Ein Mausmodell der schweren akuten Pankreatitis wird hierin beschrieben. Das hier vorgestellte Verfahren ist sehr schnell, einfach und zugänglich und ermöglicht so möglicherweise die Untersuchung der molekularen Mechanismen und verschiedener therapeutischer Interventionen bei akuter Pankreatitis auf bequeme Weise.
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Methodenartikel
Etablierung eines Mausmodells für schwere akute Pankreatitis mittels retrograder Injektion von Natriumtaurocholat in den Gallengang
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Prävalenz der akuten Pankreatitis (AP), insbesondere der schweren akuten Pankreatitis (SAP), nimmt in jüngeren Altersgruppen jährlich zu. In der aktuellen klinischen Praxis mangelt es jedoch an wirksamen Behandlungen. Mit der leichten Zugänglichkeit von transgenen und Knockout-Stämmen und ihrer geringen Größe, die minimale Dosen von Medikamenten ermöglicht, die für die In-vivo-Bewertung erforderlich sind, wird ein gut etabliertes experimentelles Modell an Mäusen für die AP-Forschung bevorzugt. Darüber hinaus ist SAP induziert durch Natriumtaurocholat (TC) derzeit eines der am weitesten verbreiteten und am besten charakterisierten Modelle. Dieses Modell wurde auf neuartige Therapien und mögliche molekulare Ereignisse während des AP-Prozesses untersucht. Hier stellen wir die Generierung eines AP-Mausmodells unter Verwendung von Natriumtarocholat und einer einfachen hausgemachten Mikrospritze vor. Darüber hinaus stellen wir auch die Methodik für die anschließende Histologie und serologische Untersuchung zur Verfügung.
Einleitung
Akute Pankreatitis (AP) ist eine akute Entzündung der Bauchspeicheldrüse, die durch eine Obstruktion des Hauptgangs der Bauchspeicheldrüse mit anschließender duktaler Dehnung und Pankreas-Autodigestion durch ihre abnormal aktivierten Enzyme gekennzeichnet ist. Zu seinen klinischen Manifestationen gehören lokale oder systemische Entzündungen, Bauchschmerzen und eine Erhöhung der Serumamylase1,2. Gemäß der Schweregradklassifikation3 kann AP in leichten, mittelschweren und schweren Formen auftreten, und unter ihnen ist die schwere akute Pankreatitis (SAP) aufgrund ihrer hohen Sterblichkeitsrate von mehr als 30%
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Protokoll
Alle Tierversuche wurden von der Tierethikkommission der Universität Soochow genehmigt. Alle chirurgischen Eingriffe wurden unter Vollnarkose durchgeführt. Analgetika wurden nicht verwendet, um Störungen des natürlichen Krankheitsverlaufs nach früheren Literaturen zu vermeiden28,29. Die Genehmigung für die fehlende Analgesie wurde auch von der Tierethikkommission der Soochow-Universität erteilt.
1. Vorbereitung
- Schnell eine C57BL/6 Wildtyp Maus 8-12 h vor der Operation.
- 5%ige (w/v) TC-Lösung (93 mM) in 0,9%ige Natriumchlorid verdünnt zubereiten. ....
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Ergebnisse
Durch sorgfältiges Befolgen der obigen Anweisungen erhielten wir eine mittlere Operationsdauer von ca. 40 min. Die Mäuse waren leicht inaktiv und hatten nach der Operation etwa 0,5-1,75 g, 0,85-1,85 g und 0,5-4,73 g Angewicht verloren (Abbildung 2).
Vom Zeitpunkt des Abschlusses der Operation bis 24 Stunden nach der Operation, als sich die Krankheit entwickelte, wurden die Mäuse inaktiv und zeigten langsame Reaktionen und Aktionen.
Die .......
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Diskussion
Das TC-induzierte SAP-Modell ist ein hervorragendes Forschungsinstrument. Wie in dieser Studie gezeigt, ist dieses Modell in allgemeinen Labors sehr einfach zu realisieren, ohne spezielle Geräte zu verwenden. In Kombination mit Histologie und biochemischer Analyse bietet es einen kosten- (kostengünstige Reagenzien) und zeitsparenden (24 h Zeitfenster) Ansatz zur Induktion und Bewertung von AP. Die Anpassung der TC-Konzentration bietet auch die Möglichkeit, milde und moderate AP zu erzeugen. Perides et al. verwendeten TC .......
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Danksagungen
Wir sind dankbar für die Unterstützung durch die folgenden Stipendien: ein Translational Research Grant des NCRCH [2020WSA01], ein KJXW Scientific Grant der Suzhou Commission of Health for Young Scholars [KJXW2020002], ein Wissenschafts- und Technologieplan der Stadt Suzhou (SKY2021038 und SKJY2021050), ein Zuschuss aus dem Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions (PAPD) und ein Primary Research & Social Development Plan der Provinz Jiangsu (BE2018659).
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 0,5 % Iodophor | Shanghai Likang Desinfektionsmittel | 310102 | 4 ml/Maus |
| 0,9 % Natriumchlorid | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10019318 | 0,8 ml/Maus |
| 1% Pentobarbital-Natrium | Sigma | P3761 | 0,2 -0,25 ml/Maus |
| 25 μm; L Mikroliter-Spritze mit flacher Spitze | Gaoge, Shanghai | A124019 | |
| 4% Paraformaldehyd | Beyotime, Nantong, China | P0099-500ml | |
| 5% Natriumtaurocholat (TC) | Aladdin | S100834-5g | 10 μ L/SAP Maus |
| 6-0 Sterile Nylon-Mikronaht mit Gewindenadel (1/2 Kreis) | Cheng-He | 20093 | |
| 75% Alkohol | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10009218 | 4 mL/Maus |
| 8-0 Steriles Nylon-Mikronaht mit Gewindenadel (3/8 Kreis) | Cheng-He | 19064 | |
| ALT Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | ALT0012 | |
| Amylase Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AMY0012 | |
| Abgewinkelte kleine Bulldoggenklemme mit 12 mm Backe (3 cm) | Cheng-He | HC-X022 | |
| Espenspäne oder Fetzen für Mäuseeinstreu | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | VR03015 | |
| AST Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AST0012 | |
| Blutharnstoffstickstoff (BUN) Assay Kit | EPNK, Anhui, China | BUN0011 | |
| C57BL/6 Maus | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | 213 | |
| Creatine Assay Kit | EPNK, Anhui, China | ||
| Merkmal Mikrotom-Klinge | Beyotime, Nantong, China | E0994 | |
| Hämostatische Pinzette (9,5 cm, gebogen) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | JC3901 | |
| Lipase-Assay-Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A054-2-1 | |
| Mikrotom | Leica-Biosystem, Deutschland | RM2245 | |
| Mindray-Biochemie-Analysator | Mindray, Shenzhen, China | BS-420 | |
| MPO-Assay-Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A044-1-1 | |
| Normales Mausfutter | Trophic, Nantong, China | LAD 1000 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Beyotime, Nantong, China | C0221A | |
| Gerade Mikro-Bulldog-Klemme mit 5 mm Backe (1,5 cm) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | W40130 | |
| Gerade oder gebogene Pinzette (11,0 cm) | Cheng-He | HC-X091A oder HC-X090A | |
| Gerade Schere (10,0 cm) | Cheng-He, Ningbo, China | HC-J039102 | |
| Thermo Scientific Zentrifuge | Thermo Scientific, USA | Multifuge X1R |
Referenzen
- Lee, P. J., Papachristou, G. I. New insights into acute pancreatitis. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 16 (8), 479-496 (2019).
- Mandalia, A., Wamsteker, E. J., DiMagno, M. J. Recent advances in understanding and managing acute pancreatitis. F1000Research.....
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Nachdrucke und Genehmigungen
