Ein Protokoll wird für die In-situ-Perfusion des Unterkörpers der Maus beschrieben, einschließlich der Blase, der Prostata, der Geschlechtsorgane, des Knochens, des Muskels und der Fußhaut.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Etablierung von In Situ Closed Circuit Perfusion von unteren Bauchorganen und Hinterbeinen bei Mäusen
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Ex-vivo-Perfusion ist ein wichtiges physiologisches Werkzeug, um die Funktion isolierter Organe (z. B. Leber, Nieren) zu untersuchen. Gleichzeitig ist die Ex-vivo-Perfusion von Knochen, Blase, Haut, Prostata und Fortpflanzungsorganen aufgrund der geringen Größe der Mausorgane eine Herausforderung oder nicht machbar. Hier berichten wir zum ersten Mal von einem In-situ-Unterkörper-Perfusionskreislauf bei Mäusen, der die oben genannten Gewebe umfasst, aber die wichtigsten Clearance-Organe (Niere, Leber und Milz) umgeht. Der Kreislauf wird durch Konserven der Abdominalaorta und der unteren Vena cava über der Iliasarterie und Vene und kauterisierenden peripheren Blutgefäßen hergestellt. Die Perfusion erfolgt über eine peristaltische Pumpe mit Perfusatenstrom, der bis zu 2 h gehalten wird. Die In-situ-Färbung mit fluoreszierendem Lektin und der Hoechst-Lösung bestätigte, dass die Mikrovaskulatur erfolgreich durchdrungen wurde. Dieses Mausmodell kann ein sehr nützliches Werkzeug für die Untersuchung pathologischer Prozesse sowie Mechanismen der Medikamentenabgabe, Migration/Metastasierung zirkulierender Tumorzellen in/aus dem Tumor und Wechselwirkungen des Immunsystems mit durchsetzten Organen und Geweben sein.
Einleitung
Isolierte Organperfusion wurde ursprünglich entwickelt, um Organphysiologie für Transplantation1,2,3zu studieren und ermöglichte das Verständnis der Funktionen der Organe ohne Störungen durch andere Körpersysteme. Zum Beispiel, isolierte Nieren- und Herzperfusion war immens nützlich für das Verständnis der Grundprinzipien der Hämodynamik und Der Wirkung von vasoaktiven Wirkstoffen, während Leberperfusion war wichtig, um die metabolische Funktion zu verstehen, einschließlich Desarzneimittelstoffwechsel in gesundem und krankem Gewebe4,
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Alle hier beschriebenen Methoden wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der University of Colorado genehmigt.
1. Vorheizen des Perfusionssystems
- Bereiten Sie das Perfusionssystem vor der Operation vor, indem Sie ein 37 °C zirkulierendes Wasserbad für alle wasserummantelten Komponenten (Perfusatenreservoir, feuchte Kammer und Deckel) starten, wie in einer benutzerdefinierten Konfiguration in Abbildung 1Adargestellt. Stellen Sie sicher, dass der Schlauch sauber ist und ersetzen Sie ihn bei Bedarf. Um das Perfusatenvolumen zu begrenzen, verwenden Sie eine Blasenfalle in einer feuc....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Wir richten ein geschlossenes Leitungsperfusionssystem durch Konkavulation der Bauchaorta und der unteren Vena cava von 8-10 Wochen alten Mäusen ein, während das Volumen des Perfusionspuffers weniger als 10 ml bleibt. Abbildung 3A zeigt konfokale Bilder nach dem Durchdringenden von Geweben mit Ringer-Lösung, die Hoechst 33342 und DyLight 649-lectin enthält. Muskel-, Knochenmark-, Hoden-, Blasen-, Prostata- und Fußhaut zeigen eine effiziente Kern- und Gefäßfärbung. Abbild.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Der beschriebene Kreislauf kann verwendet werden, um verschiedene Forschungsfragen zu untersuchen, zum Beispiel die Rolle verschiedener Serumkomponenten und Gewebebarrieren bei der Medikamentenabgabe oder Immun- und Stammzellhandel. Verschiedene Arzneimittelabgabesysteme (z.B. Liposomen und Nanopartikel) können dem Perfusate hinzugefügt werden, um die Rolle physiologischer und biochemischer Faktoren bei der Abgabe zu verstehen. Die Dauer der Perfusion kann variieren, abhängig von dem untersuchten Gewebe, wissenschaftlich.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Danksagungen
Die Studie wurde durch das NIH-Stipendium CA194058 an DS, Skaggs School of Pharmacy ADR Seed Grant Program (DS) unterstützt; National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31771093), das Project of International Collaboration of Jilin Province (No.201180414085GH), die Fundamental Research Funds for the Central Universities, das Program for JLU Science and Technology Innovative Research Team (2017TD-27, 2019TD-36).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| 3,5x-90x Stereo-Zoom-Mikroskop auf Galgenstativ mit LED-Licht | Amscope | SKU: SM-3BZ-80S | |
| Kohlendioxid, USP | Airgas Gesundheitswesen | 19087-5283 | |
| Konfokalmikroskop | NIKON | ECLIPSE Ti2 | |
| Steriler Einweg-Kauterstift mit | Hochtemperatur-FIAB | F7244 | |
| Feuchtkammer-Blasenfalle (Teil 6 in Abbildung 1) | Harvard Apparatus | 733692 | Kundenspezifisch als Perfisatbehälter; ermöglichte auch die Perfusion mit konstantem Druck |
| Feuchte Kammerabdeckung mit Quarzfenster (Teil 3 in Abbildung 1) | Harvard-Gerät | 733524 | Halten der Temperatur der Kammer |
| Feuchte Kammer mit Metallrohr-Wärmetauscher | Harvard Apparatus | 732901 | Wasserummantelte Feuchtkammer mit Deckel zur Aufrechterhaltung der Perfusat- und Maustemperatur |
| Olsen-Hegar-Nadelhalter mit Nahtschneidern | Fine Science Tools (FST) | 125014 | |
| Sauerstoffkomprimiert, USP | Airgas Healthcare | C2649150AE06 | |
| Rollenpumpe (Teil 4 in Abbildung 1) | Harvard-Gerät | 730113 | Abgabe von Perfusat an die Kanüle in der Feuchtkammer |
| SCP plugsys Servosteuerung F/Perfusion (Teil 1 in Abbildung 1) | Harvard Apparat | 732806 | Steuerung der Purfusionsgeschwindigkeit |
| Silikonpad | Harvard Apparatus | ||
| Silikonschlauchsatz (Pfeile in Abbildung 1) | Harvard Apparat (TYGON) | 733456 | |
| Student Standard Pattern Pinzette | Fine Science Tools (FST) | 91100-12 | |
| Chirurgische | SchereFine Science Tools (FST) | 14001-14 | |
| Tisch für Feuchtkammer | Harvard Apparat | 734198 | |
| Thermozirkulator (Teil 2 in Abbildung 1) | Harvard Apparat | 724927 | zirkulierendes Wasserbad für alle wasserummantelten Komponenten |
| Dreiwegehahn (Teil 5 in Abbildung 1) | Cole-Palmer | 30600-02 | |
| Anästhesiegerät für Veterinärmedizin | Highland | HME109< | |
| strong>Materials | |||
| 19-G BD PrecisionGlide Nadel | BD | 305186 | Zum Immobilisieren der Insyte Autoguard Winged Nadel und zum Kratzen des kortikalen Knochens |
| 4-0 Seidennähte | Keebomed-Hopemedical | 427411 | |
| 6-0 Seidennähte | Keebomed-Hopemedical | 427401 | |
| Filter ( 0,2 &Mikro; m) | ThermoFisher | 42225-CA | Filter für 5% BSA-RINGER" S |
| Permanentmarker | Staedtler | 342-9 | |
| Spritze (10 mL) | Fisher Scientific | 14-823-2E | |
| Spritze (60 mL) | BD | 309653 | Filter für 5% BSA-RINGER" S |
| Reagenzien | |||
| 1% Evansblau ( w/v ) in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS, pH 7,5) | Sigma | 314-13-6 | |
| 10% gepuffertes Formalin | velleyvet | 36692 | |
| BALB/c Mäuse ( 8-10 Wochen alt ) | Charles River | ||
| Baxter Viaflex Laktat Ringer's Lösung | EMRN Medical Supplies Inc. | JB2324 | |
| Rinderserumalbumin | Thermo Fisher | 11021-037 | |
| Cyanacrylatkleber | Krazy Kleber | ||
| DyLight-649-lektin | Vector Laboratories, Inc. | ZB1214 | |
| Ethanol (70% (vol/vol)) | Pharmco | 111000190 | |
| Hoechst33342 | Life Technologies | H3570 | |
| Isofluran | Piramal Enterprises Limited | 66794-017-25 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Gibco | 10010023 |
Referenzen
- Ghaidan, H., et al. Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion. Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125(2019).
- Kabagambe, S. K., et al.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
