Magnetische Isolierung von Mikrogliazellen aus neugeborener Maus für primäre Zellkulturen

Cindy Bokobza; Alice Jacquens; Manuela Zinni; Valérie Faivre; Jennifer Hua; David Guenoun; Caroline Userovici; Shyamala Mani; Vincent Degos; Pierre Gressens; Juliette Van Steenwinckel

doi:10.3791/62964

Methodenartikel

Magnetische Isolierung von Mikrogliazellen aus neugeborener Maus für primäre Zellkulturen

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DOI:

10.3791/62964

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25. Juli 2022

Cindy Bokobza^*¹ , Alice Jacquens^*¹^,² , Manuela Zinni¹ , Valérie Faivre¹ , Jennifer Hua¹ , David Guenoun¹ , Caroline Userovici¹ , Shyamala Mani¹ , Vincent Degos¹^,² , Pierre Gressens¹ , Juliette Van Steenwinckel¹

¹NeuroDiderot, Inserm UMR-1141, Hôpital Robert Debré 48, Université de Paris, ²Department of anesthesia and critical care, APHP-Sorbonne university

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Primäre Mikrogliakulturen werden häufig verwendet, um neue entzündungshemmende Moleküle zu bewerten. Das vorliegende Protokoll beschreibt eine reproduzierbare und relevante Methode zur magnetischen Isolierung von Mikroglia aus neugeborenen Welpen.

Zusammenfassung

Mikroglia, als hirnresidente Makrophagen, sind grundlegend für mehrere Funktionen, einschließlich der Reaktion auf Umweltstress und Gehirnhomöostase. Mikroglia können ein großes Spektrum von Aktivierungsphänotypen annehmen. Darüber hinaus sind Mikroglia, die den proinflammatorischen Phänotyp unterstützen, sowohl mit neurologischen Entwicklungsstörungen als auch mit neurodegenerativen Störungen assoziiert. In-vitro-Studien werden häufig in der Forschung eingesetzt, um mögliche therapeutische Strategien in bestimmten Zelltypen zu bewerten. In diesem Zusammenhang ist die Untersuchung der Mikrogliaaktivierung und Neuroinflammation in vitro unter Verwendung primärer Mikrogliakulturen relevanter als Mikrogliazelllinien oder Stammzell-abgeleitete Mikroglia. Die Verwendung einiger Primärkulturen könnte jedoch unter mangelnder Reproduzierbarkeit leiden. Dieses Protokoll schlägt eine reproduzierbare und relevante Methode zur magnetischen Isolierung von Mikroglia aus neugeborenen Welpen vor. Mikroglia-Aktivierung mit mehreren Stimuli nach 4 h und 24 h durch mRNA-Expressionsquantifizierung und einen Cy3-Bead Phagozyten-Assay wird hier demonstriert. Die aktuellen Arbeiten sollen eine leicht reproduzierbare Technik zur Isolierung physiologisch relevanter Mikroglia aus juvenilen Entwicklungsstadien liefern.

Einleitung

Mikroglia sind die im zentralen Nervensystem ansässigen Makrophagen-ähnlichen Zellen, die von erythropoetischen Vorläufern des Dottersacks abstammen, die während der frühen Embryonalentwicklung in das Neuroepithel wandern¹. Neben ihren Immunitätsfunktionen spielen sie auch eine wichtige Rolle während der Neuroentwicklung, insbesondere bei der Synaptogenese, neuronalen Homöostase und Myelinisierung². Im Erwachsenenalter entwickeln Mikroglia lange zelluläre Prozesse, um die Umgebung kontinuierlich zu scannen. Im Falle von Homöostaserupturen wie Hirnverletzungen oder Gehirnerkrankungen können Mikroglia ihr morphologisches A....