Methodenartikel

Entwicklung eines Lateral Flow Immunochromatographic Strip für den schnellen und quantitativen Nachweis niedermolekularer Verbindungen

DOI:

10.3791/62754

13. November 2021

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Membranbasierte Lateral-Flow-Immunchromatographiestreifen (ICSs) sind nützliche Werkzeuge für die kostengünstige Selbstdiagnose und wurden effizient auf die Erkennung von Toxinen, physiologischen Indizes und klinischen Biomarkern angewendet. In diesem Protokoll beschreiben wir detailliert die Schritte zur Entwicklung eines schnellen, empfindlichen und quantitativen Lateral-Flow-Immunoassays (mit AuNPs als Marker und mAbs als Sonde). Das Verfahren beschreibt die Herstellung und Charakterisierung von kolloidalem Gold, die Synthese des AuNP-mAb-Konjugats, den Aufbau des immunchromatographischen Streifens und die methodische Untersuchung des Assays. Die Ergebnisse zeigten, dass die endgültigen Streifen weiter für die schnelle und bequeme Selbstdiagnose eines kleinen Moleküls verwendet werden können, was ein alternatives Werkzeug bei der schnellen und präzisen Analyse physiologischer und biologischer Indizes sein kann.

Einleitung

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Membranbasierte Lateral Flow Immunochromatographic Strips (ICSs) sind nützliche Werkzeuge für eine kostengünstige und schnelle Erkennung. Die Nitrocellulosemembran als Träger und kolloidales Gold als Marker für schnelldiagnostische Reagenzien der Immunchromatographie sind die am häufigsten verwendete POCT-Methode (Point of Care Testing), und der Testumfang des Projekts ist breiter. Von ihrer ursprünglichen Anwendung bei der Überwachung während der Schwangerschaft wurde ihre Verwendung erweitert, um Blutgerinnungszustand1,2, Myokardverletzung3, Veterinärmedizin4, ....

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Protokoll

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Alle in dieser Studie durchgeführten Verfahren wurden vom Ethics Review Committee der Beijing University of Chinese Medicine genehmigt (Zulassungsnummer 2017BZYYL00120).

1. Herstellung und Charakterisierung von kolloidalem Gold

HINWEIS: Da kolloidales Gold leicht an der Innenwand des Gefäßes adsorbiert wird und anfällig für Ausfällung durch Verunreinigungen ist, sollte das Gefäß für die Synthese und Lagerung von kolloidalem Gold gründlich gereinigt und in Säure getränkt werden (40 ml destilliertes Wasser, 360 ml konzentrierte Schwefelsäure, 20 g Kaliumdichromat) oder einer Oberflächenpassivierungsb....

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Ergebnisse

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Charakterisierung von kolloidalem Gold
Die vorbereiteten kolloidalen Goldlösungen waren claretrot. TEM-Analysen wurden verwendet, um die Morphologie und Form von AuNPs zu bestimmen (Abbildung 2A-D). Abbildung 2A und Abbildung 2B zeigen, dass die Partikel polyedrisch geformt und gleichmäßig verteilt sind. Der durchschnittliche Durchmesser von AuNPs betrug etwa 14 nm (Abbildung.......

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Diskussion

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In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Herstellung von mAbs gegen aus Naturprodukten gewonnene kleine Moleküle vor. Die wesentlichen Schritte und die Angelegenheiten, die in der Prozedur beachtet werden müssen, wurden skizziert, und wir haben den Nutzen dieses Protokolls am Beispiel der niedermolekularen SSD demonstriert. Beispielspektren, TEM-Bilder, quantitative Ergebnisse und methodische Untersuchungen werden in repräsentativen Daten gezeigt. Daher haben wir gezeigt, dass die hier vorgestellte kolloidale Goldp.......

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Offenlegungen

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Die Autoren haben nichts preiszugeben.

Danksagungen

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Diese Arbeit wurde durch die Sonderfonds für Grundlagenforschungsfonds der mit zentralen Abteilungen verbundenen Hochschulen unterstützt. Wir schätzen die Unterstützung des Classical Prescription Basic Research Teams der Beijing University of Chinese Medicine.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Chloraurensäurelösung (HAuCl4)Tianjin Fu Chen Chemical Reagents FactoryJY-SJ102
RinderserumalbuminAMRESCO332
Zentrifugenröhrchen 15 mLCorning430645
Zentrifugenröhrchen 50 mLCorning430828
ELISA-Platten, 96 WellNUNC655101
FilterpapierSinopharmH5072
GlasfasermembranenJieyiXQ-Y6
Ziegen-Anti-Maus IgG-AntikörperapplygenC1308
Nitrozellulose-MembranenMilliporeMillipore 180
OvalbuminBeijing BIODEE5008-25g
PEG20000Sigma Aldrich
Pipette 10 mLCOSTAR4488
Pipette 25 mLFALCON357525
halbstarre PVC-PlattenJieyiJY-C104
NatriumcitratBeijing Chemical WorksC1034
NatriumperiodatSinopharm ChemicalBW-G0008
Sulfo-GMBSPerbio Science Deutschland22324
TipOne Tipps 1.000 µ LStarlabS1111-2021
Tris-HClSolarbio77-86-1
TWEEN 20Solarbio9005-64-5
RNBC6325

Referenzen

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  1. Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
  2. Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P.

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Nachdrucke und Genehmigungen

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Schlagwörter

Lateral Flow Streifenkolloidales GoldGold NanopartikelDetektion kleiner Molek lequantitativer ImmunoassayAntik rperkonjugattragbares Streifenger tTransmissionselektronenmikroskopieTestlinie Kontrolllinie

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