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Myokardinfarkt (MI) ist weltweit eine schwere Erkrankung. Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVDs) sind weltweit die häufigste Todesursache und für rund 18,6 Millionen Todesfälle im Jahr 20191 verantwortlich,2. Die Gesamtmortalität von CVDs ist im letzten halben Jahrhundert zurückgegangen. Dieser Trend wurde jedoch in einigen unterentwickelten Ländern verlangsamt oder sogar umgekehrt1, was eine wirksamere Behandlung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen erfordert. Als eine der tödlichen Manifestationen von CVD macht MI etwa die Hälfte aller Todesfälle aus, die auf CVDs in den Vereinigten Staaten zurückzuführen sind2. Während der Ischämie, mit der Blockierung der Koronararterien und der begrenzten Versorgung mit Nährstoffen und Sauerstoff, erleidet das Myokard schwere metabolische Veränderungen, beeinträchtigt die systolische Funktion von Kardiomyozyten (CMs) und führt zum CM-Tod3. Zahlreiche Ansätze in der Herz-Kreislauf-Forschung wurden erforscht, um Herzverletzungen zu reparieren und die Funktion des verletzten Herzens wiederherzustellen4. Die direkte kardiale Reprogrammierung hat sich als eine vielversprechende Strategie zur Reparatur des geschädigten Herzens und zur Wiederherstellung seiner Funktion herausgestellt5,6. Durch die Einführung von Mef2c, Gata4, Tbx5 (MGT) können Fibroblasten in vitro und in vivo auf iCMs umprogrammiert werden, und diese iCMs können den Narbenbereich reduzieren und die Herzfunktion verbessern7,8.
Obwohl die kardiale Reprogrammierung eine vielversprechende Strategie für die MI-Behandlung ist, gibt es noch eine Reihe von Herausforderungen. Erstens sind die Reprogrammierungseffizienz, Reinheit und Qualität nicht immer so hoch wie erwartet. Die MGT-Aufforderung kann nur 8,4% (cTnT+) oder 24,7% (αMHC-GFP+) der gesamten CFs erreichen, die in vitro7 auf iCMs umprogrammiert werden sollen7, oder bis zu 35% in vivo8, was ihre Anwendung einschränkt. Selbst mit mehr im System induzierten Faktoren wie Hand29 oder Akt1/PKB10 ist die Reprogrammierungseffizienz immer noch kaum zufriedenstellend, um in einem klinischen Umfeld eingesetzt zu werden. Daher sind in diesem Bereich weitere Studien erforderlich, die sich auf die Verbesserung der Reprogrammierungseffizienz konzentrieren. Zweitens sind die elektrische Integrität und die Kontraktionseigenschaften von iCMs wichtig für die effiziente Verbesserung der Herzfunktion, aber diese sind schwierig zu bewerten. Derzeit konzentrieren sich weit verbreitete Bewertungsmethoden auf diesem Gebiet, einschließlich Durchflusszytometrie, Immunzytochemie und qPCR der Expression einiger wichtiger CMs-Gene, alle auf die Ähnlichkeit von iCMs und CMs, aber nicht direkt mit den funktionellen Eigenschaften von iCMs. Darüber hinaus haben diese Methoden relativ komplizierte Verfahren und sind zeitaufwendig. Während Reprogrammierungsstudien in der Regel ein Screening potenzieller Reprogrammierungsfaktoren beinhalten, die die Reifung von iCMs fördern11, erfordert die kardiale Reprogrammierung eine schnelle und bequeme Methode, die auf der iCMs-Funktion basiert.
CMs öffnen die spannungsgesteuerten Calciumionenkanäle auf der Zytomembran während jedes Kontraktionszyklus, was zu einem vorübergehenden Zustrom von Calciumionen (Ca2+) aus der interzellulären Flüssigkeit in das Zytoplasma führt, um an der Myofilamentkontraktion teilzunehmen. Ein solcher Ca2+-Ein- und Abflusszyklus ist das grundlegende Merkmal der Myokardkontraktion und bildet die normale Funktion von CMs12. Daher könnte eine Methode, die den Ca2+-Zustrom erkennt, eine mögliche Möglichkeit sein, die Funktion von CMs und CM-ähnlichen Zellen, einschließlich iCMs, zu messen. Darüber hinaus bietet eine solche Methode für iCMs eine weitere Möglichkeit, die Reprogrammierungseffizienz zu bewerten.
Genetisch kodierte Kalziumindikatoren (GECIs) wurden entwickelt und weit verbreitet verwendet, um Zellaktivitäten, insbesondere Aktionspotenziale, anzuzeigen. Im Allgemeinen bestehen GECIs aus einer Ca2 +- Bindungsdomäne wie Calmodulin und einer Fluoreszenzdomäne wie GFP, und GCaMP3 ist eine mit hoher Affinität und Fluoreszenzintensität. Die Fluoreszenzdomäne von GCaMP3 wird aktiviert, wenn die lokale Calciumkonzentration geändert wird13. In diesem Artikel wird ein Mausstamm beschrieben, der speziell einen GCaMP3-Reporter in Myh6+-Zellen exprimiert. Durch die Einführung von MGT in die isolierten NCFs von Neugeborenen dieses Stammes kann die Reprogrammierung durch Fluoreszenz überwacht werden, die erfolgreich reprogrammierte iCMs aufweisen werden. Ein solcher Mausstamm und eine solche Methode wird eine wertvolle Plattform bieten, um die kardiale Reprogrammierung zu untersuchen.