Murine Cervical Aortic Transplantation Modell mit einer modifizierten Non-Suture Manschettentechnik

Martin Ryll; Julian Bucher; Moritz Drefs; Florian Bösch; K. Kumaraswami; Tobias Schiergens; Hanno Niess; Markus Schoenberg; Sven Jacob; Markus Rentsch; Markus Guba; Jens Werner; Joachim Andrassy; Michael N. Thomas

doi:10.3791/59983

Methodenartikel

Murine Cervical Aortic Transplantation Modell mit einer modifizierten Non-Suture Manschettentechnik

DOI:

10.3791/59983

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2. November 2019

Martin Ryll¹ , Julian Bucher¹ , Moritz Drefs¹ , Florian Bösch¹ , K. Kumaraswami² , Tobias Schiergens¹ , Hanno Niess¹ , Markus Schoenberg¹ , Sven Jacob¹ , Markus Rentsch¹ , Markus Guba¹ , Jens Werner¹ , Joachim Andrassy¹ , Michael N. Thomas¹^,³

¹Department of General, Visceral, and Transplant Surgery, Ludwig Maximilian University of Munich, ²Walter-Brendel-Centre of Experimental Medicine, Ludwig Maximilian University of Munich, ³Department of General, Visceral and Cancer Surgery, University Hospital of Cologne, University of Cologne

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Hier stellen wir ein Protokoll der heterotopischen Aortentransplantation bei Mäusen mit der Nicht-Naht-Manschettentechnik in einem zervikalen Murin-Modell vor. Dieses Modell kann verwendet werden, um die zugrunde liegende Pathologie der chronischen Allograft-Vaskulopathie (CAV) zu untersuchen und kann helfen, neue therapeutische Wirkstoffe zu bewerten, um ihre Bildung zu verhindern.

Zusammenfassung

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Mit der Einführung leistungsfähiger immunsuppressiver Protokolle sind deutliche Fortschritte bei der Prävention und Therapie akuter Abstoßungsepisoden möglich. In den letzten Jahrzehnten konnten jedoch nur geringfügige Verbesserungen der langzeitigen Ergebnisse transplantierter fester Organe beobachtet werden. In diesem Zusammenhang stellt die chronische Allograft-Vaskulopathie (CAV) nach wie vor die Hauptursache für spätes Organversagen bei Herz-, Nieren- und Lungentransplantationen dar.

Bislang bleibt die zugrunde liegende Pathogenese der CAV-Entwicklung unklar, was erklärt, warum derzeit wirksame Behandlungsstrategien fehlen, und betont, dass relevante experimentelle Modelle benötigt werden, um die zugrunde liegende Pathophysiologie zu untersuchen, die zu CAV-Bildung. Das folgende Protokoll beschreibt ein murines heterotopes zervikales Aortentransplantationsmodell mit einer modifizierten Nicht-Naht-Manschettentechnik. Bei dieser Technik wird ein Segment der Thoraxaorta in der rechten gemeinsamen Halsschlagader interpositioniert. Mit der Nicht-Naht-Manschettentechnik kann ein leicht zu erlernendes und reproduzierbares Modell erstellt werden, das die mögliche Heterogenität von nähten vaskulären Mikroanastomosen minimiert.

Einleitung

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In den letzten sechs Jahrzehnten hat sich die solide Organtransplantation von einem experimentellen Verfahren zu einem Standard der Behandlung von Organversagen im Endstadium entwickelt¹. Durch die Verbesserung antimikrobieller Wirkstoffe, operationschirurgische rativer Techniken und fortschritten in immunsuppressiven Regimentern hat die frühe Erfolgsrate der soliden Organtransplantation in den letzten Jahrzehnten deutlich zugenommen².

Die langfristigen Transplantatüberlebensraten haben sich jedoch nicht signifikant verbessert³. Die Entwicklung von CAV ist der Hauptfakt....

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Protokoll

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Alle Experimente wurden nach den Richtlinien des Tierschutzgesetzes (TierSchG) durchgeführt. (AZ: 55.2-1-54-2532.Vet_02-80-2015).

1. Tierhaltung

Für Experimente verwenden Sie männliche C57BL/6- und BALB/c-Mäuse mit einem Gewicht von 20-25 g mit C57BL/6-Mäusen als Empfängertiere und BALB/c-Mäuse als Spendertiere.
Kaufen Sie die Tiere und das Haus in einer barrierefreien Anlage, gemäß den FELASA-Richtlinien für die Gesundheitsüberwachung¹².
Halten Sie die Mäuse in Standard Makrolon Käfige mit Anreicherung Nistmaterial. Bieten Sie ad libitum Zugang zu Wasser und Pellet-Lebensmittel bei eine....

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Ergebnisse

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Im vollständig MHC-Mismatch-Transplantationsmodell ist 4 Wochen nach der Transplantation eine konzentrische neointimale Schicht zu sehen (Abbildung 2). Diese Schicht besteht hauptsächlich aus vaskulären glatten Muskelzellen als immunhistologische Färbung für SM22 (ein selektiver Marker für reife vaskuläre glatte Muskelzellen) offenbart. Wie bereits erwähnt, Diese vaskulären glatten Muskelzellen sind pathognomonisch für Läsionen in chronischer Allograft Vaskulopathie gesehen. Für weitere Anal.......

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Diskussion

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Chronische Allograft Vaskulopathie ist die Hauptursache für späten Transplantatverlust nach solider Organtransplantation des Herzens und wahrscheinlich Nieren- und Lungenallografts⁸. Bisher konnte kein kausales therapeutisches Regime entwickelt werden, um die Bildung von CAV zu verhindern.

Die Pathophysiologie der CAV ist multifaktoriell und beinhaltet immunologische und nicht-immunologische Aspekte¹⁶. Die Verwendung von Nagetiermodellen bei der .......

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Offenlegungen

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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Balb-c Mäuse (H2-d)	Charles River	Stamm# 028	Spendertier
Bipolares Kautersystem	ERBE	ICC 50 / 20195-023	Bipolare Kauter
C57BL/6J (H-2b)	Charles River	Stamm# 027	Empfängertier
Halsey Nadelhalter	FST	12501-12	Nadelhalter
Halsted-Moskito-Zange	AESCULAP	BH111R	Gebogene Klemme
Medizinischer Polyimidschlauch	Nordson MEDICAL	141-0031	Manschettenmaterial
Micro Serrefines	FST	18055-04	Micro Vessel Clip
Micro-Adson-Pinzette (gezahnt)	FST	11018-12	Standard Pinzette
Micro-Serrefine Klemme zum Anwenden von Pinzetten	FST	18057-14	Clipapplicator
S& T Pinzette - SuperGrip Spitzen (abgewinkelt 45°;)	S& T	00649-11	Feine Pinzette
S& T-Gefäß-Dilatationszange - abgewinkelt 10°; (Durchmesser der Spitze 0,2 mm)	S& T	00125-11	Vesseldilatator
Schott VisiLED Set	Schott	MC 1500 / S80-55	Light
Stereoskopisches Mikroskop	ZEISS	SteREO Discovery.V8	Mikroskop
Student Feinschere / OP-Schere - Scharf-Blunt	FST	91460-11 / 14001-12	Standard Schere
Vannas-Tü bingen Federschere (gebogen, 8,5 cm)	FST	15004-08	Mikroskopschere (gebogen)
Vannas-Tü bingen Federschere (gerade, 8,5 cm)	FST	15003-08	Mikroschere (gerade)

Referenzen

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Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. ....

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Murine Aortic Transplantation Non Suture Cuff Technique Heterotopic Cervical Model Chronic Allograft Vasculopathy Vascular Micro Anastomosis Aortic Segment Interposition Heparinized Saline Flush Van Gieson Staining SM22 Immunofluorescence Warm Ischemic Time

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