Überlegungen zur Sammlung, Verarbeitung und Lagerung für die Biomarkerforschung im Urin

Summary

Dieses Protokoll zielt darauf ab, Überlegungen zur Entnahme, Verarbeitung und Lagerung von Urinproben für Biomarker-Studien zu Biomarker-Studien zu Harnwegsinfektionen zu liefern.

Abstract

Es gibt mehrere Harnwegsproteine, die sich als vielversprechende Marker für Harnwegsinfektionen erweisen. Die Identifizierung eines neuartigen Biomarkers, der im Vergleich zu aktuellen diagnostischen Methoden eine höhere Vorhersagegenauigkeit aufweist, hat das Potenzial, die Fähigkeit zur Behandlung von Patienten mit Harnwegsinfektionen erheblich zu verbessern. Die Entnahme, Verarbeitung und Lagerung von Proben kann sich jedoch möglicherweise auf die Ergebnisse der Biomarkerforschung auswirken. Das Verständnis der Auswirkungen jeder dieser Phasen auf Biomarker-Studien ist notwendig, um zukünftige, qualitativ hochwertige Forschung in diesem Bereich zu informieren und andere Studien in diesem Bereich kritisch zu überprüfen. Hier gibt die Studie einen Überblick über die Literatur zu den Auswirkungen der einzelnen Phasen der Urinprobenverarbeitung und berichtet über die Auswirkungen verschiedener Erkrankungen auf Harnproteine. Das Protokoll konzentriert sich auf die Entnahmetechniken, die Zeit und Temperatur der Lagerung, die Verarbeitungstechniken, die Verwendung von Reagenzien und das langfristige Einfrieren der Biomarkerstabilität. Der Schwerpunkt liegt auf Proteinen, aber auch auf andere Materialien, die in der Biomarkerforschung eingesetzt werden können. Auf diese Weise wird dieses Protokoll zukünftigen Forschern einen Leitfaden an die Hand geben, um bei der Gestaltung von Studien zu Biomarkern im Urin zu helfen.

Introduction

Harnwegsinfektionen (HWI) sind eine der häufigsten bakteriellen Infektionen bei Kindern und Erwachsenen¹. Während die Diagnose einer Harnwegsinfektion in einigen Populationen unkompliziert sein kann, kann sie in anderen, wie z. B. bei Menschen mit neuropathischer Blase², komplexer sein. Die Fähigkeit, Harnwegsinfektionen genau zu diagnostizieren, wird dazu beitragen, die Bemühungen um den Umgang mit Antibiotika zu verbessern, indem der Einsatz unnötiger Antibiotika verringert wird, und möglicherweise die frühere Diagnose von Harnwegsinfektionen unterstützen, wodurch das Morbiditätsrisiko....

Protocol

Dieses Protokoll folgt den Richtlinien der Ethikkommission der Humanforschung der Institution. Stellen Sie sicher, dass die Genehmigung des Institutional Review Board (IRB) eingeholt wird, bevor biologische Proben für die Forschung entnommen und verwendet werden.

1. Sammlung

1. Entnehmen Sie die Urinprobe in einem sterilen Probenbecher. Entscheiden Sie über die Art der Urinprobe sowie über spezifische Ein- und Ausschlusskriterien auf der Grundlage des spezifischen Studiendesigns. Verwenden Sie für Harnwegsinfektionsuntersuchungen entweder die Clean-Catch-Methode oder eine Katheterisierung, um eine ....

Results

Die Zentrifugation hatte einen geringen Einfluss auf die NGAL-Werte. Zentrifugierte Proben, die bei -80 °C gelagert wurden, wiesen niedrigere NGAL-Werte auf als nicht zentrifugierte Proben (2,17 ng/mL ± 0,32 ng/ml, 2,77 ng/mL ± 0,21 ng/ml). Gefrierzyklen wirkten sich auch auf die NGAL-Werte nach dem dritten Frost-Tau-Zyklus aus. (Abbildung 2). Von den untersuchten Bedingungen (Zentrifugation, Frost-Tau-Zyklen und Lagertemperatur) hatte die Lagertemperatur den größten Einfluss auf die NGAL-We.......

Discussion

Die Bedeutung konsistenter und reproduzierbarer Ergebnisse beschränkt sich nicht nur auf den Erfolg einzelner Studien, sondern ermöglicht auch einen besseren Vergleich der Ergebnisse innerhalb der Literatur⁹. Unterschiede zwischen den Studien in wichtigen Verfahrensschritten können zu irreversiblen Verzerrungen führen, die sich auf die Biomarkersignale und ihre Interpretation auswirken können, was für Diskrepanzen zwischen mehreren Studien verantwortlich sein kann.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Borsäure	Sigma-Aldrich	B6768	Zu berücksichtigen für Proben, die nicht schnell verarbeitet und eingefroren werden können
Gefrierboxen	Fisher Scientific	03-395-464
Mikrozentrifugenröhrchen	Thomas scientific	1149X93
NGAL ELISA Kit	R& D Systems	DLCN20	Wird verwendet, um repräsentative Ergebnisse
zu erzielen Pipette und Spitzen	Abhängig von der Pipettengröße und dem Flüssigkeitsvolumen.
Natriumazid	Sigma-Aldrich	S2002	In Betracht zu ziehen für Proben, die nicht schnell verarbeitet und eingefroren werden können
Urinauffangbecher	Thermo Scientific	3122B03ORG	Sterile Becher sind nicht erforderlich, es sei denn, sie werden für andere Studien benötigt