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Alle experimentellen Verfahren wurden vom Institutional Review Board des Seoul National University Bundang Hospital geprüft und genehmigt. Für die Experimente in dieser Studie wurden 34 Teilnehmer mit Schlaganfall rekrutiert. Von allen Teilnehmern wurde eine unterschriebene Einverständniserklärung eingeholt. Eine unterschriebene Einverständniserklärung wurde von einem gesetzlichen Vertreter eingeholt, wenn ein Teilnehmer die Kriterien erfüllte, aber die Einverständniserklärung aufgrund einer Behinderung nicht unterschreiben konnte.
1. Versuchsaufbau
- Rekrutierung von Patienten
- Führen Sie den Screening-Prozess anhand der folgenden Einschlusskriterien durch:
Im Alter von 18 bis 85 Jahren mit eingeschränkten Funktionen der oberen Extremitäten;
Erster ischämischer oder hämorrhagischer Schlaganfall, bestätigt durch Hirn-Computertomographie oder Magnetresonanztomographie;
Fähigkeit des Teilnehmers, die Anweisungen für die klinische Beurteilung und die EEG-Studie zu befolgen;
Fehlen anderer psychiatrischer oder neurologischer Erkrankungen außer Schlaganfall in der Anamnese.
- Schließen Sie Patienten aus folgenden Gründen aus:
Vorerkrankungen des zentralen Nervensystems (z. B. Schädel-Hirn-Trauma, Hirntumor, Parkinson-Krankheit);
Unfähigkeit, die EEG-Kappe zu tragen; und
Unfähigkeit, die Anweisungen für die klinische Beurteilung und die EEG-Studie zu befolgen.
ANMERKUNG: Die Ein- und Ausschlusskriterien wurden gewählt, um die Teilnehmer auszuwählen, die an dem Experiment teilnehmen können, und um die demografischen Faktoren zu regulieren, die die Ergebnisse beeinflussen könnten.
- Informieren Sie alle rekrutierten Teilnehmer über die Details des Versuchsablaufs.
- Experimentelles System: EEG
- Verwenden Sie für die Datenaufzeichnung ein EEG-System, bestehend aus 32 Ag/AgCl-Kopfhautelektroden, einer textilen EEG-Kappe und einer EEG-Aufzeichnungssoftware.
- Verwenden Sie einen PC mit installierter EEG-Aufzeichnungssoftware und verbinden Sie den PC über Bluetooth mit dem EEG-Gerät.
- Verwenden Sie einen anderen PC mit einer numerischen Analyse- und Programmiersoftware für das Engineering (siehe Werkstofftabelle).
- Schließen Sie den PC für die Stimuli-Präsentation an eine spezielle Triggerbox an (Abbildung 1).
HINWEIS: Die detaillierten Spezifikationen der beiden PCs finden Sie in der Materialtabelle.
- Experimentelles Paradigma auf Basis von Programmiersoftware
HINWEIS: Die Teilnehmer führten eine Handstreckaufgabe mit den betroffenen und nicht betroffenen Händen durch, bei der EEG-Daten gemessen wurden. Abbildung 2 zeigt das experimentelle Paradigma dieser Studie.- Präsentieren Sie zwei visuelle Stimuli, CLOSE und OPEN, jeweils 30 s lang in der Mitte eines Monitors, um die EEG-Basisdaten im Ruhezustand zu messen, während der der Teilnehmer die Augen schließt und öffnet.
HINWEIS: Da EEG-Daten im Ruhezustand relativ weniger durch unerwünschte physiologische Artefakte verunreinigt sind, sind sie nützlich, um die Qualität von EEG-Daten zu überprüfen und individuelle EEG-Merkmale in Bezug auf den Ruhezustand zu identifizieren.
- Präsentieren Sie ein Handbewegungsbild für 3 Sekunden, um den Teilnehmer anzuweisen, eine Handstreckbewegung auszuführen, gefolgt von einer Fixierungsmarkierung für 5 Sekunden zum Ausruhen.
HINWEIS: Dieses Verfahren wurde als Versuch betrachtet und 10 Mal in einer einzigen Sitzung wiederholt. Jeder Teilnehmer durchlief 4 Sitzungen für jede Hand. Der Teilnehmer machte nach jeder Sitzung eine Pause, wann immer er wollte, um übermäßige Ermüdung zu vermeiden.

Abbildung 1: Schematische Darstellung des Geräteaufbaus. Ein PC (PC1), der experimentelle Stimuli präsentierte, wurde an eine Triggerbox angeschlossen, und ein weiterer PC (PC2) wurde an einen EEG-Verstärker angeschlossen. Die in PC1 erzeugten Stimulationsereignisse wurden über die an PC1 angeschlossene Triggerbox an den EEG-Verstärker geliefert. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 2: Experimentelles Paradigma, das in dieser Studie verwendet wurde. Ein einzelner Versuch bestand aus einer Handstreckbewegung von 3 s, gefolgt von einer Entspannung von 5 s. Dieses Muster wurde 10 Mal in einer einzigen Sitzung wiederholt. Insgesamt wurden acht Sitzungen durchgeführt; Vier Sitzungen beinhalteten eine beeinträchtigte Handbewegung, während die anderen vier eine unbeeinflusste Handbewegung beinhalteten. Diese Abbildung wurde von Shim et al.17 mit Genehmigung von Mary Ann Liebert, Inc. übernommen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
2. Aufzeichnung bewegungsbezogener EEG-Daten
- EEG-Einrichtung
- Setzen Sie den Teilnehmer in einen bequemen Sessel vor einen Monitor.
HINWEIS: Der Abstand zwischen dem Teilnehmer und dem Monitor sollte mindestens 60 cm betragen, um eine Ermüdung der Augen zu vermeiden. Eine zu große Distanz (z.B. >150 cm) sollte jedoch vermieden werden, da sie die Konzentration des Teilnehmers stören könnte.
- Um die Kappe für die EEG-Messung genau zu tragen, definieren Sie die Cz-Position auf der Grundlage des internationalen 10-20-Systems unter Verwendung des Schnittpunkts der Längslinie, die das Nasion und das Inion verbindet, und der Querlinie, die den oberen Teil der beiden Ohrmuscheln verbindet.
HINWEIS: Je nach EEG-Messgerät ist möglicherweise keine EEG-Kappe erforderlich. In diesem Fall werden EEG-Elektroden gemäß dem internationalen 10-20-System15 direkt an der Kopfhaut befestigt.
- Für eine genaue EEG-Messung verwenden Sie eine entsprechend der Kopfgröße des Teilnehmers geeignete EEG-Kappe und platzieren Sie diese so, dass die Cz-Elektrodenposition auf der individuellen Cz-Stelle platziert wird.
- Befestigen Sie den Kinnriemen mit entsprechender Festigkeit; Dadurch wird verhindert, dass sich der Teilnehmer beim Schlucken und Blinzeln im Experiment unwohl fühlt. Vergewissern Sie sich danach, dass sich die Elektrodenpositionen T9 und T10 der EEG-Kappe im Schläfenbereich über beiden Ohrmuscheln befinden und sich die Fpz-Elektrodenposition der EEG-Kappe in der Mitte der Stirn befindet.
HINWEIS: Wenn sich diese Elektroden außerhalb der vorgesehenen Stelle befinden, sollten Sie die Kappe austauschen. In unserer Studie wurden drei EEG-Kappengrößen verwendet (54 cm: klein, 56 cm: mittel, 58 cm: groß).
- Nach dem korrekten Aufsetzen der EEG-Kappe werden 32 Ag/AgCl-Kopfhautelektroden nach dem erweiterten internationalen 10-10-System auf der Kopfhaut angebracht, wobei die Masse- und Referenzelektroden bei Fpz bzw. FCz16 liegen.
HINWEIS: Die Position der Referenzelektrode (FCz) wird relativ weniger von verschiedenen physiologischen Artefakten beeinflusst, z. B. von Elektrookulographie, Elektromyographie und Elektrokardiographie, da sie sich um den zentralen Bereich (Cz) der Kopfhaut herum befindet.
- Stellen Sie die Impedanz zwischen den EEG-Elektroden und der Kopfhaut mit leitfähigem Gel ein und fixieren Sie das Haar mit dem Gel, um eine Verstopfung zwischen den EEG-Elektroden und der Kopfhaut zu vermeiden.
HINWEIS: Es ist wichtig zu bestätigen, ob eine Brücke zwischen benachbarten EEG-Elektroden aufgrund von Gelleckagen entsteht.
- Verwenden Sie die Software für die EEG-Aufzeichnung.
- Schalten Sie das EEG-System ein und führen Sie Konfiguration > Verstärker auswählen aus. Wählen Sie Liveamp > > Verstärker > anschließen. Suchen Sie nach der Liveamp-Funktion für die Wireless-Verbindung (Abbildung 3).
- Führen Sie die Impedanzprüfungsfunktion aus, um den Impedanzpegel für jede Elektrode zu überwachen.
HINWEIS: Es wird empfohlen, das Experiment mit einem Impedanzpegel von <20 KΩ durchzuführen (Abbildung 4).
- Führen Sie die Überwachungsfunktion aus, um durch Echtzeit-EEG-Signalüberwachung zu bestätigen, ob die EEGs aller Elektroden ähnliche Amplitudenpegel aufweisen (Abbildung 5).
HINWEIS: Die Amplitude des EEG-Signals liegt im Allgemeinen zwischen 10 μV und 100 μV, und die Alpha-Leistung (8-12 Hz) nimmt um den Hinterhauptsbereich herum zu, wenn die Augen geschlossen sind. Daher kann die Qualität der EEG-Daten qualitativ bestätigt werden, indem der Amplitudenpegel und die Alpha-Oszillationen auf den Kanälen um den Hinterhauptsbereich bei geschlossenen Augen überwacht werden.
- Paradigma-Einrichtung
- Für eine stabile EEG-Datenerfassung verwenden Sie zwei separate PCs für die Darstellung externer Stimuli und die Aufzeichnung von EEG-Daten (siehe Abbildung 1).
- Um den Teilnehmern experimentelle Stimuli zu präsentieren, erstellen Sie ein Stimulationsprogramm, das auf dem experimentellen Paradigma basiert, indem Sie eine Programmiersoftware verwenden (eingeführt in Schritt 1.3).
HINWEIS: In dieser Studie wurde ein softwarebasiertes Stimulationsprogramm erstellt, aber je nach Kompatibilität mit den für das Experiment verwendeten EEG-Geräten sowie der Benutzerfreundlichkeit kann auch andere Software verwendet werden. Das auf der Programmiersoftware basierende Stimulus-Skript ist in der Ergänzungsdatei 1 (Experimental_stimulus.m) enthalten. Die Ereignisinformation, die den Reizbeginn angibt, wird von der hauseigenen Programmiersoftware generiert, über die Triggerbox an den EEG-Verstärker und schließlich an die EEG-Aufzeichnungssoftware übertragen (Abbildung 1).
- Führen Sie das Programm mit den experimentellen Stimuli im Überwachungsmodus aus (siehe Unterschritt 2.1.10). Vergewissern Sie sich anschließend, dass die Ereignisinformationen jedes Mal, wenn ein Stimulus präsentiert wird, rechtzeitig am unteren Rand der EEG-Aufzeichnungssoftware markiert sind, wie in Abbildung 6 dargestellt.
HINWEIS: Informationen über den Zeitpunkt werden immer dann aufgezeichnet, wenn ein neuer Stimulus präsentiert wird, und anschließend für die Datensegmentierung verwendet. Daher ist es wichtig, die genauen Zeitpunkte von experimentellen Ereignissen so weit wie möglich zu erhalten, um eine ungenaue Datensegmentierung zu vermeiden, die zu unzuverlässigen Ergebnissen in der Analyse führen würde.
- Initiieren Sie die EEG-Aufzeichnungssoftware und führen Sie dann selbstständig das auf der Grundlage des experimentellen Paradigmas entwickelte Stimuluspräsentationsprogramm mit Programmiersoftware aus, um die Datenauslassung zu verhindern.
HINWEIS: Um die Datenanalyse zu erleichtern, wird empfohlen, Dateinamen mit einer konsistenten Regel für die Datenspeicherung (z. B. Sub1_Session1) zu erstellen.
- EEG-Aufzeichnung
- Messen Sie das EEG bei einer Abtastrate von 1.000 Hz nach dem in Schritt 1.3 eingeführten experimentellen Paradigma.
HINWEIS: Die Abtastrate kann je nach dem Bereich der EEG-Frequenzen, die der Forscher untersuchen möchte, geändert werden. Im Allgemeinen wird empfohlen, eine Abtastrate von >200 Hz zu verwenden, wobei EEG-Informationen bei ≤100 Hz basierend auf dem Nyquist-Theorem untersucht werden können. Das liegt daran, dass die meisten EEG-Informationen unterhalb von 100 Hz vorhanden sind.
- Halten Sie die gleichen Versuchsumgebungen (z. B. Versuchsort, Gerät, Raumtemperatur usw.) zwischen den Teilnehmern so weit wie möglich aufrecht und weisen Sie sie an, unnötige Bewegungen während der EEG-Messung zu minimieren.

Abbildung 3: Drahtlose Verbindung zwischen EEG-Verstärker und PC mit der EEG-Aufzeichnungssoftware. Befolgen Sie die Schritte in der angegebenen Reihenfolge: (A) Verstärker auswählen, (B) Verstärker anschließen, (C) Den angeschlossenen Verstärker für die drahtlose Verbindung suchen, (D) Verbindung abschließen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 4: Impedanzprüfungsverfahren für jeden Kanal. Alle Kanäle sollten auf grüne Farbe eingestellt werden, um eine stabile EEG-Messung zu gewährleisten. Es wird empfohlen, das Experiment mit einer Impedanz von weniger als 20 KΩ durchzuführen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 5: Echtzeit-Datenüberwachungsverfahren für jeden Kanal. Die Signale aller gemessenen Kanäle können in Echtzeit überwacht und mit der Option (roter Kasten) in der oberen Leiste vergrößert/verkleinert werden. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

Abbildung 6: Screenshot zur Überwachung von Ereignisinformationen. Die roten Balken zeigen Ereignismacher an, die jedes Mal angezeigt werden, wenn ein Stimulus von PC1 bereitgestellt wird. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
3. EEG-Datenanalyse
HINWEIS: Diese Studie liefert genaue Richtlinien für die Replikation des Forschungskonzepts. Daher bietet es einen kurzen Überblick über den Analyseprozess und repräsentative Ergebnisse. Die detaillierten Prozesse und die damit verbundenen Ergebnisse finden Sie in einer früheren Studie17. Dies dient als Hinweis darauf, dass Mary Ann Liebert, Inc. die Erlaubnis zur Verwendung von urheberrechtlich geschütztem Material erteilt hat.
- Vorverarbeitung
- Entfernen Sie augenbezogene Artefakte aus den EEG-Rohdaten unter Verwendung mathematischer Verfahren, die auf der Hauptkomponentenanalyse basieren, die in der EEG-Datenvorverarbeitungssoftware18,19 implementiert ist (siehe Materialtabelle).
HINWEIS: Wenn eine Epoche auffällige Artefakte (± 100 μV) aufwies, wurde sie auch nach der Vorverarbeitung in einer der Elektroden von der weiteren Analyse ausgeschlossen. Die durchschnittliche Anzahl der abgelehnten Epochen, einschließlich ihrer Standardabweichung, betrug 3,69 ± 7,15 für die betroffene Handbewegungsaufgabe und 1,62 ± 3,95 für die nicht betroffene Handbewegungsaufgabe.
- Wenden Sie einen Bandpassfilter zwischen 0,1 Hz und 55 Hz an. Segmentieren Sie die vorverarbeiteten EEG-Daten von -1 s bis 3,5 s für jeden Versuch basierend auf dem Beginn der Aufgabe, um die Basisperiode zu enthalten, die für ereignisbezogene spektrale Störungen (ERSP) und funktionelle Netzwerkanalysen verwendet wird.
- ERSP-Analyse
HINWEIS: Die gemessenen EEG-Daten wurden mittels ERSP-Analyse für ein niedriges Beta-Frequenzband (12-20 Hz) validiert, das mit willkürlichen Bewegungen verbunden ist.- Führen Sie für jeden Versuch eine Kurzzeit-Fourier-Transformation durch, um die spektralen EEG-Leistungen zu berechnen, für die die newtimef-Funktion der EEGLAB-Toolbox in der Programmiersoftware verwendet wurde20 (ein nicht überlappendes Hanning-Fenster, 250 ms Fenstergröße).
- Normalisieren Sie das Leistungsspektrum jedes Versuchs, indem Sie die durchschnittliche Leistung der Ausgangsperiode (-1 bis 0 s) subtrahieren, um die Änderungen der spektralen Leistung zwischen der Handbewegungsaufgabe und der Ausgangsperiode zu untersuchen.
- Schätzen Sie die Baseline-normalisierten ERSP-Karten für jeden Patienten, indem Sie die normalisierten Leistungsspektren über Studien hinweg mitteln.
- Funktionale Netzwerkanalyse
ANMERKUNG: Es wurde eine funktionelle Netzwerkanalyse durchgeführt, um EEG-Veränderungen aus der Perspektive des Gehirnnetzwerks zu untersuchen. Um gewichtete Indizes für das gesamte Gehirnnetzwerk auf der Grundlage der Graphentheorie zu berechnen, wurde zunächst die Gehirnkonnektivität zwischen verschiedenen Regionen mit dem Phasensperrwert (PLV) berechnet. Eine funktionale Konnektivitätsmatrix wurde dann unter Verwendung der Ergebnisse der PLV-basierten Konnektivitätsanalyse berechnet, die anschließend zur Berechnung von Ganzhirn-Netzwerkindizesverwendet wurde 17. Alle funktionalen Netzwerkanalysen wurden mit Hilfe der Programmiersoftware durchgeführt.- Berechnen Sie den Hilbert-Transformations-basierten Phasensperrwert (PLV) für ein niedriges Beta-Frequenzband (12-20 Hz) mit einer hauseigenen Funktion21,22. Die hauseigene Funktion zur Berechnung der Hilbert-Transformations-basierten PLV ist in der Ergänzungsdatei 2 (myPLV.m) enthalten.
- Beurteilen Sie die PLVs zwischen allen möglichen Paaren der 32 EEG-Elektroden zu jedem Zeitpunkt während der Aufgabenperioden (0-3,5 s) und erstellen Sie eine symmetrische Adjazenzmatrix (32 x 32, Anzahl der Elektroden = 32), indem Sie die PLVs über den Aufgabenzeitraum mitteln. Verwenden Sie die PLV-Matrix als Eingabedaten für die Netzwerkanalyse17,23.
- Bewerten Sie vier gewichtete Netzwerkindizes auf globaler Ebene, die auf der Graphentheorie basieren, mit der Brain Connectivity Toolbox (https://sites.google.com/site/bctnet): (1) Stärke, (2) Clustering-Koeffizient, (3) Pfadlänge und (4) Kleinweltlichkeit 17,24,25.