Dieses Papier bietet drei einfache und zugängliche Assays zur Beurteilung des Fettstoffwechsels bei Mäusen.
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Methodenartikel
Beurteilung der Ganzkörper-Lipid-Handling-Kapazität bei Mäusen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Beurteilung des Fettstoffwechsels ist ein Eckpfeiler der Bewertung der Stoffwechselfunktion und wird als wesentlich für In-vivo-Stoffwechselstudien angesehen. Lipide sind eine Klasse von vielen verschiedenen Molekülen mit vielen Wegen, die an ihrer Synthese und ihrem Stoffwechsel beteiligt sind. Ein Ausgangspunkt für die Bewertung der Lipidmesmostase für die Ernährungs- und Adipositasforschung ist erforderlich. Dieses Papier beschreibt drei einfache und zugängliche Methoden, die wenig Fachwissen oder Übung erfordern und die von den meisten Labors angepasst werden können, um nach Fettstoffwechselanomalien bei Mäusen zu suchen. Diese Methoden sind (1) die Messung mehrerer Nüchternserumlipidmoleküle mit kommerziellen Kits, (2) die Bestimmung der diätetischen Lipidhandhabungsfähigkeit durch einen oralen Intralipidtoleranztest und (3) die Bewertung der Reaktion auf eine pharmazeutische Verbindung, CL 316.243, bei Mäusen. Zusammen werden diese Methoden einen Überblick über die Lipidhandhabungsfähigkeit bei Mäusen bieten.
Einleitung
Kohlenhydrate und Lipide sind zwei Hauptsubstrate für den Energiestoffwechsel. Der aberrante Fettstoffwechsel führt zu vielen menschlichen Krankheiten, einschließlich Typ-II-Diabetes, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Fettlebererkrankungen und Krebs. Diätetische Lipide, hauptsächlich Triglyceride, werden durch den Darm in das Lymphsystem aufgenommen und gelangen in Chylomikronen in der Nähe des Herzens in den venösen Kreislauf1. Lipide werden durch Lipoproteinpartikel im Blutkreislauf transportiert, wo die Fettsäuren durch die Wirkung der Lipoproteinlipase an peripheren Organen wie Muskel- und Fettgewebe freigesetzt werden2. ....
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Protokoll
Die Tiere werden unter standardisierten Bedingungen nach Tierpflege- und Versuchsprotokollen untergebracht, die vom Institutional Animal Care and Use Committee des Baylor College of Medicine (BCM) genehmigt wurden. Die Tiere werden mit einer Standard- oder Spezialdiät gefüttert, Wasser ad libitum und mit einem 12-Stunden-Tag-Nacht-Zyklus gehalten.
1. Messung von Nüchternserumlipiden
- Übertragen Sie mäuse nach 17 Uhr in einen neuen Käfig und schnell mit freiem Zugang zu Wasser, über Nacht (mit etwa 16 Stunden Fasten vor dem Experiment). Das Fasten über Nacht sorgt für eine vollständige Entleerung des Magen-Darm-Traktes der Mäuse.
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Ergebnisse
Wir zeigen mit drei Ausschnitten, dass jeder Assay wertvolle Informationen über den Fettstoffwechsel der Mäuse bietet. Bei männlichen C57BL/6J-Mäusen, die durch acht Wochen fettreiche Ernährung (HFD) ab einem Alter von acht Wochen herausgefordert wurden, war der Gesamtcholesterinspiegel signifikant erhöht, während Serumtriglyycerid und NEFA nicht waren (Tabelle 1), was darauf hindeutet, dass Triglycerid und NEFA im Blut nicht überwiegend durch eine diätetische Fettherausforderung reguliert werden. In der.......
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Diskussion
Die drei beschriebenen Assays funktionieren robust im Labor, mit einigen kritischen Überlegungen. Das Fasten über Nacht ist für die Bestimmung des Nüchternserumlipidspiegels und des oralen Intralipidtoleranztests erforderlich. Für den oralen Intralipidtoleranztest ist es wichtig, das Blut bei Raumtemperatur zu drehen, um die Bildung einer Fettschicht zu minimieren, insbesondere an den 1- und 2-Stunden-Zeitpunkten; Es ist wichtig, diese Fettschicht nicht zu verwerfen, wenn sie sich bildet. Stellen Sie sicher, dass Sie den.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts preiszugeben.
Danksagungen
Diese Arbeit wird unterstützt von den National Institutes of Health (NIH), Grant R00-DK114498, und dem United States Department of Agriculture (USDA), Grant CRIS: 3092-51000-062 an Y. Z.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD Sterile Spritzen mit Gleitspitze 1 ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 Hydrat | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| Gebogene Zuführnadeln (18 Gauge) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| Reagenz mit freiem Glycerin | Sigma Aldrich | F6428 | |
| Glycerin-Standardlösung | Sigma | G7793 | |
| HR SERIE NEFA-HR(2)FARBREAGENZ A | Fujifilm Wako Diagnostics | 999-34691 | |
| HR SERIE NEFA-HR(2)FARBREAGENZ B | Fujifilm Wako Diagnostics | 991-34891 | |
| HR SERIE NEFA-HR(2)LÖSUNGSMITTEL A | Fujifilm Wako Diagnostics | 995-34791 | |
| HR SERIE NEFA-HR(2)LÖSUNGSMITTEL B | Fujifilm Wako Diagnostics | 993-35191 | |
| Matrix Plus Chemistry Reference Kit | Verichem | 9500 | |
| Mikrozentrifugenröhrchen | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| Mikrohämatrothrit Kapillarröhrchen, nicht heparanisiert | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| NEFA STANDARDLÖSUNG | Fujifilm Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Thermo Scientific Triglyceride Reagenz | Fisher | Scientific TR22421 | |
| Gesamtcholesterin-Reagenzien | Thermo Scientifi | TR13421 |
Referenzen
- Dixon, J. B. Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).
- Nuno, J., de Oya, M. Lipoprotein lipase: review. Revista Clínica Española. 170 (3-4), 83-87 (1983).
- Williams, K. J.
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Nachdrucke und Genehmigungen
