Vorhersage der Amputation mit lokal zirkulierenden mononukleären Progenitorzellen bei angioplasty-behandelten Patienten mit kritischer LimbIschemia

Summary

Eine Amputation der unteren Gliedmaßen kann auch nach angioplastischer verstopfter Gefäße in Critical Limb Ischemia (CLI) auftreten. Mononukleare Progenitorzellen (MPCs) reflektieren die Gefäßreparatur. Das vorliegende Protokoll beschreibt die Quantifizierung von MFC aus der Zirkulation in der Nähe der Angioplastie und ihre Beziehung zur endotheliaalen Dysfunktion und Vorhersage der Amputation der unteren Gliedmaßen.

Abstract

Kritische Gliedmaßenischämie (CLI) stellt ein fortgeschrittenes Stadium der peripheren arteriellen Erkrankung dar. Angioplastie verbessert den Blutfluss in die untere Extremität; einige Patienten kommen jedoch unwiderruflich zur Gliedmaßenamputation über. Das Ausmaß der Gefäßschäden und die Mechanismen der Gefäßreparatur sind Faktoren, die das Ergebnis der Postangioplastie beeinflussen. Mononukleare Progenitorzellen (MPCs) sind reaktiv auf Gefäßschäden und -reparaturen, mit der Fähigkeit, Gefäßerkrankungen zu reflektieren. Das vorliegende Protokoll beschreibt die Quantifizierung von MPCs, die aus der Blutzirkulation aus dem Gefäß in der Nähe der Angioplastie-Stelle gewonnen werden, sowie seine Beziehung zur endotheliale Dysfunktion und seine prädiktive Fähigkeit zur Gliedmaßenamputation in den nächsten 30 Tagen nach der Angioplastie bei Patienten mit CLI.

Introduction

Periphere arterielle Erkrankung (PAD) ist durch eine chronische und progressive gefäßverstopfung mit Einschränkung der Blutversorgung^{gekennzeichnet 1}. Auf globaler Ebene betrifft PAD der unteren Gliedmaßen etwa 10% der älteren Bevölkerung, während bis zu 7% solcher Fälle der Gliedmaßenamputation unterzogen werden^2,3.

Critical Limb Ischemia (CLI) stellt die seriöseste Präsentation von PAD¹dar. Patienten erleben in der Regel Schmerzen in Ruhe, Geschwüre, oder Gangrän, die auf verstopfte Arterien zurückzuführen sind; während die klinische....

Protocol

Die Ethikkommission für institutionelle Forschung des Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE genehmigte dieses prospektive Protokoll, alle eingeschriebenen Patienten erteilten schriftliche Einwilligung in Kenntnis der Sachlage.

1. Bewertung des Gefäßblocks der unteren Extremität, Blutentnahme und Ballonangioplastie

HINWEIS: Die für dieses Experiment verwendete Studienstichprobe, die aus 20 Diabetikern im Alter von 68 Jahren und 10 von 20 Personen bestand, waren männlich. Die Hälfte der Stichprobe waren Raucher und die häufigsten Komorbiditäten waren Typ-2-Diabetes mellitus, systemische arterielle Hypertoni....

Results

Blutproben aus blockierten Arterien, an der für Angioplastie adressierten Stelle, wurden von 20 Diabetikern im Alter von 68 Jahren und 10 von 20 Männern entnommen. Die Hälfte der Stichprobenpopulation waren Raucher. Vaskuläre Läsionen wurden hauptsächlich als Rutherford Klasse VI bewertet; in der Erwägung, dass Patienten eine höhere Prävalenz von Typ-2-Diabetes Mellitus (100%), Bluthochdruck (70%) Dyslipidämie (55%).

Eine 30-tägige klinische Nachbeobachtung nach der Angioplastie der unteren Gl.......

Discussion

Die Blutentnahme an der genauen Stelle des Gefäßblocks kann technische Schwierigkeiten aufzeigen; Daher führten wir die Blutentnahme in der Nähe des Gefäßblocks durch. Ebenso scheint die Menge der MPCs in der Nähe der Gefäßplaque hochdynamisch zu sein und kann Variationen vor und nach der Angioplastie hervorlassen. Nach unseren Beobachtungen wird empfohlen, grundlegende und 30min-post-angioplastische Veränderungen in der Anzahl der MPCs zu bewerten, da sie mehrere pathophysiologische Prozesse widerspiegeln können, die in.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	Rinderserumalbumin (BSA) als Puffermittel, Stabilisator, Standard und zum Mischen.
Kalibrierperlen	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	MACQuant Kalibrierperlen werden in einer wässrigen Lösung geliefert, die 0,05 % Natriumazid enthält. 3,5 ml für bis zu 100 Tests
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Antikörper konjugiert an R-Phycoerythrin in PBS/EDTA-Puffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoklonaler, isotyprekombinanter humaner IgG1, konjugierter
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Antikörper, konjugiert an R-Phycoerythrin in PBS/EDTA-Puffer
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	Der monoklonale Antikörperklon AC136 weist ein Klasse-III-Epitop des CD34
CD45-VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	aufMonoklonaler CD45 Antikörper, humane konjugierte
konische Röhrchen	Thermo SCIENTIFIC	#339651	15ml konische Zentrifugenröhrchen
Zytometrieröhrchen	FALCON Corning Brand	#352052	5 mL Polystyrol Röhrchen mit rundem Boden. 12x75 Stil. Keimfrei.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Schwermetalle, (als Pb) < 10ppm, Fe< 0.01%, As< 1ppm, unlöslich< 0,005%
Verbessert Neubauer	Ohne Marke	Ohne Katalognummer	Hämozytometer für die Zellzählung. (Bereich 0,1000 mm, 0,0025 mm2)
K2 EDTA Blutentnahmeröhrchen	BD Vacutainer	#367863	Fliederfarbenes Vacutainer-Röhrchen aus Kunststoff (K2E) 10,8 mg, 6 ml.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Steril und auf das Vorhandensein von Endotoxinen geprüft. Dichte: 1.077± 0,001 g/ml
Paraformaldehyd	SIGMA-ALDRICH		Fixierung biologischer Proben, (Pulver, 95%)
Pipettentransfer 1,3 mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	Die Transferpipette ist ein Werkzeug, das den Flüssigkeitstransfer mit größerer Genauigkeit erleichtert.
Reagenzgläser	KIMBLE CHASE	45060 13100	Hitzebeständige Reagenzgläser. GRÖSSE/KAPPE 13 x 100 mm