Die Sammlung der Häkolymphe und die Inokulation von Metarhizium-Blastospores in Rhipicephalus Microplus Ticks Towards Pathology Studies

Zusammenfassung

Die Analyse der Zeckenhemolymphe stellt eine wichtige Quelle für Informationen darüber dar, wie einige Krankheitserreger verursachen und wie Zecken immunologisch auf diese Infektion reagieren. Die vorliegende Studie zeigt, wie man Pilzpropagiolen impfen und die Hämatymphe von Rhipicephalus microplus verzierten Weibchen sammeln kann.

Zusammenfassung

Zecken sind obligatorische hämatopophagöse Ektoparasiten und Rhipicephalus microplus hat eine große Bedeutung in der Veterinärmedizin, weil es Anämie, Gewichtsverlust, Abwertung des Gelders der Tiere verursacht und auch als Vektor von mehreren Krankheitserregern wirken kann. Aufgrund der exorbitanten Kosten für die Kontrolle dieser Parasiten, der Umweltschäden, die durch den unangemessenen Einsatz chemischer Akarzide verursacht werden, und der erhöhten Resistenz gegen traditionelle Parasitizide, der alternativen Kontrolle von Zecken, durch den Einsatz von Entomopathogene Pilze etwa wurden als interessanter Ansatz angesehen. Dennoch haben nur wenige Studien gezeigt, wie das Immunsystem der Zecke gegen diese Entomopathogene wirkt. Daher zeigt dieses Protokoll zwei Methoden, die zur Entomopathogen-Impfung in engormierte Frauen verwendet werden, und zwei Techniken, die für die Hämatolymphentnahme und die Ernte von Hämozyten verwendet werden. Die Inokulation von Krankheitserregern an der Beineinfügung in den Körper der Zecke ermöglicht die Bewertung von weiblichen biologischen Parametern im Gegensatz zur Impfung zwischen dem Sutum und dem Kapitulum, die häufig das Organ von Gené schädigt. Die Dorsal-Hämatymphe gab eine höhere Erholung als die Sammlung durch die Beine. Einige Einschränkungen der Zeckenhemolymphentnahme und-verarbeitung sind i) hohe Raten der Hämozyten-Störung, ii) Hämatolymphkontamination mit gestörtem Midgut, und iii) niedrige Hämatolymphen-Volumen-Erholung. Wenn die Hämatymphe durch den Beinschnitt gesammelt wird, braucht die Hämatymphe Zeit, um sich an der Beinöffnung zu sammeln, was den Gerinnungsprozess begünstigt. Darüber hinaus werden im Vergleich zur Rückensammlung weniger Hämozyten in der Sammlung durch das Bein gewonnen, obwohl die erste Methode als leichter durchzuführen gilt. Das Verständnis der Immunantwort in Zecken durch entomopathogene Wirkstoffe vermittelt hilft, ihre Pathogenese zu enthüllen und neue Ziele für die Zeckenkontrolle zu entwickeln. Die hier beschriebenen Impfprozesse erfordern sehr geringe technologische Ressourcen und können nicht nur zur Exposition von Zecken für pathogene Mikroorganismen eingesetzt werden. In ähnlicher Weise kann die Sammlung von Zeckenhemolymphe den ersten Schritt für viele physiologische Studien darstellen.

Einleitung

Die Rinderzecke, Rhipicephalus microplus,ist ein Hämatophait-Ektoparasit mit enormen negativen Auswirkungen auf die Tiere in tropischen Gebieten. Diese Zecke ist der Vektor von Krankheitserregern wie Babesiabovis, Babesia bigeminaund Anaplasma marginale , die in Kombination mit den direkten Hämorschäden, die Milch-und Fleischproduktion, Anämie und schließlich den Tod reduzieren können. Die Verluste, die durch diesen Ektoparasiten verursacht^wurden, wurden in Brasilien jährlich auf 3,24 Milliarden Dollar geschätzt. Nachhaltige Methoden werden gefordert und der Einsatz von entomopathogenen Wirkstoffen gilt als v....

Protokoll

Zecken, die in der vorliegenden Studie verwendet wurden, stammen aus einer künstlichen Kolonie, die an der Federal Rural University of Rio de Janeiro betrieben wird und deren Methoden vom Ethikausschuss für die Verwendung von Vertebraten-Tieren genehmigt wurden (CEUA-IV/UFRRJ #037/2014).

1. Zick engmaschte Weibchen

1. Nach der Zeckenauflösung, waschen Sie engreibige Weibchen mit Leitungswasser und tauchen Sie sie in 0,5% (v/v) Natriumhypochlorit-Lösung für 3 min in einem 500 ml Glasbecher-Empfänger, für die Kutikelhygiene (Abbildung 1), dann trocknen Sie alle Weibchen mit sterilen Papierhandtüchern (

Ergebnisse

Dieser Artikel nähert sich der Impfung und Hämatolymphentnahme Methoden, die auf Zecken angewendet. Nach der Impfung zwischen dem BeinthOberschenkel und dem Körper der Zecke kann während des Prozesses etwas Flüssigkeit (Hämatolymphe) ausgeschieden werden; Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass bei Beendigung der Impfung keine Flüssigkeit oder Gewebe in der Nadelspitze oder an der Impfung vorhanden waren, so dass die Pilzfederung vollständig geimpft wurde. Wenn der Impfprozess korrekt dur.......

Diskussion

Die Nachahmung von Krankheitserregern ist nützlich, wenn die Studie darauf abzielt, die In-vivo-Wirkung von Mikroorganismen in experimentellen Arthropodenmodellen zu untersuchen, da sie sicherstellt, dass sich der Erreger im Inneren des Wirts befindet. Die Technik kann auch auf Impfungen wie RNA-Interferenzen (RNAi) angewendet werden. Die Inokulation zwischen dem Skutum und dem Kapitulum wird als leichter zu erbringen angesehen, schädigt aber häufig das Organ von Gené,^wasdie Lebensfähigkeit

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Alkalische Hypochloritlösung	Sigma-Aldrich	A1727
D-(+)-Glukose	Sigma-Aldrich	G8270-1KG
EDTA	Synth	2706
Fötales Rinderserum	Gibco	16000036
Weichkautschuk	BD
Giemsa Fleck	Sigma-Aldrich	48900-500ML-F
Glaskapillare	CTechGlass	CT95-02
Insulinspritze (Nadel)	BD	Artikelnummer:  324910
KH2PO4	Vetec	60REAVET014512
L-15 Kulturmedium von Leibovitz	Gibco	11415-064
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1L-R
Objektträger	Kasvi	K5-7105
Mikroröhrchen	MARKE	Z336769-1PAK
Na2HPO4	Vetec	60REAVET014593
NaCl	Sigma-Aldrich	S7653-1KG
Neubauer Kammer	Kasvi	K5-0111
Penicillin	Gibco	15140163
Proteasehemmer Cocktail	Sigma-Aldrich	P2714
Tween 80	Vetec	60REAVET003662