Intratibiale Osteosarkom-Zellinjektion zur Erzeugung orthotoper Osteosarkom- und Lungenmetastasen-Mausmodelle

Junli Chang; Fulai Zhao; Xingyuan Sun; Xiaoping Ma; Wenlan Zhi; Yanping Yang

doi:10.3791/63072

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Methodenartikel

Intratibiale Osteosarkom-Zellinjektion zur Erzeugung orthotoper Osteosarkom- und Lungenmetastasen-Mausmodelle

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DOI:

10.3791/63072

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28. Oktober 2021

Junli Chang^*¹^,² , Fulai Zhao^*¹^,² , Xingyuan Sun¹^,² , Xiaoping Ma¹^,² , Wenlan Zhi¹^,² , Yanping Yang¹^,²

¹Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, ²Key Laboratory of theory and therapy of muscles and bones, Ministry of Education

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Intratibia-Osteosarkom-Zellinjektion zur Generierung von Mausmodellen mit orthotopen Osteosarkom- und Lungenmetastasenläsionen.

Zusammenfassung

Das Osteosarkom ist der häufigste primäre Knochenkrebs bei Kindern und Jugendlichen, wobei die Lunge die häufigste metastasierende Stelle ist. Die Fünf-Jahres-Überlebensrate von Osteosarkom-Patienten mit Lungenmetastasen beträgt weniger als 30%. Daher ist die Verwendung von Mausmodellen, die die Osteosarkomentwicklung beim Menschen nachahmen, von großer Bedeutung für das Verständnis des grundlegenden Mechanismus der Osteosarkomkarzinogenese und Lungenmetastasierung zur Entwicklung neuartiger Therapeutika. Hier werden detaillierte Verfahren berichtet, um die primären Osteosarkom- und Lungenmetastasen-Mausmodelle über die Intratibia-Injektion von Osteosarkom-Zellen zu erzeugen. In Kombination mit dem Biolumineszenz- oder Röntgen-Live-Imaging-System werden diese lebenden Mausmodelle verwendet, um das Wachstum und die Metastasierung von Osteosarkomen zu überwachen und zu quantifizieren. Um dieses Modell zu etablieren, wurde eine Basalmembranmatrix, die Osteosarkomzellen enthielt, in eine Mikrovolumenspritze geladen und nach der Anästhesie in eine Tibia jeder athymischen Maus injiziert. Die Mäuse wurden geopfert, als das primäre Osteosarkom die Größenbeschränkung im IACUC-genehmigten Protokoll erreichte. Die Beine mit Osteosarkom und die Lunge mit Metastasenläsionen wurden getrennt. Diese Modelle zeichnen sich durch eine kurze Inkubationszeit, schnelles Wachstum, schwere Läsionen und Empfindlichkeit bei der Überwachung der Entwicklung primärer und pulmonaler metastasierender Läsionen aus. Daher sind dies ideale Modelle, um die Funktionen und Mechanismen spezifischer Faktoren in der Osteosarkom-Karzinogenese und Lungenmetastasierung, der Tumormikroumgebung und der Bewertung der therapeutischen Wirksamkeit in vivo zu untersuchen.

Einleitung

Das Osteosarkom ist der häufigste primäre Knochenkrebs bei Kindern und Jugendlichen^1,2^, der hauptsächlich das umliegende Gewebe infiltriert und sogar in die Lunge metastasiert, wenn die Patienten diagnostiziert werden. Lungenmetastasen sind die größte Herausforderung für die Osteosarkom-Therapie, und die Fünf-Jahres-Überlebensrate von Osteosarkom-Patienten mit Lungenmetastasen bleibt so niedrig wie 20% -30% ^3,4,5. Die Fünf-Jahres-Überlebensrate des primären Osteosarkoms ist jedoch seit den 1970er Jahren aufgrund der E....