Ein reversibles Siliziumöl-induziertes Okularhypertonie-Modell bei Mäusen

Zusammenfassung

Hier stellen wir ein Protokoll zur Induzieren von okulärer Hypertonie und glaukomatischer Neurodegeneration in Mausaugen durch intracameralInjektion von Silikonöl und das Verfahren zur Silikonölentfernung aus der vorderen Kammer vor, um erhöhten Augeninnendruck Normalen.

Zusammenfassung

Erhöhter Augeninnendruck (IOP) ist ein gut dokumentierter Risikofaktor für Glaukom. Hier beschreiben wir eine neuartige, effektive Methode zur konsequenten Induktion einer stabilen IOP-Erhöhung bei Mäusen, die die postoperative Komplikation der Verwendung von Silikonöl (SO) als Tamponade-Mittel in der menschlichen Glaskörperchirurgie imitiert. In diesem Protokoll wird SO in die vordere Kammer des Mausauges injiziert, um die Pupille zu blockieren und den Zustrom von wässrigem Humor zu verhindern. Die hintere Kammer akkumuliert wässrigen Humor und dies wiederum erhöht den IOP des hinteren Segments. Eine einzelne SO-Injektion erzeugt eine zuverlässige, ausreichende und stabile IOP-Erhöhung, die eine signifikante glaukomatige Neurodegeneration induziert. Dieses Modell ist eine echte Replik des sekundären Glaukoms in der Augenklinik. Um die klinische Umgebung weiter nachzuahmen, kann SO aus der vorderen Kammer entfernt werden, um den Drainageweg wieder zu öffnen und den Zufluss von wässrigem Humor zu ermöglichen, der durch das trabekuläre Netz (TM) im Winkel der vorderen Kammer entwässert wird. Da IOP schnell wieder normal ist, kann das Modell verwendet werden, um die Wirkung der Senkung des IOP auf glaukomatous retinale Ganglienzellen zu testen. Diese Methode ist einfach, erfordert keine spezielle Ausrüstung oder Wiederholungsverfahren, simuliert klinische Situationen genau und kann auf verschiedene Tierarten anwendbar sein. Es können jedoch geringfügige Änderungen erforderlich sein.

Einleitung

Der fortschreitende Verlust von Netzhautganglienzellen (RGCs) und ihren Axonen ist das Kennzeichen des Glaukoms, einer häufigen neurodegenerativen Erkrankung in der Netzhaut¹. Es wird bis 2040 mehr als 100 Millionen Personen im Alter von 40 bis 80 Jahren betreffen². Der IOP bleibt der einzige veränderbare Risikofaktor bei der Entwicklung und Progression des Glaukoms. Um die Pathogenese, Progression und mögliche Behandlungen von Glaukom zu erforschen, ist ein zuverlässiges, reproduzierbares und induzierbares experimentelles okuläres Hypertonie-/Glaukommodell, das die wichtigsten Merkmale menschlicher Patienten repliziert,....

Protokoll

Alle Verfahren wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der Stanford University genehmigt.

1. Augen-Hypertonie-Induktion durch intracamerale Injektion von SO

1. Bereiten Sie eine Glas-Mikropipette für intracameral SO Injektion durch Ziehen einer Glaskapillare mit einem Pipettenzieher, um eine Mikropipette zu erzeugen. Schneiden Sie eine Öffnung an der Spitze der Mikropipette und schärfen Sie die Spitze mit einer Mikroschleifer-Abschrägungsmaschine weiter, um eine 35°-40°-Abschrägung zu machen.
2. Polieren Sie die Ränder der Abschrägung und entfernen Sie alle Trümmer durch Waschen mit Wasser. Autoclavieren....

Ergebnisse

Bald nach der Injektion können wir leicht Mäuse identifizieren, die keine stabile okuläre Hypertonie erzeugen, weil die SO-Tröpfchen zu klein sind (ca. 1,5 mm)¹³. Diese Tiere sind von späteren Versuchen ausgeschlossen. Nach den Injektionsverfahren erhalten mehr als 80 % der SO-injizierten Mäuse Tröpfchen, die größer als 1,6 mm sind. Wir haben den IOP dieser Mausaugen einmal pro Woche für 8 Wochen nach einer einzigen SO-Injektion gemessen. Der IoD des Auges, das SO erhielt, blieb hoch, im Allgemein.......

Diskussion

Hier zeigen wir ein einfaches, aber effektives Verfahren zur Induktion einer anhaltenden IOP-Erhöhung im Mausauge durch intracameral Injektion von SO. Dieses Verfahren kann schnell von jedem erlernt werden, der Erfahrung mit Mikrodissektion unter dem Mikroskop hat. Das primäre potenzielle Ausfallrisiko ist das Auslaufen von SO aus dem Hornhautschnitt. Einer der Vorteile der Verwendung von SO ist jedoch, dass wir, da das Öltröpfchen sichtbar und messbar ist, Leicht Mäuse identifizieren können, die Tröpfchen zu klein erhie.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
0,5% Proparacainhydrochlorid	Akorn, Somerset
10mL Syinge	BD		Luer-Lok Tip
18G Nadel	BD		mit normaler Abschrägung, Nadellänge:25,4 mm
2,2,2-Tribromethanol (Avertin)	Fisher Scientific	CAS# 75-80-9	50g
32G nano	BD	320122	BD Nano Ultra Fine Pen Nadel-32G 4mm
33G Ophalmologie-Nadel	TSK/ VWR	TSK3313/ 10147-200
5mL Syinge	BD		Luer-Lok Tip
AnaSed Injection (Xylazin)	Butler Schein		100 mg/ml, 50 ml
künstliche Tränen	Alcon Laboratories	300651431414	Systane Ultra Lubricant Eye Drops
BSS PLUS Spüllösung	Alcon Laboratories
Zweistufiger Glas-Mikropipettenabzieher	NARISHIGE	PC-10
EZ-7000 Classic System	EZ System
Isofluran	VetOne	502017	Isofluran, USP, 250ml/Flasche
IV Verabreichungssets	EXELint/ Fisher	29081
KETAMINHYDROCHLORID INJEKTION	VEDCO	50989-996-06	KETAVED 100mg/ml * 10ml
Microgrind-Anfasmaschine	NARISHIGE	EG-401
Miniatur-EVA-Schlauch	McMaster-Carr	1883T4	0,05" ID, 0,09" AD, 10 ft. Länge
Silikonöl (SILIKON)	Alcon Laboratories	8065601185	1.000 mPa.s
Standard-Glaskapillaren	WPI/ Fisher	1B150-4	4 in. (100 mm) OD 1,5 mm ID 0,84 mm
TonoLab Tonometer	Colonial Medical Supply, Finnland
Veterinär-Antibiotika-Salbe	Dechra Veterinary	1223RX	BNP Augensalbe, Vetropolycin

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