Hier wird eine Methode vorgestellt, um Zecken in vitro über ein künstliches Membransystem zu ernähren, um eine teilweise oder vollständige Überfüllung einer Vielzahl von Zeckenlebensstadien zu ermöglichen.
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Methodenartikel
Zecken-Fütterung mit künstlicher Membran für Ixodes scapularis
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Zecken und die damit verbundenen Krankheiten sind aufgrund ihrer Belastung für die öffentliche Gesundheit und die Veterinärmedizin ein wichtiges Studienthema. Der Fütterungsbedarf von Zecken sowohl während der Studie als auch während der Aufzucht kann jedoch experimentelle Fragen oder die Fähigkeit von Laboren, Zecken und die damit verbundenen Krankheitserreger zu erforschen, einschränken. Ein künstliches Membranfütterungssystem kann diese Probleme reduzieren und neue Forschungswege eröffnen, die mit herkömmlichen Tierfütterungssystemen möglicherweise nicht möglich gewesen wären. Diese Studie beschreibt ein künstliches Membranfütterungssystem, das für den Fütterungs- und Schwellungserfolg für alle Lebensstadien von Ixodes scapularis verfeinert wurde. Darüber hinaus kann das in dieser Studie beschriebene künstliche Membranfütterungssystem durch einfache Verfeinerung der gewünschten Membrandicke für die Verwendung mit anderen Zeckenarten modifiziert werden. Die Vorteile eines künstlichen Membranfütterungssystems werden durch die Arbeitsintensität des Systems, die zusätzlichen Umweltfaktoren, die sich auf den Fütterungserfolg auswirken können, und die Notwendigkeit, die Technik für jede neue Art und jedes neue Lebensstadium von Zecken zu verfeinern, aufgewogen.
Einleitung
Durch Zecken übertragene Krankheiten haben weltweit starke Auswirkungen auf die Gesundheit von Mensch und Tier und waren von 2004 bis 2016 für mehr als zwei Drittel aller vektorassoziierten Erkrankungen in den USA verantwortlich1. Darüber hinaus sind die Fallzahlen in den letzten Jahren gestiegen, wobei immer mehr Menschen und Nutztiere von Zecken und den damit verbundenen Krankheiten betroffen sind 2,3. Während es wahrscheinlich zahlreiche Ursachen für den Aufwärtstrend bei den Fallzahlen gibt, ist der Klimawandel ein wichtiger Faktor 3,4
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Protokoll
1. Vorbereitung der Zeckenmembrankammer
- Bereiten Sie eine flache, nicht poröse Oberfläche vor, z. B. eine Ebene aus Glas oder eine keramikbeschichtete Metallbasis eines Armständers, indem Sie sie mit 70% Ethanol abwischen und dann mit einer einzigen Schicht Plastikfolie abdecken, wobei Sie darauf achten, dass die Kunststofffolie flach und ohne Blasen oder Falten ist (siehe Abbildung 1A).
- Kleben Sie 100% Viskoselinsen-Reinigungspapier auf die vorbereitete Oberfläche. Stellen Sie sicher, dass es flach und leicht gespannt ist, mit Klebeband auf allen vier Seiten des Papiers. Zwei Stücke von 4 Zoll x 6 in ....
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Ergebnisse
Eine erfolgreiche Fütterung hängt davon ab, ob eine Teil- oder Vollverstopfung gewünscht wird. Erfolgreich gefütterte I. scapularis färben sich für Erwachsene grau und lösen sich von selbst von der Membran. Wenn sie jedoch mindestens erbsengroß sind, können sie sich nach Beendigung der Fütterung von der Membran lösen. Bei unreifen Stadien von I. scapularis variiert die Größe für vollständig geschwollene Zecken, und da sie im Gegensatz zu Erwachsenen keine Farbänderung aufweisen, ist die Ablösung der bes.......
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Diskussion
Die künstliche Membranfütterung von Zecken ist ein nützliches Werkzeug für eine Vielzahl von experimentellen Verfahren, wird aber wahrscheinlich nicht für alle Anwendungen die Tierfütterung ersetzen. Die Erhaltung großer Zeckenkolonien in allen Lebensstadien ohne Tierfütterung ist in der Regel unhaltbar. Stattdessen ist das künstliche Fütterungssystem für andere Zwecke wertvoll, wie z. B. die Infektion von Zecken mit Krankheitserregern, die nicht von Modellwirten unterstützt werden, die Bewertung der Auswirkungen kontrol.......
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 00-10 Härte Silikon | Smooth-On | Ecoflex 00-10 | Probiergröße aus dem Smooth-On Store |
| 00-50 Härte Silikon | Smooth-On | Ecoflex 00-50 | Probiergröße aus dem Smooth-On Store |
| 30 Härte Silikon | Smooth-On | Mold Star 30 | Probiergröße aus dem Smooth-On Store |
| 6-Well-Zellkulturplatten | Corning Incorporated | 3516 | |
| Adenosintriphosphat (ATP) | Millipore Sigma | A1852-1VL | Wird verwendet, um eine wässrige Lösung von 3 mM ATP herzustellen, die über einen 0,2-Mikrometer-Filter gefiltert wurde. |
| Rinderblut | HemoStat | DBB500 | Mechanisch defibriert; 500 mL sind in der Regel ausreichend für ein Experiment |
| Frischhaltefolie | Fisherbrand | 22-305654 | |
| Filterpapier | Fisherbrand | 09-790-2C | Autoklavieren und vor Gebrauch abkühlen lassen. Kann auch feine Qualität anstelle von Medium verwenden |
| Fluon (wässriges Polytetrafluorethylen) | Bioquip | 2871 | Erhältlich aus anderen Quellen wie https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml |
| Glukose | Millipore Sigma | G8270-100G | |
| Hexan | Millipore Sigma | 139386-100ML | |
| Linsenpapier | Fisherbrand | 11-995 | 100% Viskose |
| Nystatin | Gold Biotechnologie | N-750-10 | |
| Parafilm | Fisherbrand | S37440 | |
| Penicillin/Streptomycin/Fungizone | Gibco | 15240-096 | oder gleichwertiges Generikum mit einer Konzentration wie folgt (10.000 Einheiten/ml Penicillin, 10.000 &; Mikro; g/ml Streptomycin und 25 µ g/ml Amphotericin B) |
| Phagostimulans | Made in House | Gesammelt aus früheren Zeckenfütterungen | |
| Polycarbonat Rohr | McMaster-Carr | 8585K204 | Schneiden auf 45 mm Länge, 1,25 Zoll Außendurchmesser, 1 Zoll Innendurchmesser. Zum Schneiden wird eine Kappsäge-Schleifscheibe benötigt. |
| Gummi O-Ringe | McMaster-Carr | 9452K38 | 5 mm dick, 1,25 Zoll Innendurchmesser |
| Soft-Touch-Pinzette | VWR | 470315-238 | |
| Sekundenkleber | Cyanacrylatkleber | ||
| Unryu Papier | Kunstbedarfsgeschäfte | Maulbeerfaser 10 g/m2. Gekauft im Wet Paint Art Supply Store, St. Paul, MN, USA |
Referenzen
- Rosenberg, R., et al. Vital signs: trends in reported vectorborne disease cases - United States and territories, 2004-2016. Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (17), 496-501 (2018).
- Busch, J. D., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
