Cortisol-Extraktion aus Störflossen und Kieferknochenmatrizen

Jalil Ghassemi Nejad; Mohammad Ataallahi; Mohammad H. Salmanzadeh; Kyung T. Park; Hong G. Lee; Alireza Shoae; Atieh Rahimi; Kyung I. Sung; Kyu H. Park

doi:10.3791/59961

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Methodenartikel

Cortisol-Extraktion aus Störflossen und Kieferknochenmatrizen

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DOI:

10.3791/59961

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10. September 2019

Jalil Ghassemi Nejad¹^,² , Mohammad Ataallahi¹ , Mohammad H. Salmanzadeh³ , Kyung T. Park³ , Hong G. Lee²^,⁴ , Alireza Shoae⁵ , Atieh Rahimi⁶ , Kyung I. Sung¹ , Kyu H. Park¹

¹College of Animal Life Sciences, Kangwon National University, ²Team of An Educational Program for Specialists in Global Animal Science, Brain Korea 21 Plus Project, Konkuk University, ³Persian Gesture, ⁴Department of Animal Science and Technology, College of Animal Bioscience and Technology, Konkuk University, ⁵Department of Animal Science, Animal Physiology, AgResearch, ⁶Faculty of Agriculture, Animal Science Department, Ferdowsi University of Mashhad

In diesem Artikel

Zusammenfassung

In dieser Studie stellen wir ein Protokoll zur Cortisolextraktion aus der Flosse und dem Kieferknochen von Störarten vor. Der Fin- und Kieferknochen-Cortisolspiegel wurde weiter untersucht, indem zwei Waschlösungsmittel mit anschließenden ELISA-Assays verglichen wurden. Diese Studie untersuchte die Durchführbarkeit von Kieferknochen-Cortisol als neuartigen Stressindikator.

Zusammenfassung

Ziel dieser Studie war es, eine Technik zur Extraktion von Cortisol aus Störflossen unter Verwendung von zwei Waschlösungsmitteln (Wasser und Isopropanol) zu entwickeln und unterschiede in den Fin-Cortisol-Spiegeln zwischen drei Hauptstörarten zu quantifizieren. Die Flossen wurden von 19 geopferten Stören geerntet, darunter sieben Beluga (Huso huso), sieben Sibirien (Acipenser baerii) und fünf sevruga (A. stellatus). Die Störe wurden in iranischen Farmen für 2 Jahre (2017-2018) aufgezogen, und Cortisol-Extraktionsanalyse wurde in Südkorea durchgeführt (Januar-Februar 2019). Kieferknochen aus fünf H. huso wurden auch zur Cortisolextraktion verwendet. Die Daten wurden mit dem allgemeinen linearen Modellverfahren (GLM) in der SAS-Umgebung analysiert. Die Intra- und Inter-Assay-Variationskoeffizienten betrugen 14,15 bzw. 7,70. Kurz gesagt, die Cortisol-Extraktionstechnik beinhaltete das Waschen der Proben (300 x 10 mg) mit 3 ml Lösungsmittel (Ultrarinduzess und Isopropanol) zweimal, Rotation bei 80 Umdrehungen für 2,5 min, Lufttrocknung der gewaschenen Proben bei Raumtemperatur (22-28 °C) für 7 Tage, weitere Trocknung die Proben mit einem Perlenschlag bei 50 Hz für 32 min und Schleifen sie in Pulver, auftragen 1,5 ml Methanol auf das getrocknete Pulver (75 x 5 mg), und langsame Rotation (40 Rpm) für 18 h bei Raumtemperatur mit kontinuierlichem Mischen. Nach der Extraktion wurden probenweise zentrifugiert (9.500 x g für 10 min), und 1 ml Überstand wurde in ein neues Mikrozentrifugenrohr (1,5 ml) übertragen, bei 38 °C inkubiert, um das Methanol zu verdampfen, und mittels enzymgebundenem Immunsorben-Assay (ELISA) analysiert. . Es wurden keine Unterschiede im Fin-Cortisol-Spiegel zwischen den Arten oder in den Fin- und Kieferknochen-Cortisolspiegeln zwischen Waschlösungsmitteln beobachtet. Die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass die Stör-Kieferknochenmatrix ein vielversprechender alternativer Spannungsindikator für feste Matrizen ist.

Einleitung

Cortisol ist ein zuverlässiger Indikator für tierischen Stress. Cortisol-Extraktion bietet einen gültigen Rahmen für Forscher, um Stressniveaus und allgemeine Muster in Stressoren zu überwachen. Zum Beispiel haben frühere Studien methodische Validierung von Haarcortisol-Messungen mit verschiedenen Methoden beim Menschen^{durchgeführt 1}^,², Affen³^,⁴, Rinder⁵, Schafe⁶, und Goldfisch⁷^,⁸. Bei Fischarten haben Cortisolmessungen in Matrizen wie Schuppen, H....