Blockierung des Lymphflusses durch Suieren von afferenten Lymphgefäßen bei Mäusen

Zusammenfassung

Ein Protokoll zur Blockierung des Lymphflusses durch chirurgische Saat ierung von afferent lymphatischen Gefäßen wird vorgestellt.

Zusammenfassung

Lymphgefäße sind entscheidend für die Aufrechterhaltung des Gleichgewichts der Gewebeflüssigkeit und die Optimierung des Immunschutzes durch den Transport von Antigenen, Zytokinen und Zellen zu entwässernden Lymphknoten (LNs). Unterbrechung des Lymphflusses ist eine wichtige Methode bei der Untersuchung der Funktion von Lymphgefäßen. Die affeken Lymphgefäße vom murinen Fußpolster bis zu den poplitealen Lymphknoten (pLNs) sind als die einzigen Wege für die Lymphdrainage in die pLNs klar definiert. Das Abtinnen dieser affemenden Lymphgefäße kann selektiv den Lymphfluss zu den pLNs verhindern. Diese Methode ermöglicht Störungen des Lymphflusses mit minimalen Schäden an den lymphatischen Endothelzellen in den entwässernden pLN, den affepfen den Lymphgefäßen sowie anderen Lymphgefäßen in der Umgebung. Diese Methode wurde verwendet, um zu untersuchen, wie Lymphe hohe endotheliale Venule (HEV) und Chemokinexpression in der LN beeinflusst und wie Lymphe durch das Fettgewebe fließt, das die LN umgibt, wenn es keine funktionellen Lymphgefäße gibt. Mit der zunehmenden Anerkennung der Bedeutung der lymphatischen Funktion wird diese Methode breitere Anwendungen haben, um die Funktion von Lymphgefäßen bei der Regulierung der LN-Mikroumgebung und der Immunantworten weiter zu entwirren.

Einleitung

Die räumliche Organisation des Lymphsystems bietet strukturelle und funktionelle Unterstützung, um extrazelluläre Flüssigkeit effizient zu entfernen und Antigene und Antigen-präsentierende Zellen (APCs) zu den entwässernden LNs zu transportieren. Die ersten lymphatischen Gefäße (auch Lymphkapillaren genannt) sind aufgrund ihrer diskontinuierlichen interzellulären Verbindungen, die die effektive Sammlung von Flüssigkeiten, Zellen und anderen Materialien aus den umliegenden extrazellulären^Räumen1 erleichtern, sehr durchlässig. Die ersten lymphatischen Gefäße verschmelzen zu sammelnden Lymphgefäßen, die enge interzelluläre Verbindungen, eine konti....

Protokoll

Alle Tierarbeit muss vom Institutionellen und staatlichen Ethik- und Tierschutzausschuss genehmigt werden.  Dies ist eine Nicht-Überlebens-Operation.

1. Herstellung von Materialien

1. Bereiten Sie 100 ml 70% Ethanol vor, indem Sie 70 ml 100% Ethanol mit 30 ml sterilem Wasser mischen. Autoclave alle chirurgischen Werkzeuge vor der Operation und halten Sie die Werkzeuge in 70% Ethanol vor und während der Operation, um die Sterilisation aufrechtzuerhalten.
2. Bereiten Sie ein Injektionsgerät vor.
   1. Schneiden Sie 30 cm Polyethylenschläuche (0,28 mm Durchmesser) ab. Schließen Sie die Spitze einer 30 G x 1/2 Nadel (Nadel A) an....

Ergebnisse

Lymphgefäßnaht wurde in früheren Studien^15,16,17,19verwendet, wo es als wichtiges Werkzeug diente, um die Funktion des Lymphflusses zu untersuchen, bevor die Molekularbiologie der Lymphgefäße besser verstanden wurde. Die Blockierung des Lymphflusses unterbricht die LN-Homöostase, was dazu führt, dass HEVs die kritische Genexpression verlieren, die für eine optimale Lymphozytenhoming an die LN

Diskussion

Die Blockierung des Lymphflusses wird breite Anwendungen bei der Manipulation der Antigenabgabe an die LN unter gesunden und kranken Bedingungen haben. Es ist möglich, diese Methode zu verwenden, um den Zeitpunkt der Antigenabgabe zu kontrollieren, um zu untersuchen, wie der kontinuierliche Lymphfluss die Immunantwort bei entleerenden LNs reguliert. Diese Methode der Lymphflussunterbrechung kann auch verwendet werden, um zu untersuchen, wie Lymphauswirkungen Zellkompartalisation, Zellaktivierung, Zellmigration und Zell-Z.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
0,9 % Natriumchlorid-Kochsalzlösung	Baxter	JB1323<
stark>100 % Ethanol	Greenfield Global		University of Calgary Vertriebsdienstleistungen UN1170.
Enthaarungscreme	Nair		Nair Sensitive Formula Haarentfernungscreme; Ich mit Süßmandelöl und Babyöl, 200-ml. Oder ein ähnliches Produkt.
Evans Blue Farbstoff	Sigma Life Science	E2129-10G	Für 1 ml Evans Blue Farbstoff 0,1 g Evans Blue zu 10 ml PBS hinzufügen. Die Evens Blue Lösung wird durch 0,22 mm Filter filtriert und in 1 ml Aliquoten steril gehalten.
Fluorescein-Isothiocyanat-Isomer I (FITC)	Sigma Life Science	F7250-1G
Pinzette Dumont #3	WPI	500337
Pinzette Dumont #5	WPI	500233
Injektionsgerät			Verbinden Sie ein Ende des Polyethylenschlauchs mit 30G & mal; ½ Nadel. Befestigen Sie eine 1-ml-TB-Spritze an der Nadel. Lösen Sie den Nadelschaft von einem weiteren 30G & mal; ½ Nadel. Stecken Sie das stumpfe Ende des 30G &m; ½ Nadelschaft in das andere Ende des Schlauchs stecken. Der Innendurchmesser dieses Schlauches beträgt 0,28 mm. Somit sind 1,6 cm Flüssigkeit im Schlauch 1 μl.
Insulinspritze	Becton Dickinson and Company (BD)	329461
IRIS Pinzette gerade	WPI	15914
IRIS Schere	WPI	14218-G
Ketamin	Narketan	DIN 02374994	Die Lieferanten von Ketamin und Xylazin stehen in der Regel unter institutioneller und staatlicher Regulierung.
Nadeln (26Gx3/8)	Becton Dickinson and Company (BD)	305110
Nadeln (30Gx1/2)	Becton Dickinson and Company (BD)	305106
Paton Nadelhalter	ROBOZ	RS6403	gerade, ohne Lock; Gezackte
phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Sigma Life Science	P4417-100TAB
Polyethylen-Schlauch	Becton Dickinson and Company (BD)	427401
Chirurgisches Klebeband (1,25 cm x 9,1 m )	Transpore	1527-0
Chirurgisches Klebeband (2,5 cm x 9,1 m )	Transpore	1527-1
Naht	Davis and Geck CYANAMID Canada	11/04	0,7 metrische monofile Polypropylen
Spritze (1ml)	Becton Dickinson and Company (BD)309659
VANNAS Schere	World Precision Instruments (WPI)	14122-G
Xylazine	Rompun	DIN02169606	Die Lieferanten von Ketamin und Xylazin unterliegen in der Regel institutionellen und staatlichen Vorschriften.
Ausrüstung
Präpariermikroskop	Olympus		Olympus S261 (522-STS OH141791) mit Lichtquelle: Olympus Highlight 3100
Konfokalmikroskop	Leica		SP8