Dieses Protokoll stellt ein optimiertes Bioassay-System für abgetrennte Blätter vor, um die Wirksamkeit von entomopathogenen Pilzen (EPF) gegen die Senfblattlaus (Lipaphis erysimi (Kalt.)), ein parthenogetisches Insekt, zu bewerten. Die Methode beschreibt den Prozess der Datenerhebung während Petrischalenexperimenten und ermöglicht es den Forschern, die Virulenz von EPF gegen Senfblattläuse und andere parthenogenetische Insekten konsistent zu messen.
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Methodenartikel
Bewertung der aphidiziden Wirkung entomopathogener Pilze gegen parthenogenetisches Insekt, Senfblattlaus, Lipaphis erysimi (Kalt.)
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Senfblattlaus (L. erysimi) ist ein Schädling, der verschiedene Kreuzblütler befällt und Pflanzenviren überträgt. Um eine umweltfreundliche Schädlingsbekämpfung zu erreichen, sind entomopathogene Pilze (EPF) potenzielle mikrobielle Bekämpfungsmittel zur Bekämpfung dieses Schädlings. Daher ist ein Virulenz-Screening von EPF-Isolaten unter Petrischalenbedingungen vor der Feldanwendung notwendig. Die Senfblattlaus ist jedoch ein parthenogenetisches Insekt, was die Datenerfassung bei Petrischalenexperimenten erschwert. Um dieses Problem anzugehen, wurde ein modifiziertes System für Bioassays mit abgetrennten Blättern entwickelt, bei dem ein Mikrosprühgerät verwendet wird, um Konidien auf Blattläuse zu impfen und das Ertrinken zu verhindern, indem das Trocknen an der Luft nach der Sporensuspension erleichtert wird. Das System hielt während des gesamten Beobachtungszeitraums eine hohe relative Luftfeuchtigkeit aufrecht, und die Blattscheibe blieb über zehn Tage frisch, was eine parthenogenetische Vermehrung der Blattläuse ermöglichte. Um die Ansammlung von Nachkommen zu verhindern, wurde ein tägliches Entfernen mit einem Pinsel eingeführt. Dieses Protokoll demonstriert ein stabiles System zur Bewertung der Virulenz von EPF-Isolaten gegen Senfblattläuse oder andere Blattläuse, das die Auswahl potenzieller Isolate zur Blattlausbekämpfung ermöglicht.
Einleitung
Die Senfblattlaus (L. erysimi) ist ein berüchtigter Schädling, der eine Vielzahl von Kreuzblütlern befällt und erhebliche wirtschaftliche Verluste verursacht1. Während mehrere systematische Insektizide zur Bekämpfung des Blattlausbefalls empfohlen wurden, gibt der häufige Einsatz dieser Insektizide Anlass zur Besorgnis über die Pestizidresistenz 2,3. Im Sinne einer umweltfreundlichen Schädlingsbekämpfung könnten daher entomopathogene Pilze (EPF) als geeignete alternative Bekämpfungsstrategie dienen. EPF ist ein Insektenpathogen mit der Fähigkeit, Wirte zu infizieren, indem es i....
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Protokoll
HINWEIS: Das vollständige Flussdiagramm ist in Abbildung 1 dargestellt.
1. Sammlung und Pflege von Senfblattläusen
- Sammlung von Senfblattläusen
- Drehen Sie die Blätter um und prüfen Sie visuell auf Befall von Senfblattläusen auf Kreuzblütlern auf dem Feld.
- Zeichnen Sie die Informationen über die Probenahmestelle (z. B. GPS) und die Wirtspflanze(n) auf und bestätigen Sie die Historie der Insektizidanwendungen mit den Landwirten.
- Verwenden Sie einen Insektensauger oder einen feinen Malpinsel (siehe Materialtabelle), um etwa 50 Senfbl....
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Ergebnisse
Das vorgestellte Flussdiagramm veranschaulicht den stabilen Zustand der Senfblattläuse von der Feldsammlung bis zum Virulenzscreening. Die Pflege von Blattläusen aus der Feldsammlung sorgte für ein stabiles Wachstum der Blattlauskolonien mit einem ausreichenden Nahrungsangebot. Die im Feld gesammelten Blattläuse wurden durch die Verwendung molekularer Marker, einschließlich PCR-Amplikongröße und LeCO1-Sequenzierung, als Senfblattläuse bestätigt. Das Virulenz-Screening, das mit der Methode der abgetrennten Blätter durchge.......
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Diskussion
Kreuzblütler, eine Gruppe von Gemüsesorten, sind häufig von mehreren Blattlausarten befallen, darunter Senfblattlaus (L. erysimi) und Kohlblattlaus (Brevicoryne brassicae)26. Beide Arten wurden in Taiwan27 gemeldet, und es ist möglich, dass sie an der Sammelstelle koexistieren. Zur Unterscheidung eng verwandter Blattlausarten wurde in dieser Studie eine molekulare Identifizierungstechnik unter Verwendung eines Multiplex-Primer-Sets21
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Offenlegungen
Die Autoren erklären, dass bei dieser Arbeit kein Interessenkonflikt besteht.
Danksagungen
Diese Forschung wurde durch 109-2313-B-005 -048 -MY3 vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie (MOST) unterstützt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Impföse | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 bp DNA Ladder III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 mL Zentrifugenröhrchen | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| 6 cm Petrischale | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| 6 mm Insektensauger | MegaView Science | BA6001 | |
| 70 mm Filterpapier NO.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% Ethanol | |||
| 9 cm Petrischale | Alpha Plus Scientific | 16001 | |
| Agar | Bioman Scientific | AGR001.1 | Mikrobiologie |
| Agarose | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Safe DNA Gel Puffer | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow Gel/PCR Kit | Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf |
| Gene-Spin Genomic DNA Isolation Kit | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Hämozytometer | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Komatsuna Blätter (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Mikrosprühgerät | |||
| MiniAmp Thermocycler | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Senfblattlaus (Lipaphis erysimi) | |||
| Malpinsel | Tian Cheng Pinselfirma | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Pelletstößel | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Dextrose | Brühe HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS Statistik | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
Referenzen
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
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Nachdrucke und Genehmigungen
