Plättchenreiches Plasmalysat zur Behandlung von Erkrankungen der Augenoberfläche

Zusammenfassung

Thrombozytenlysate stellen ein aufstrebendes Werkzeug für die Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen dar. Hier schlagen wir eine Methode zur Herstellung, Dispensation, Lagerung und Charakterisierung von Thrombozytenlysat vor, das von Thrombozytenspendern gewonnen wurde.

Zusammenfassung

Verschiedene Augenoberflächenerkrankungen werden mit Augentropfen aus Blut behandelt. Ihre Verwendung wurde aufgrund ihres Metaboliten- und Wachstumsfaktorgehalts, der die Regeneration der Augenoberfläche fördert, in die klinische Praxis eingeführt. Blutbasierte Augentropfen können aus verschiedenen Quellen (z. B. Vollblut- oder Thrombozytenapheresespende) sowie mit verschiedenen Protokollen (z. B. verschiedene Verdünnungen und Gefrier- / Tauzyklen) hergestellt werden. Diese Variabilität behindert die Standardisierung klinischer Protokolle und damit die Bewertung ihrer klinischen Wirksamkeit. Die Einzelheiten und der Austausch der methodischen Verfahren können zur Festlegung gemeinsamer Leitlinien beitragen. In den letzten Jahren haben sich allogene Produkte als Alternative zu den autologen Behandlungen verbreitet, da sie höhere Wirksamkeitsstandards garantieren. unter ihnen werden die plättchenreichen Plasmalysat (PRP-L) Augentropfen mit einfachen Herstellungsverfahren hergestellt. In der Abteilung für Transfusionsmedizin am AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Italien, wird PRP-L aus einer Thrombozytenapheresespende gewonnen. Dieses Produkt wird zunächst auf 0,3 x 10 9 Thrombozyten/ml (ausgehend von einer durchschnittlichen Konzentration von 1 x 10 9 Thrombozyten/ml) in^0,9% NaCl verdünnt. Verdünnte Blutplättchen werden eingefroren/aufgetaut und anschließend zentrifugiert, um Ablagerungen zu beseitigen. Das Endvolumen wird in 1,45 ml Aliquots aufgeteilt und bei −80 °C gelagert. Vor der Abgabe an Patienten werden Augentropfen auf Sterilität getestet. Patienten können Thrombozytenlysate bei −15 °C für bis zu 1 Monat lagern. Die Zusammensetzung des Wachstumsfaktors wird ebenfalls aus zufällig ausgewählten Aliquots bewertet, und die Mittelwerte werden hier angegeben.

Einleitung

Aus Blut gewonnene Produkte werden häufig in der Wundversorgung¹, in der Kiefer- und Gesichtschirurgie und orthopädischen Chirurgie sowie zur Behandlung verschiedener Augenoberflächenerkrankungen² wie der Erkrankung des trockenen Auges (DED)³ eingesetzt. Bei DED ist die Tränenfilmhomöostase infolge der abnormalen Funktion verschiedener Faktoren, die an der Tränenproduktion und der Integrität der Augenoberfläche beteiligt sind, beeinträchtigt ^4,5.

DED ist durch Heterogenität in

Protokoll

PRP-L, das für die quantitative Bewertung von Wachstumsfaktoren verwendet wird, wurde im Rahmen einer breiteren Studie zur Charakterisierung von PRP-Produkten für regenerative Zwecke gesammelt, die am AUSL-IRCCS di Reggio Emilia durchgeführt und am 10. Januar 2019 vom Ethikausschuss Area Vasta Emilia Nord genehmigt wurde (Protokollnummer 2019/0003319). Die Geber gaben ihre informierte Zustimmung gemäß der Deklaration von Helsinki. Für die Erfassung der aggregierten, anonymen Daten des OSDI-Fragebogens (Ocular Surface Disease Index), der routinemäßig von Klinikern zur Überwachung der Symptome des Syndroms des trockenen Auges verwendet wird, war keine ethische Genehmigu....

Ergebnisse

Der Grund für die Verwendung von Serum-basierten Augentropfen (das am häufigsten zur Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen verwendete blutbasierte Produkt) liegt in ihrem Gehalt an GFs, die fast vollständig aus zirkulierenden Blutplättchen gewonnen werden. PRP enthält eine signifikant höhere Anzahl von Blutplättchen (und folglich von aus Blutplättchen gewonnenen GFs) im Vergleich zu peripherem Blutserum, zwischen 0,15 x 10 9-0,45 x 10⁹ PLTs/ml. Nach italienischem Recht sollte die Thrombozytenz.......

Diskussion

In den letzten Jahren hat die klinische Verwendung von plättchenbasierten Produkten für Augenoberflächenpathologien zugenommen, aber ihre Diffusion wird durch den Mangel an wissenschaftlicher Robustheit behindert. Dies ist vor allem auf die große Heterogenität der Spenderquellen und Präparationsprotokolle zurückzuführen, die oft nicht vollständig offengelegt oder nicht speziell für den Zweck, für den sie abgegeben werden, ausgelegt sind. Insbesondere fehlen noch Informationen über plättchenbasierte Produkte, die durch Ap.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Equipments
CompoSeal Mobilea II	Fresenius Kabi, Deutschland		Beutelverschließer
HeraSafe Haube	Heraeus Instruments, Deutschland		Klasse II Biogefahrenhaube
MCS+ 9000 Mobiles Thrombozyten-Sammelsystem	Haemonetics, Italien		Automatisierte Plasma- und Mehrkomponenten-Entnahmegeräte für die Spende von Blutplättchen, Erythrozyten, Plasma oder kombinierten Blutbestandteilen
Thrombozytenschüttler, PF396i	Helmer, USA		Thrombozytenschüttler
Raycell Röntgen-Blutbestrahlungsgerät	MDS Nordion, Kanada		Röntgen-Blutbestrahlung
ROTIXA 50RS	Hettich Zentrifugen, Deutschland		Hochgeschwindigkeits-Synthesizer
Sysmex XS-1000i	Sysmex Europe GMBH, Deutschland		Hämozytometer für die Thrombozytenzahl
Warmbad, WB-M15	Falc Instruments, Italien		Warmbad
MaterialsACD-A
A	Fenwal Inc., USA	DIN 00788139	Antikoagulanzienlösung für die Thrombozytenapherese (1000 ml)
BD BACTEC Peds Plus/F Kulturfläschchen	BD Biosciences, USA	BD 442020	Sterilitätsassay
BD BACTEC Peds Plus/F Kulturfläschchen	BD Biosciences, USA	442020	Mindestens 2 Fläschchen für den Sterilitätsassay
BD Luer Lok Spritze	BD Plastipack, USA	300865	Mindestens 4 sterile Spritzen (50 ml)
Bio-Plex Human Cancer Panel 1	BioRad Laboratories, USA	171AC500M	Standardpanel für die Beurteilung
von PDGF-IsoformenBio-Plex Human Cancer Panel 2	BioRad Laboratories, USA	171AC600M	Standardpanel für die EGF-Bewertung
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader	BioRad Laboratories, USA	Magpix Dieses	Gerät ermöglicht mehrere Immunoassays mit funktionalisierten magnetischen Kügelchen.
Bio-Plex Pro TGF-b Assay	BioRad Laboratories, USA	10024984	Standards und Standards für die Bewertung von TGFb-Isoformen
BioRet	ARIES s.r.l., Italien	A2DH0020	Mindestens 4 Piercing-Spieße für Blutbeutel
Blutentnahmeröhrchen	BD Vacutainer, USA	367835	1 Röhrchen, notwendig für die Durchführung der
ThrombozytenzählungAugentropfen-Set. COL Medical Device zur Anwendung und Konservierung von Augentropfen von haemocomponents	Biomed Device s.r.l., Italien	COLC50	Augentropfen-Kit. Mindestens 2 Kits für jede gesammelte PRP-Einheit
PDGF-AB/BB Set für menschlichen Krebs 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC511	Set für die Bewertung von PDGF-Isoformen
Human Cancer2 EGF-Set 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC603M	Set für die EGF-Bewertung
NaCl 0,9%ige sterile Lösung	Baxter S.p.A., Italien	1000 ml
OSDI-Fragebogen	Allergan Inc., USA	OSDI	Ocular Surface Disease Index Fragebogen
Piercing Spike	BioRet ARIES s.r.l., Italien	BS051004	Spike
Thrombozytenzusatzlösung A+ T-PAS+	TERUMO BCT Inc., Italien	40842	Konservierungslösung für Thrombozytenkonzentrate (1000 ml)
Software Excel	Microsoft, USA	Excel	Datenanalysesoftware
Teruflex Transferbeutel 1000 ml	TERUMO BCT Inc., Italien	BB*T100BM	1 für PRP-Verdünnung
Teruflex Transferbeutel 300 ml	TERUMO BCT Inc., Italien	BB*030CM	Mindestens 6 für jede gesammelte PRP-Einheit

Antikoagulanzienlösung B05BB01