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Optimierung der Epimedii Folium Hammelöl-Verarbeitungstechnologie und Prüfung ihrer Wirkung auf die Embryonalentwicklung von Zebrafischen

DOI:

10.3791/65096

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March 17th, 2023

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1Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, 2Bioengineering College of Chongqing University

In This Article

Summary

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In diesem Protokoll wurde die Hammelöl-Verarbeitungstechnologie von Epimedii folium (EF) durch die Anwendung einer Box-Behnken-experimentellen Design-Response-Oberflächenmethodik optimiert und der Einfluss von rohem und optimiertem wasserextrahiertem EF auf die Embryonalentwicklung von Zebrafischen vorläufig untersucht.

Abstract

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Als Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) hat Epimedii folium (EF) eine Geschichte in Medizin und Lebensmitteln, die > 2.000 Jahre alt ist. Klinisch wird EF, das mit Hammelöl verarbeitet wird, häufig als Arzneimittel verwendet. In den letzten Jahren haben die Berichte über Sicherheitsrisiken und unerwünschte Reaktionen von Produkten, die EF als Rohstoff verwenden, allmählich zugenommen. Durch die Verarbeitung kann die Sicherheit der TCM effektiv verbessert werden. Nach der TCM-Theorie kann die Verarbeitung von Hammelöl die Toxizität von EF verringern und seine tonisierende Wirkung auf die Nieren verstärken. Es fehlt jedoch an einer systematischen Erforschung und Bewertung der EF-Hammelöl-Verarbeitungstechnologie. In dieser Studie haben wir die experimentelle Design-Response-Oberflächenmethodik von Box-Behnken verwendet, um die Schlüsselparameter der Verarbeitungstechnologie zu optimieren, indem wir den Inhalt mehrerer Komponenten bewertet haben. Die Ergebnisse zeigten, dass die optimale Hammelöl-Verarbeitungstechnologie von EF wie folgt war: Erhitzen des Hammelöls auf 120 °C ± 10 °C, Zugabe des rohen EF, sanftes Braten auf 189 °C ± 10 °C, bis es gleichmäßig glänzt, und dann herausnehmen und abkühlen lassen. Pro 100 kg EF sollten 15 kg Hammelöl verwendet werden. Die Toxizitäten und Teratogenitäten eines wässrigen Extrakts aus Roh- und Hammelöl, das mit EF verarbeitet wurde, wurden in einem Entwicklungsmodell eines Zebrafischembryos verglichen. Die Ergebnisse zeigten, dass die rohe Kräutergruppe mit größerer Wahrscheinlichkeit Zebrafischdeformationen verursachte und ihre halbmaximale tödliche EF-Konzentration niedriger war. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die optimierte Hammelöl-Verarbeitungstechnologie stabil und zuverlässig war und eine gute Wiederholgenauigkeit aufweist. Bei einer bestimmten Dosis war der wässrige Extrakt von EF toxisch für die Entwicklung von Zebrafischembryonen, und die Toxizität war für das Roharzneimittel stärker als für das verarbeitete Arzneimittel. Die Ergebnisse zeigten, dass die Hammelölverarbeitung die Toxizität von rohem EF reduzierte. Diese Erkenntnisse können genutzt werden, um die Qualität, Einheitlichkeit und klinische Sicherheit von mit Hammelöl verarbeitetem EF zu verbessern.

Introduction

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Epimedii folium (EF) sind die getrockneten Blätter von Epimedium brevicornu Maxim., Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim., Epimedium pubescens Maxim., oder Epimedium koreanum Nakai. EF kann zur Behandlung von Osteoporose, Wechseljahrssyndrom, Knoten in der Brust, Bluthochdruck, koronarer Herzkrankheit und anderen Krankheiten eingesetzt werden1. Als Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) blickt EF auf eine mehr als 2.000-jährige Geschichte in Medizin und Ernährung zurück. Aufgrund seines niedrigen Preises und seiner bemerkenswerten Wirkung auf die Nieren wird es häufig in Medikamenten und gesunden Lebe....

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Protocol

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Alle tierbezogenen Versuche wurden mit Genehmigung der Versuchsethikkommission des Chongqing Instituts für TCM durchgeführt (Prüftierethik-Zertifikatsnummer: ZJS2022-03).

1. Bestimmung der bioaktiven Bestandteile

HINWEIS: Bei der in dieser Forschung verwendeten Spezies handelte es sich um Epimedium sagittatum, und die Proben wurden im Landkreis Fengdu, Chongqing, gesammelt. Die Probe wurde als trockener oberirdischer Teil von E. sagittatum (Sieb. et Zucc.) Grundsatz. von Forschern des Instituts für Biologische Medizin, Chongqing Institut für Traditionelle Chinesische Medizin.

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Results

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Methodische Untersuchungsergebnisse
Es wurde ein linearer Zusammenhang zwischen der Konzentration von Icariin, EA, EB, EC, BI und chromatographischen Peakbereichen beobachtet (siehe Tabelle 3). Die RSD%-Werte (n = 6) der chromatographischen Peakbereiche von Icariin, EA, EB, EC und BI betrugen 0,28 %, 1,22 %, 0,65 %, 1,67 % bzw. 1,06 %, was darauf hindeutet, dass die Präzision der HPLC-Messungen gut war. Die RSD%-Werte (n = 6) der Gehalte an Icariin, EA, EB, EC und BI betrugen 1,59 %, .......

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Discussion

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Unabhängige Variablen und die Bestimmung ihrer Niveaus
Die EF-Verarbeitungstechnologie wird nur in der Ausgabe 2020 des chinesischen Arzneibuchs und in den lokalen Verarbeitungsspezifikationen für chinesische Arzneimittel beschrieben, die von 26 Provinzen, Gemeinden und autonomen Regionen im ganzen Land veröffentlicht wurden1. Die Beschreibung umfasst die folgenden Schritte: Hammelöl nehmen und zum Schmelzen erhitzen, EF-Schnitzel hinzufügen, mit langsamem Feuer unter Rühren br.......

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Disclosures

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Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte.

Acknowledgements

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Diese Arbeit wird unterstützt durch das Basic Scientific Research Business Project der Chongqing Academy of Traditional Chinese Medicine (Projektnummer: jbky20200013), das Performance Incentive Guidance Project der Chongqing Scientific Research Institutions (Projektnummer: cstc2021jxjl 130025) und das Chongqing Municipal Health Commission Key Discipline Construction Project of Chinese Materia Medica Processing.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrilFisher197164
Baohuosid figure-materials-1 (Bfigure-materials-2 ) Verifizierter Lieferant - Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20042402
Chromatographische SäuleWaters CorporationSymmetry C18
Design ExpertensoftwareStat-Ease Inc., Minneapolis, MNTestversion8.0.6.1
DetektorWaters Corporation2998
DesintegratorHefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.S-FS553
Elektronische AnalysenwaageMettler-Toledo International Inc.
Epimedin A (EA)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-21112118
Epimedin B (EB)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080403
Epimedin C (EC)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080310
EthanolChongqing Chuandong Chemical (Gruppe) Co., Ltd.
Graphpad SoftwareGraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA6.02
Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)Waters Corporation2695
IcariinChengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.
MethanolChongqing Chuandong Chemical (Gruppe) Co., Ltd.
Mikroporöse MembranTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.0,22 μm m
HammelölKuoshan Zhiniu Fresh Food Store20211106
Office Excel BürosoftwareMicrosoftOffice Excel 2021
ArzneibuchSieb Shaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.R40/3
ReinwassermaschineChongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd.AT Sro 10A
Qualitatives FilterpapierShanghai Leigu Instrument Co., Ltd.18cm
StereomikroskopCarl Zeiss, Oberkochen, DeutschlandStemi 2000
UltraschallreinigerBranson Ultrasonics (Shanghai) Co.,Ltd.BUG25-12
ZebrafishChina Zebrafish Resource Center (CZRC)Der AB-Stamm
MS205DU201808012109140120171101

References

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  1. Chinese Pharmacopoeia Commission. Chinese Pharmacopoeia. Volume I. , China Medical Science and Technology Press. Beijing, China. (2020).
  2. Wang, X. T. Collection of Traditional Chinese Medicine Processing Methods. , Nanchang Science and Technology Press. Jiangxi, China. (1998).
  3. Chen, L. L., Jia, X. B., Jia, D. S.

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Epimedii FoliumMutton Oil ProcessingResponse Surface MethodBox Behnken DesignZebrafish Embryo DevelopmentHPLC AnalysisToxicity AssessmentChinese Medicine PreparationIcariin ContentTeratogenicity Testing

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