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Methodenartikel

Aufklärung des Metabolismus von 2,4-Dibromphenol in Pflanzen

1.7K Aufrufe

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DOI:

10.3791/65089

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10. Februar 2023

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine einfache und effiziente Methode zur Identifizierung von 2,4-Dibromphenol-Metaboliten in Pflanzen.

Zusammenfassung

Nutzpflanzen können in großem Umfang organischen Schadstoffen ausgesetzt sein, da der Boden eine wichtige Senke für Schadstoffe ist, die in die Umwelt gelangen. Dies führt zu einer potenziellen Exposition des Menschen durch den Verzehr von Lebensmitteln, die mit Schadstoffen angereichert sind. Die Aufklärung der Aufnahme und des Stoffwechsels von Xenobiotika in Nutzpflanzen ist für die Bewertung des ernährungsbedingten Expositionsrisikos beim Menschen von entscheidender Bedeutung. Für solche Experimente erfordert die Verwendung intakter Pflanzen jedoch Langzeitexperimente und komplexe Probenvorbereitungsprotokolle, die von verschiedenen Faktoren beeinflusst werden können. Pflanzenkalluskulturen in Kombination mit hochauflösender Massenspektrometrie (HRMS) können eine Lösung für die genaue und zeitsparende Identifizierung von Metaboliten von Xenobiotika in Pflanzen darstellen, da sie Störungen durch die mikrobielle oder pilzliche Mikroumgebung vermeiden, die Behandlungsdauer verkürzen und den Matrixeffekt intakter Pflanzen vereinfachen können. 2,4-Dibromphenol, ein typisches Flammschutzmittel und endokriner Disruptor, wurde aufgrund seines weit verbreiteten Vorkommens im Boden und seines Aufnahmepotenzials durch Pflanzen als Modellsubstanz ausgewählt. Hierin wurde Pflanzenkallus aus Asepsissamen erzeugt und einem sterilen 2,4-Dibromphenol-haltigen Nährmedium ausgesetzt. Die Ergebnisse zeigten, dass nach 120 h Inkubation acht Metaboliten von 2,4-Dibromphenol im Kallusgewebe der Pflanzen identifiziert wurden. Dies deutet darauf hin, dass 2,4-Dibromphenol in den pflanzlichen Kallusgeweben schnell metabolisiert wurde. Somit ist die Pflanzenkalluskulturplattform eine effektive Methode, um die Aufnahme und den Metabolismus von Xenobiotika in Pflanzen zu bewerten.

Einleitung

Immer mehr organische Schadstoffe werden aufgrund anthropogener Aktivitäten in die Umwelt abgegeben 1,2, und der Boden gilt als wichtige Senke für diese Schadstoffe 3,4. Die Schadstoffe im Boden können von Pflanzen aufgenommen und möglicherweise auf Organismen auf höherer trophischer Ebene entlang der Nahrungsketten übertragen werden, indem sie durch den Verzehr von Pflanzen direkt in den menschlichen Körper gelangen, was zu einer unbeabsichtigten Exposition führt 5,6. Pflanzen nutzen verschied....

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Protokoll

1. Differenzierung der Karottenschwiele

HINWEIS: Autoklavieren Sie alle hier verwendeten Geräte und führen Sie alle Vorgänge in einer UV-sterilisierten, ultrareinen Werkbank durch.

  1. Vernalisieren Sie die Samen, indem Sie die gleichmäßigen Karottensamen (Daucus carota var. sativus) 16 h lang bei 4 °C in deionisiertes Wasser tauchen.
  2. Sterilisieren Sie die vernalisierten Samen 20 Minuten lang mit 75%igem Ethanol und spülen Sie sie dann dreimal mit sterilem deionisiertem Wasser unter aseptischen Bedingungen ab.
  3. Die Samen werden 20 Minuten lang mit 20 %H2O2sterilisiert und sechsma....

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Ergebnisse

Die Schritte des Protokolls sind in Abbildung 1 dargestellt. Dem Protokoll folgend, verglichen wir das Chromatogramm des Karotten-Kallusextrakts aus der 2,4-Dibromphenol-Behandlung mit den Kontrollen und fanden acht verschiedene Peaks, die in der 2,4-Dibromphenol-Behandlung vorhanden sind, aber in den Kontrollen fehlten (Abbildung 2). Dies deutet darauf hin, dass insgesamt acht Metaboliten von 2,4-Dibromphenol (M562, M545, M661, M413, M339, M380, M424 und M187) .......

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Diskussion

Dieses Protokoll wurde entwickelt, um die Biotransformation von Xenobiotika in Pflanzen effizient zu identifizieren. Der kritische Schritt dieses Protokolls ist die Kultivierung der Pflanzenkallus. Der schwierigste Teil ist die Differenzierung und Pflege des Pflanzenkallus, da der Pflanzenkallus leicht infiziert wird und sich zu Pflanzengewebe entwickelt. Daher ist es wichtig, sicherzustellen, dass alle verwendeten Geräte autoklaviert sind und alle Vorgänge unter aseptischen Bedingungen durchgeführt werden. Die Differenz.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Diese Studie wurde von der National Natural Science Foundation of China (21976160) und dem Zhejiang Province Public Welfare Technology Application Research Project (LGF21B070006) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
2,4-DichlorphenoxyessigsäureWAKO1 mg/L
20% H2O2Sinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.10011218-500ML
4-n-NP, >99%Dr. Ehrenstorfer GmbH
4-n-NP-d4Pointe-Claire
6-BenzylaminopurinWAKO0,5 mg/L
75% EthanolSinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd.1269101-500ML
7890A-5975  GaschromatographieAgilent
ACQULTY ultra-performance  FlüssigkeitschromatographieWasser
BraunglasfläschchenWasser
Inkubator für künstliches KlimaNingbo DongNan Lab Equipment Co.,LTDRDN-1000A-4
AutoklavenSTIKMJ-Serie
C18 SäuleACQUITY UPLC BEH
ZentrifugeThermo Fisher
DB-5MS KapillarsäuleAgilent
DichlormethanSigma-Aldrich40071190-4L
GefriertrocknerSCIENTZ 
Tissueschleifer mit hohem DurchsatzSCIENTZ 
MethanolSigma-Aldrich
MicrOTOF-QII MassenspektrometerBruker Daltonics
Milli-Q SystemMilliporeMS1922801-4L
Murashige & Skoog mediumHOPEBIOHB8469-7
N-HexanSigma-AldrichH109658-4L
Stickstoff-Blasinstrument AOSHENGMD200-2
NP Isomere, >99%Dr. Ehrenstorfer GmbH
Oasis HLB KartuschenWasser60 mg/3 mL
Research plusEppendorf100-1000 µ L
Samen der Zwergfinger-Karotte (Daucus carota var. sativus) Shouguang Seed Industry Co., Ltd
Schütteln  InkubatorenShanghai bluepard instruments Co., ltd.THZ-98AB
FestphasenextraktorAUTO SCIENCE
UltraschallgerätZKIUC-6
UV-sterilisierte UltrareinheitswerkbankAIRTECH

Referenzen

  1. Chakraborty, P., et al. Baseline investigation on plasticizers, bisphenol A, polycyclic aromatic hydrocarbons and heavy metals in the surface soil of the informal electronic waste recycling workshops and nearby open dumpsites in Indian metropolitan cities. Environmental Pollution. 248, 10....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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