokollen (AUP #3994/#4299) durchgeführt. Die VX2-Zelllinie wurde aus Dr. Akens Labor am University Health Network gewonnen.

1. Erstellung von In-vitro-VX2-Zelllinie

  1. Ernten Sie den VX2-Tumor von Kaninchen Quadricep Muskel und Wachstum in Mausflanke.
    1. Gefrorene VX2-Tumorblöcke (1 ....

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Ergebnisse

28 Kaninchen wurden für die Erstellung des Endometriumkrebsmodells verwendet. Kaninchen hatten zum Zeitpunkt des Experiments ein Durchschnittsgewicht von 2,83 kg (2,71-3,58 kg). Uterustumoren wuchsen erfolgreich bei 21 Kaninchen für eine Gesamterfolgsrate von 75%. Vor der Aufnahme von Gebärmutternaht in das Protokoll betrug die Erfolgsrate 57% im Vergleich zu 81% nach der Gebärmutternaht. Uterine Nähte wurde dem Protokoll nach dem7. Kaninchen als Reaktion auf die anfängliche ni.......

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Diskussion

Hierin haben wir über eine standardisierte chirurgische Methode zur Etablierung eines VX2-Endometriumkrebsmodells berichtet und über die erste Verwendung kultivierter VX2-Zellen berichtet, um dieses Modell zu erstellen. Die Tumoraufnahmerate von 75% ist niedriger als die 100% Prozent Rate zuvor in der Literatur berichtet35,37,53,56; jedoch ist die Rate der pathologisch bestätigten Lymphknotenme.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Diese Studie wurde vom Terry Fox Research Institute (PPG-1075), dem Canadian Institute of Health Research (Foundation Grant #154326), dem Canadian Cancer Society Research Institute (704718), Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada, Stiftung für Innovation und Prinzessin Margaret Cancer Foundation.

Ich möchte Dr. Marguerite Akens für die Bereitstellung der ersten VX2-Zellen für die Etablierung des ursprünglichen VX2-Modells und der gefrorenen VX2-Tumorblöcke danken. Ich möchte Marco DiGrappa für die Unterstützung bei der Durchführung erster VX2-Zellkulturexperimente und Lili Ding für die Unterstützung bei der VX2-Zellkult....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
11-Klingen-Skalpell, steril,Einweg-Aspen Surgical (VWR)80094-086
22-Gague-OhrvenenkatheterCDMV14332
3-0 resorbierbares Polyfilament-Nahtmaterial (Polysorb)Covidien356718
3-0 geflochtenes resorbierbares Nahtmaterial (Polysorb)Covidien356718
70uM Zellsieb, einzeln verpackt, NylonFalcon352350
Acepromazin (Atravet)CDMV1047
Betadinseife (Poviodon Jod 7,5%)CDMV4363
Betadine Lösung (Poviodon Jod 10%)UHN Stores457955
BuprenorphinMcGill University
CefazolinUHN stationäre ApothekeKeine Katze # Benötigt
ChlorhexidinlösungCDMV119872
Corning BioCoatCellware, Kollagen Typ I, 100mm SchalenCorning354450Marke nicht wichtig
Corning BioCoatCellware, Kollagen Typ I, 24-Well-PlattenCorning354408Marke nicht wichtig
Corning BioCoatCellware, Kollagen Typ I, 6-Well-PlattenCorning354400Marke nicht wichtig
Corning Matrigel Basalmembranmatrix, *LDEV-frei, 10 mLCorning354234
DMEM/HAM F12 1:1Life Technologies11320Marke nicht wichtig
DMSOCaledon Lab Chem1/10/4100
Enrofloxacin (Baytril injizierbar)CDMV11242
Falcon TubeCorning Centri-Star430828
Fötales Rinderserum, qualifiziert, kanadischer Ursprung, 500mlLife Technologies12483020Marke/Quelle nicht wichtig
IsofluranUHN stationäre ApothekeKeine Katze # Benötigt
Isohexol-KontrastGE Healthcare407141210
Meloxicam (Metacam 0,5%)CDMV104674
Normal KochsalzlösungHausmarke (UofT Medstore)1011
PBSMulticell oder Sigma331-010-CL oder D8537-500mL
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin)Corning-CellgroCA45000-652
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenolrot)T.C.M.F (Dr Bristow)28-Jan-11
Chirurgischer Kleber (Gewebekleber)3M Vetbond14695B
Trypsin (0,25%), Proteomics GradeSigmaT-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0,05%, 100mlWisent Inc325-542-ELMarke nicht wichtig

Referenzen

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....

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Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

VX2 Endometriumkarzinomin vivo propagierte ZellenInjektion in das UterushornEtablierung eines chirurgischen ModellsLymphknotenmetastasierungVorbereitung der Zellkulturhistologische Analysesterile chirurgische Technik